线粒体甘油-3-磷酸酰基转移酶(GPAM)多克隆抗体

(共享)载脂蛋白抗体的制备

和E的抗血清。 　　（3）抗血清的保存 　　免疫成功的动物放血过程，所有用具均严格消毒，并按无菌操作方式进行放血。抗血清的防腐剂以0.05%叠氮钠为宜；也可采用加入20%～30%无菌甘油保存的方法。若时间较长，不用可采用-20℃低温保存。一般在0～8℃保存1年，抗体效价几乎无改变，保存2年，其效价稍有降低。抗体切忌反复冻融，否则抗体效价很快降低，以颈动脉一次性放血为宜。 　　2．单克降抗体的制备 　　单克隆抗体是一种高度特异性的抗体。单克隆抗体与多克隆抗体有一定的差别。抗体

Western Blot详解(原理、分类、试剂、步骤及问题解答)

的自由基。去离子水配制数ml，临用前配制.6、SDS-PAGE加样缓冲液:pH6.8 0.5mol/L Tris缓冲液8ml，甘油6.4ml，10%SDS 12.8ml，巯基乙醇3.2ml，0.05%溴酚蓝1.6ml，H2O 32ml混匀备用。按1:1或1:2比例与蛋白质样品混合，在沸水终煮3min混匀后再上样，一般为20-25μl，总蛋白量100μg。7、Tris-甘氨酸电泳 缓冲液:30.3gTris，188g甘氨酸，10gSDS，用蒸馏水溶解至1000ml，得0.25mol/L Tris

Western Blot原理、试剂配制、操作步骤

HCl调至pH6.8加水稀释到100ml终体积。过滤后40C保存。这两种缓冲液必须使用Tris碱制备，再用HCL调节PH值，而不用 Tris.CL。 5、 TEMED原溶液N，N，N’N’四甲基乙二胺催化过硫酸铵形成自由基而加速两种丙稀酰胺的聚合。PH太低时，聚合反应受到抑制。10%(w/v)过硫酸胺溶液。提供两种丙稀酰胺聚合所必须的自由基。去离子水配制数ml，临用前配制. 6、 SDS- PAGE加样缓冲液:pH6.8 0.5mol/L Tris缓冲液8ml，甘油6.4ml