动物造模丨系膜增生性肾炎动物模型

系膜增生性肾炎动物模型

系膜增生性肾小球肾炎(mesangial proliferative nephritis，MsPCN)是我国原发性肾小球肾炎中最常见的病理类型之一，约占我国原发性肾小球疾病的30%e。

制作有临床实用价值的系膜增生性肾小球肾炎动物模型，对于深人研究肾炎的发病机制，病变规律和防治措施均有重要意义；也为研究多种肾小球疾病的细胞因子提供了近似于人体的研究工具。

目前常用的系膜增生性肾小球肾炎动物模型是大鼠Thy-l 系膜增生性肾小球肾炎模型。

一、原理：

异体蛋白进人机体后刺激免疫系统产生抗体，抗原与抗体结合后产生免疫复合物并沉积于肾脏,从而产生免疫损伤。通过多次足下注射含BSA的弗氏佐剂和腹腔注射高浓度BSA的方法以提高抗体产生滴度。

采用尾静脉注射与腹腔注射交替隔天进行免疫的方法，以便维持动物体内较高的抗原浓度。

二、材料与仪器：

实验对象：大鼠。

实验试剂：麻醉剂、牛血清白蛋白。

三、实验步骤：

（一）模型的制备

1、实验动物：选择30只雄性SD大鼠，体重在160--200 g之间。首先，通过麻醉后，进行腹腔手术，切除左侧肾脏。然后，让动物休养1周以恢复健康。

2、预免疫：选择26只实验鼠进行预免疫。首先，在足垫皮下注射弗氏完全佐剂0.1 mg与3 mg牛血清白蛋白(BSA)。1.2周后加强2次。3周后，连续4次在腹腔注射BSA，每次间隔1小时，剂量分别为每只0.5、1.0、1.5、3.0 mg。次日晨再加强一次，每只2.0 mg。

3、免疫：将实验组随机分为三组：实验A组、实验B组和实验C组，每组均为7只。

实验A组：BSA尾静脉注射与腹腔注射隔天交替进行。尾静脉注射剂量从每只0.5 mg开始，每次增加0.5 mg，直至2.5 mg为止；然后继续每周增加0.5 mg至5 mg为止。腹腔注射量是尾静脉注射量的1倍。免疫2周后尾静脉注射大肠埃希菌内毒素100 mg。观察10周后处死动物。

实验B组：免疫方法同实验A组，观察7周后处死动物。

实验C组：仅进行BSA的尾静脉注射，用量同实验A组，不注射大肠埃希菌内毒素，观察7周后处死动物。

对照组（5只）：预免疫及免疫方法同实验A组，用相同体积的等渗盐水替代BSA。存活7周后处死动物。

（二）观察指标

1、血液和尿液检查：血肌酐检测；血尿素氮使用IFCC速率法。使用日立7150全自动化血液分析仪测定实验大鼠24小时尿蛋白总量、尿肌酐、尿素氮、尿沉渣涂片。收集尿样时间为免疫前、免疫后每周1次及处死前。

2、病理学检查：动物肾脏标本分别进行光镜、投射电镜和直接免疫荧光检查。使用AXIO HOME 图像分析仪对PAS染色的肾脏薄切片进行分析。每组随机选择3只动物，每只动物右侧肾脏切片1张，每张切片随机选6个肾小球（皮质3个，髓旁3个）。直接测定肾小球的总面积及各系膜面积，并计数肾小球系膜细胞数。

四、注意事项

（一）、血尿检查结果：各组实验大鼠的血浆尿素氮和血肌酐比值无明显差异。

血尿情况：在免疫2周后，有8只动物出现镜下血尿；免疫3周后，另有3只动物出现肉眼可见的血尿。

尿蛋白：所有动物在免疫前尿蛋白均为阴性。从免疫2周开始，尿蛋白出现微量，并随着时间的推移，免疫2周、3周、7周和10周时，尿蛋白总量有两次明显的上升，与免疫开始时相比差异显著。

尿生化检查：实验A组中，尿肌酐与尿蛋白的升降趋势基本一致。与对照组相比，各实验组的尿素氮和尿肌酐水平没有显著差异。

（二）、病理学检查：

光镜检查：

免疫3周后，肾小球毛细血管明显扩张，内皮细胞肿胀，有中性粒细胞浸润，肾小囊内可见血浆蛋白和红细胞。肾小管上皮细胞出现颗粒和空泡变性，并可见红细胞管型和透明管型。

免疫4周后，系膜细胞出现节段性轻度增生，部分肾小囊发生粘连。

免疫7周后，肾小球系膜细胞呈现弥漫性轻至中度增生。

免疫10周后，系膜细胞核和系膜基质明显增生，肾间质出现充血、水肿，灶状单核和淋巴细胞浸润。肾小球毛细血管基膜无明显病变。实验B组的病变程度较实验A组和实验C组为轻，对照组的肾小球结构正常。

免疫荧光检查：

免疫3周后，部分动物肾小球内可见IgG和C3在系膜区沉积，呈细颗粒状。

免疫4-7周后，所有病例均呈阳性反应，IgG和C3在系膜区沉积，表现为粗颗粒状或团块状。

免疫10周后，IgG和C3在系膜区形成大块状强阳性沉积，可能伴有肾小球毛细血管壁的沉积。对照组的免疫荧光检查结果为阴性。

电镜检查：

免疫4周后，肾小球系膜细胞出现轻度阶段性增生，上皮细胞足突呈现阶段性融合。

免疫7-10周后，系膜细胞及系膜基质增生更为明显，云雾状电子致密物沉积于系膜区，偶见于内皮下。