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- 2025年07月09日
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超滤管0.5ml 3KD
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文献和实验liteng1117 求助: 构建好了重组腺病毒进行蛋白表达，分子量是14kd，5%的浓缩胶70v，12%，或15%的分离胶110v，跑90min。湿转：100v，90min。封闭用5%的脱脂奶粉，封闭3h（因为背景深，以为封闭久会好些）。一抗1:3000，4度过夜，二抗1:5000，孵育1h，洗膜都是用TBST漂洗15min ×4次。但是显影后背景特别深，虽然可以看见目的条带，但还是有一些非特异性的条带出现，不知道是封闭出问题还是一抗浓度过高。
【求助】180KD的膜蛋白western转膜条件怎样？（湿转）
zhywang4072 鄙人现在做一180KD的蛋白，之前转PVDF膜用的是100v两个半小时，预染marker转得很漂亮，内参也很不错，但是目标蛋白条带却没有，请教各位大侠，这是什么原因？还有诸位大蛋白转膜时候条件怎样？我用的是湿转，谢谢 wodezxn 我觉得100V2h肯定是足够了，没转上应该是你目的蛋白的问题，可能是蛋白表达量太少或者你提蛋白的时间有问题。 zhibinx2007
"我想敲这个基因，帮我做个 KO 稳转株"——这句话在需求沟通里很常见，但有一半的情况下，KO 不是较优解，甚至做不出来。 先说结论：判断依据不是哪个技术更先进，而是三个问题——这个基因完全清除后细胞还活不活？你的科学问题需要"清零"还是"减量"？你能否接受敲除株长期培养带来的代偿效应？三个问题都指向"完全缺失可行"，才做 KO；否则选 KD（RNAi / CRISPRi / 蛋白降解系统）。 --- 一、先判断：这个基因能不能被完全敲掉 第一步不是设计 gRNA，而是查数据。 查公共依赖
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