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磁珠和寡核苷酸探针标记技术服务
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北京百欧泰
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文献和实验【资源】核酸杂交(Southern blot和Nouthern blot)疑惑解析-------送给新手们的礼物
原理:在变性条件下将待检的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳,继而按照同Southern Blot相同的原理进行转膜和用探针进行杂交检测。 用途:检测样品中是否含有基因的转录产物(mRNA)及其含量。 常见问题 Q1:标记方法有哪几种? A1:(1)切口平移法(2)随机引物法(3)末端标记法(4)单链DNA探针标记(5)寡核苷酸探针标记法 Q2:探针标记物的分类有几种? A2:(1)探针标记物有放射性核素与非放射性物质两种。放射性核素标记敏感性高,可检测pg水平的核酸,但因不易长期
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的识别及后续PCR问题,但是无法分辨这些只有一个或者两个碱基差异的miRNA。美国Signosis推出的新方法,使用多对寡核苷酸对目的miRNA进行识别,单个碱基差异就可以破坏寡核苷酸与靶标序列的结合,从而分辨单个碱基差异的miRNA;同时该方法不用进行方转录,避免了反转录过程中出现错配的可能;同时,这个新方法还引入了磁珠分离技术,在进行PCR前,通过结合有链霉亲和素的磁珠对特异性标记有生物素的靶标序列进行纯化,大大提高了特异性。
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