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杭州开泰生物技术有限公司
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m6A MeRIP-seq RNA甲基化测序
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一个样本
已知RNA上存在一百多种碱基修饰,其中m6A修饰为含量最高的一种修饰之一。在甲基化转移酶的作用下,腺嘌呤A发生修饰转化成m6A。而在去甲基化酶的作用下,m6A修饰重新转为普通的腺嘌呤A。下游阅读蛋白识别带有m6A修饰的RNA分子后再行使各种不同的功能,如蛋白翻译效率、RNA稳定性与降解、RNA出核转运、RNA加工与可变剪切等。
已知m6A修饰在医学、动植物研究中已成为近些年的研究热点,如肿瘤进展、疾病耐药、植物耐盐抗旱等。通过操纵特定的m6A相关的三类酶可对下游基因、蛋白、代谢调控发挥巨大作用。
以下为在哺乳动物中常见的甲基化酶对应的功能简介,2023年又发现了一类新的甲基化酶称之为外显子连接复合物(EJC)。这种EJCs为m6A抑制剂,可以保护编码序列内的外显子结合近端RNA免受甲基化,并通过m6A抑制调节mRNA的稳定性。
以下为植物常见的甲基化酶的类型与功能简介,包括常见的MTA、MTB、FIP37家族蛋白以及ALKBH9/10家族以及ECT蛋白家族等。
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文献和实验NGS已成为生命科学领域中基因组学和转录组学研究的金标准。虽然它与桑格测序等方法有某些核心相似之处,但NGS所能实现的绝对的高通量水平使它与其他方法截然不同,并彻底改变了科学家的工作方式。 RNA测序(RNA-seq)尤其处于NGS功能应用的前言沿。RNA-seq最简单的形式允许我们在取样时确定样本中的RNAs的丰度。转录组是一个高度动态的细胞特征,并打开了一个巨大发掘潜力的世界。对药物、各种疾病状态、转录后修饰和选择性剪接转录本的反应变化只是 RNA-Seq 使其能够发现的一些例子
结论:m6A 参与了 EMT 的过程,并且非常重要!!2.EMT 过程中 m6A 调控的核心基因的鉴定;既然确认 m6A 在 EMT 中存在调控功能,因此下一步就是对被调控的基因进行鉴定了。作者使用 meRIP-seq 实验,对 EMT 前后细胞中 RNA 的 m6A 修饰状况进行了研究。发现 EMT 前后 m6A 的 motif、RNA 功能区的分布和基因组上的分布都没有显著区别,但鉴定出了 128 个 m6A 修饰水平存在显著差异(1.5Fold)的基因,这些基因的功能进行分析发现与癌细胞中的粘附
其序列和结构影响转录的延伸、暂停和停顿,以及发挥染色体修饰结合和增强子的作用。nascent RNA- seq方法旨在区分新近转录的RNA和其它RNAs,这些方法可以分为4类:溴尿苷(BrU)免疫共沉淀深度测序分析( BRIC-seq ),4sU-seq,瞬时转录组测序( TT-seq),代谢标记法(SLAM-seq)(图2)。
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