组织/细胞/毛发微量基因组DNA提取试剂盒

描述：组织微量基因组 DNA 提取&PCR 试剂盒是一种可以快速从组织、小鼠尾部、单根毛发、细胞培养液、唾液、精液等动物组织中提取微量基因组DNA并通过PCR扩增进行检测的试剂盒。使用该试剂盒可以在 12min 内完成基因组DNA 提取，整个操作过程不需要离心、有机溶剂等烦杂抽提步骤。提取的基因组 DNA 可以直接用于 PCR 扩增、定量分析等实验。提取的基因组 DNA 置于 4℃至少保存 3 个月，可用于 50-100 个 PCR 反应。

特征
操作简单：应用该试剂盒无需离心、酚抽提等复杂步骤，且整个流程只需 12min。
高灵敏度：可用于提取微量样品的基因组，且可直接用于 PCR 扩增。
应用广泛：可从多种动物组织中提取基因组应用于各种相关 PCR 分析。
样品类型 所需数量
组织 1-5 mg
细胞 100-10,000 个
唾液 20 μl
毛发 1-3 根带毛囊毛发
储存若短期使用请置于 4℃可放置 3 个月；若长期保存请置于-20℃，避免反复冻融，可保存一年。

货号	产品名称	规格
XG-P3117	组织/细胞/毛发微量基因组DNA提取试剂盒	50T
XG-P3117	组织/细胞/毛发微量基因组DNA提取试剂盒	500T

操作方法
1. 取 50 μl Tissue-A Buffer 置于 200 μl 的 EP 管中。
2. 取样：不同的组织取样方法不同a.动物组织：以高压灭菌的手术剪取新鲜或冰冻的动物组织1-5 mg，不要超过 5 mg(重要)， 立即置于 Tissue-A Buffer中，短暂涡旋务必使 Tissue-A Buffer 覆盖组织。b.小鼠尾部：以高压灭菌的手术剪取小鼠尾部，不要超过 5mg，立即置于 Tissue- A Buffer 中，短暂涡旋务必使 Tissue-ABuffer 覆盖小鼠尾部组织。c. 毛发：取 1-3 根带有毛囊(重要)的毛发，取其根部置于 50μl 的 Tissue-A Buffer 中，短暂涡旋务必使 Tissue-A Buffer覆盖毛发根部。d. 唾液或口腔黏液：吸取 15 μl 的唾液或口腔黏液置于 50 μl的 Tissue-A Buffer 中，短暂涡旋以充分混匀。e. 细胞培养液：吸取 15 ul 的细胞培养液(100-10,000 个细胞)置于 50 μl 的 Tissue-A Buffer 中，短暂涡旋以充分混匀。
3. 将加有样品和 Tissue-A Buffer 的 EP 管置于 PCR 仪上95°C 加热 10min。
4. 加热结束后，加入 50 μl 的 Tissue-B Buffer，然后用移液器 Tip 吹吸混匀,切勿剧烈振荡。
5. 取步骤 4 所得溶液作为基因组模板，应用 2×Super TaqPCR Mix 进行 PCR 扩增，

PCR反应条件优化：
1、变性温度和时间：
组织/细胞/毛发微量基因组DNA提取试剂盒保证模板DNA解链完全是保证整个PCR扩增成功的关键。加热90~95°C, 30~60s，再复杂的DNA 分子也可变性为单链。温度过高或高温持续时间过长，可对Taq酶活性和dNTP分子造成损害。
2、复性温度和时间:
PCR扩增特异性取决于复性过程中引物与模板的结合。复性温度越高，产物特异性越高。复性温度越低，产物特异性越低。需根据引物的Tm值具体设定。
3、延伸温度和时间:
一般位于Taq酶最适作用温度70~75°C之间。引物小于16个核苷酸时，过高的延伸温度不利于引物与模板的结合，可以缓慢升温到70~75°C。延伸反应时间，可根据待扩增片段的长度而定，小于1kb, 1min足够；大于1kb需加长延伸时间。Taq酶可根据1kb/min增加时间。这里需要注意，延伸时间过长可能出现非特异扩增。因此需要设置恰到好处的延伸时间。
4、循环数:
其他参数选定后，PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。理论上说20〜25次循环后，PCR产物的积累即可达到最大值，实际操作中由于每步反应的产率不可能达到100%，因此不管模板浓度是多少，20~30次是比较合理的循环次数。循环次数越多，非特异扩增增加。
 

  降落PCR与温度梯度PCR的区别：
降落PCR与温度梯度PCR都是对反应体系中的退火温度进行优化，但两者在原理上有所不同。
温度梯度PCR是为了找到最适的退火温度，设置不同的退火温度进行多管PCR，将其分别放置在PCR仪中的不同温度模块进行反应，最终找到最适的退火温度，并进一步以此退火温度进行普通PCR扩增。
降落PCR是为了提高反应的特异性，通过设计一系列不断降低的退火温度，在同一PCR管内进行PCR扩增，最终获得大量的特异性扩增产物。
与温度梯度PCR相比，降落PCR更有优势。温度梯度PCR需要多次反应或多管反应找到最适的退火温度，之后还需以找到的最适退火温度再次进行PCR，才能得到较好的扩增效果，操作比较繁琐。降落PCR只需一次反应就可以获得很好的扩增效果，避免了对每对引物进行最适退火温度的优化和测定工作。
降落PCR适用于不确定引物的最适Tm值，或引物扩增效果不佳时，不了解目的模板同源性程度，使用降落PCR可以快速、特异的得到目的扩增片段。根据不同实验的需要，降落PCR还可与其它PCR方法同时使用，如实时定量降落PCR、竞争降落PCR等。
 

PCR的特点：
特异性强：使用两对引物进行扩增提高了特异性，第一轮PCR中由外引物错配产生非特异性产物，同时在第二轮PCR中内引物与错误片段配对扩增的概率极低，降低了扩增多个靶位点的可能性。
灵敏度高：进行两轮PCR扩增，可以执行更多的循环，从低拷贝样本中扩增得到足量的产物，克服了单次扩增平台期限制，提高PCR的灵敏度。

 
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