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46
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详见说明书
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详见说明书
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上海西格
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2-8℃冷藏
- 规格:
0.1PCR管/0.2PCR管
规格: 0.1PCR管/0.2PCR管
分类 PCR-荧光探针法
选择方法:
1. 明确检测何种蛋白;
2. 明确编码该蛋白的基因与其它哪些物种同源性zui好;
3. 寻找检测这些物种蛋白的试剂盒;
4. 咨询我公司使用的抗体类型;
5. 做出自己的判断该买哪个试剂盒。
动物组织匀浆的制备:
1、取组织块(0.1g~0.2g)zui少可到2~5mg在冰冷的盐水中漂洗,除去血液,滤纸拭干,准确称重,放入5ml的匀浆管中。
2、按重量(g):体积(ml)=1:9的比例加入9倍体积的匀浆介质(pH7.4, 0.01mol/L Tris-HCl,1mmol/L EDTA-2Na ,0.01mol/L蔗糖,0.8%的溶液)或者0.86%的盐水于匀浆管中,冰水浴条件下,用眼科小剪尽快剪碎组织块。
3、匀浆的方式有多种:手工匀浆,机器匀浆,超声粉碎。
① 手工匀浆:左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手将捣杆垂直插入套管中,上下转动研磨数十次(6~8分钟),充分研碎,制成10%的匀浆液。
② 机器匀浆:用组织捣碎机10000~15000 转/分 上下研磨制成10%组织匀浆,也可用内切式组织匀浆机制备(匀浆时间10秒/次,间隙30秒,连续3~5次,在冰水中进行),皮肤、肌肉组织等可延长匀浆时间。
③ 超声粉碎:用超声粉碎机进行粉碎,可用Soniprep150型超声波发生器以振幅14微米超声处理30秒使细胞破碎,也可用国产超声波发生仪,用400安培,5秒/次,间隙10秒反复3~5次。
4、将制备好的10%匀浆液用普通离心机或低温低速离心机2500转/分左右,离心10~15分钟,取上清液进行测定。
对于测定结果的判定主要分定性和定量两种:
①定性测定:定性测定的结果判断一般分为"阳性"和"阴性"两种。"阳性"表示该标本在该测定系统中有反应,"阴性"则为无反应。用定性判断法也可得到半定量结果,即用滴度来表示反应的强度,其实质仍是一个定性试验。在间接法和夹心法ELISA中,阳性孔呈色深于阴性孔。在竞争法ELISA中则相反,阴性孔呈色深于阳性孔。
②定量测定:在定量测定中,每批测试均须用一系列不同浓度的参考标准品在相同的条件下制作标准曲线。
A.测定大分子量物质的夹心法ELISA,标准曲线的范围一般较宽,曲线最高点的吸光度可接近2.0,绘制时常用半对数值,以检测物的浓度为横坐标,以吸光度为纵坐标,将各浓度的值逐点连接,所得曲线一般呈S形,其头、尾部曲线趋于平坦,中央较呈直线的部分是最理想的检测区域。
B.测定小分子量物质常用竞争法,其标准曲线中吸光度与受检物质的浓度呈负相关。标准曲线的形状因试剂盒所用模式的差别而略有不同。ELISA测定的标准曲线注意图中横坐标为对数关系,这更有利于测定系统的表达。
ELISA的操作要点:
1)标本的采取和保存:可用作ELISA测定的标本十分广泛,体液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、粪便)等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定(如血清、尿液),有些则需经预处理(如粪便和某些分泌物)。大部分ELISA检测均以血清为标本;
2)试剂的准备:所需试剂、蒸馏水、去离子水、自配的缓冲液;
3)加样:一般有3次加样步聚,即加标本,加酶结合物,加底物。
4)保温:ELISA中一般有两次抗原抗体反应,即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间,这一保温过程称为温育。
5)洗涤:洗涤的方式除某些ELISA仪器配有特殊的自动洗涤仪外,手工操作有浸泡式和流水冲洗式两种。
6)显色和比色:显色是ELISA中的最后一步温育反应,此时酶催化无色的底物生成有色的产物。比色前应先用洁净的吸水纸拭干板底附着的液体,然后将板正确放入酶标比色仪的比色架中。仪器准备为酶标仪。
7)结果判断:分定性判定和定量判定。
要点:
☆标本的采取和保存:可用作ELISA测定的标本十分广泛,体液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、粪便)等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定(如血清、尿液),有些则需经预处理(如粪便和某些分泌物)。大部分ELISA检测均以血清为标本;
试剂的准备:所需试剂、蒸馏水、去离子水、自配的缓冲液;
加样:一般有3次加样步聚,即加标本,加酶结合物,加底物。
保温:ELISA中一般有两次抗原抗体反应,即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间,这一保温过程称为温育。
洗涤:洗涤的方式除某些ELISA仪器配有特殊的自动洗涤仪外,手工操作有浸泡式和流水冲洗式两种。
显色和比色:显色是ELISA中的最后一步温育反应,此时酶催化无色的底物生成有色的产物。比色前应先用洁净的吸水纸拭干板底附着的液体,然后将板正确放入酶标比色仪的比色架中。仪器准备为酶标仪。
结果判断:分定性判定和定量判定。
猪Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 Testosterone acetate 中文名:醋酸睾酮 分子式:C21H30O3
猪Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)ELISAKit ELISA. 96T/48T Tanshinone I 568-73-0 中文名: 分子式:C18H12O3
猪0酸化细胞外信号调节激酶(pERK)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 Stigmast-4-ene-3,6-dione 23670-94-2 中文名:豆甾-4-烯-3,6-二酮 分子式:C29H46O2 度:96.0% 关键词: 抗炎; 抗过敏; 蓝蓟; 小麦; 豆甾烷; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库
猪0酸化细胞外信号调节激酶(pERK)ELISAKit ELISA. 96T/48T Stigmasta-4,22-dien-3-one 中文名:豆甾-4,22-二烯-3-酮 分子式:C29H46O
猪(NO)ELISAKit ELISA. 96T/48T Testosterone decanoate 中文名:癸酸睾酮 分子式:C29H46O3
Ethyl β-D-apiofuranoside 中文名: 分子式:C7H14O5 猪流感病毒通用型(SIV-U)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T
Ethyl rutinoside 中文名:芸香糖乙苷 分子式:C14H26O10 猪流感病毒通用型(SIV-U)核酸检测试剂盒(-PCR法) 48T
Ethyl glucoside 中文名:乙基葡萄糖苷 分子式:C8H16O6 马流感病毒H3N8型(EIV-H3N8)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T
Ethyl chlorogenate 中文名:绿原酸乙酯 分子式:C18H22O9 马流感病毒H3N8型(EIV-H3N8)核酸检测试剂盒(-PCR法) 48T
Ethyl 5-amino-4-cyano-3-(2-ethoxy-2-oxoethyl)thiophene-2-carboxylate 中文名: 分子式:C12H14N2O4S 猪球蛋白E(IgE)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Ent氧代贝壳烯烷,二醇 HPLC≥98% 5mg Rat urokinase type plasminogen activator receptor (PLAUR/uPAR) ELISA Kit 大鼠尿激酶型纤溶酶原激活物受体(PLAUR/uPAR)ELISA试剂盒
L焦谷氨酸甲酯 HPLC≥98% 5mg Rat visceral adipose specific serine protease inhibitor (vaspin) ELISA Kit 大鼠内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(vaspin)ELISA试剂盒
Momor脑苷脂I HPLC≥98% 5mg Rat visfatin / visfatin (visfatin) ELISA Kit 大鼠内脂素/内脏脂肪素(visfatin)ELISA试剂盒
N,N双(对香豆酰)亚精胺 HPLC≥98% 5mg Rat1,3-βDglucosidase,1,3-βD-GluELISAKit大鼠1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)ELISA试剂盒规格:96T/48T
N对反式香豆酰酪胺 HPLC≥98% 5mg Rat15-lipoxygenase,15-LO/LOXELISAKit大鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA试剂盒规格:96T/48T
N反式阿魏酰低聚糖甲氧基酪胺 HPLC≥98% 5mg Rat17-Hydroxycoicosteroids,17-OHCSELISAKit大鼠17羟皮质类(17-OHCS)ELISA试剂盒规格:96T/48T
N反式阿魏酰酪胺 HPLC≥98% 5mg Rat17-Hydroxyprogesterone,17-OHPELISAKit大鼠17羟孕同(17-OHP)ELISA试剂盒规格:96T/48T
N甲基瓜馥木碱甲 HPLC≥98% 5mg Rat17-ketosteroids,17-KSELISAKit大鼠17-同类(17-KS)ELISA试剂盒规格:96T/48T
ObetaD吡喃葡萄糖苷对乙烯基苯酯 HPLC≥98% 5mg Rat25-DihydroxyvitaminD3,HVD3ELISAKit大鼠25羟基维生素D3(25(OH)D3/25HVD3)ELISA试剂盒规格:96T/48T
R(+)戈米辛 M HPLC≥98% 5mg Rat26Sproteasome,26SPSMELISAKit大鼠26S蛋白酶体(26SPSM)ELISA试剂盒规格:96T/48T
沙门氏菌核酸检测试剂盒(带内参,PCR-荧光探针法)多少钱Rat urokinase (UK) ELISA Kit 大鼠尿激酶(UK)ELISA试剂盒 Ent,环氧基海松烯,二醇 HPLC≥98% 5mg
Rat urokinase type plasminogen activator receptor (PLAUR/uPAR) ELISA Kit 大鼠尿激酶型纤溶酶原激活物受体(PLAUR/uPAR)ELISA试剂盒 Ent氧代贝壳烯烷,二醇 HPLC≥98% 5mg
Rat visceral adipose specific serine protease inhibitor (vaspin) ELISA Kit 大鼠内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(vaspin)ELISA试剂盒 L焦谷氨酸甲酯 HPLC≥98% 5mg
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Rat15-lipoxygenase,15-LO/LOX大鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA试剂盒规格:96T/48T N对反式香豆酰酪胺 HPLC≥98% 5mg
Rat17-Hydroxycoicosteroids,17-OHCS大鼠17羟皮质类(17-OHCS)ELISA试剂盒规格:96T/48T N反式阿魏酰低聚糖甲氧基酪胺 HPLC≥98% 5mg
Rat17-Hydroxyprogesterone,17-OHP大鼠17羟孕同(17-OHP)ELISA试剂盒规格:96T/48T N反式阿魏酰酪胺 HPLC≥98% 5mg
Rat17-ketosteroids,17-KS大鼠17-同类(17-KS)ELISA试剂盒规格:96T/48T N甲基瓜馥木碱甲 HPLC≥98% 5mg
Rat25-DihydroxyvitaminD3,HVD3大鼠25羟基维生素D3(25(OH)D3/25HVD3)ELISA试剂盒规格:96T/48T ObetaD吡喃葡萄糖苷对乙烯基苯酯 HPLC≥98% 5mg
沙门氏菌核酸检测试剂盒(带内参,PCR-荧光探针法)多少钱ELISA测定错误的原因分析:ELISA测定出现假阳性和假阴性的结果,主要有标本因素、试剂因素和操作因素,其中标本因素主要由干扰性物质所致,分内源性和外源性两种。仅供科研使用
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文献和实验)其他方面 日本Isono[17]利用FQ-PCR进行叶绿体成熟度与其基因组拷贝数关系的研究。他们以核基因Cab作为内参照,进行叶绿体基因rbc1拷贝数测定,结果发现子叶出现以后,叶绿体基因拷贝数显著增加,进而把叶绿体的基因拷贝数增加与光诱导的叶绿体成熟过程联系起来。1998年美国Higgins等[18]还建立起一套用荧光探针检测鼠疫纤溶酶原激活基因(pla)的实验方法。 四、结语 综上所述,FQ-PCR作为一种核酸定量技术,应用较多且较成熟的主要是在病原体检测方面,其优越性在此方面也得以充分
核酸片段的技术在分子生物学研究中具有举足轻重的意义,极大地推动了生命科学的研究进展。它不仅是 DNA 分析最常用的技术,而且在 DNA 重组与表达、基因结构分析和功能检测中具有重要的应用价值。PCR 可以被认为是与发生在细胞内的 DNA 复制过程相似的技术,其结果都是以原来的 DNA 为模板产生新的互补 DNA 片段。细胞中 DNA 的复制是一个非常复杂的过程。参与复制的有多种因素。PCR 是在试管中进行的 DNA 复制反应,基本原理与细胞内 DNA 复制相似,但反应体系相对较简单。PCR 由变性
。1998年美国Higgins等[18]还建立起一套用荧光探针检测鼠疫纤溶酶原激活基因(pla)的实验方法。 4 结语 综上所述,FQ-PCR作为一种核酸定量技术,应用较多且较成熟的主要是在病原体检测方面,其优越性在此方面也得以充分体现。因此将该项技术进一步开发应用于临床,具有很大潜力。但是在遗传病和肿瘤研究方面,尤其是基因表达的研究,该技术目前应用的还较少,在此方面加强研究应用,将会有广阔的前景。
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