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- 2025年07月15日
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文献和实验Mol/L PBS 含0.05% Tween 203. 封闭液： 3%BSA（用洗涤液配制）4. 酶标抗体的稀释：用封闭液稀释5. OPD底物Buffer：Na2HPO4.12H2O 1.84g柠檬酸 0.51gDDW 100ml6. 显色液（现配现用）：底物Buffer 10mlOPD 2mg30% H2O2 2ml7. 终止液 2Mol/L H2SO48. 重组人TFAR19, HRP标记的羊抗人IgG9. ELISA板, Tip, 移液器，ELISAReader（OD490nm），洗板机操作
蛋白质印迹免疫分析（Western Blot Anglysis）
自显影或原位酶反应来确定抗原—抗体—抗抗体复合物在滤膜上的位置和丰度。 【器材】 转移电泳仪 ，硝酸纤维素膜，滤纸，剪刀，手套，小尺 【 试剂 】 1．IgG 标准品 2．羊抗人辣根过氧化物酶（HRP）标记的IgG 抗体 3．转移buffer：Tris 3.03g，Gly14.4g，甲醇200ml，加三蒸水至1000ml充分溶解，4℃
本法是以 NaIO ４ 先将 HRP 表面的糖分子氧化成醛基，然后再与 Ig 上的氨基相结合，所获酶标记抗体的产率高，将近 70 ％的 HRP 和 Ig 结合， 99 ％的 Ig 与酶结合，酶与 Ig 的活性无重大损失，是目前最常用的方法。 1. 原理：经典的过碘酸钠法中需采用二硝基氟苯封闭 HRP 上残留的α - 和ε氨基基以避免酶分子之间的交联。后来 Wilson 等改用在低 PH 下使 NaIO ４氧化 HRP ，从而省去了二硝基氟苯封闭 HRP 步骤
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