FITC标记-山羊抗人Ig

凋亡相关蛋白TFAR19蛋白的表达和细胞定位分析

TFAR19（PDCD5）是由本研究室在国际上首先报导的一个拥有自己知识产权的人类新基因，前期的功能研究表明，它是促进细胞凋亡的增强剂。利用荧光素（FITC）标记的TFAR19单克隆抗体为探针，对细胞凋亡过程中TFAR19蛋白的表达水平及定位研究发现，凋亡早期TFAR19表达水平增高并出现快速核转位现象，伴随着细胞核形态学的变化，持续较长时间，在凋亡小体中仍然可见。同时我们发现，凋亡早期TFAR19蛋白的核转位早于磷脂酰丝氨酸（PS）外翻和细胞核DNA的片段化，提示TFAR19蛋白的核转

荧光素

发射光谱为520～530nm，呈现黄绿色荧光，分子量为398.4（图3-5）。 在碱性条件下，FITC的异硫氰酸基在水溶液中与 免疫球蛋白 的自由氨基经碳酰胺化而形成硫碳氨基键，成为标记荧光 免疫球蛋白 ，即荧光 抗体 。反应式如下（图3-6）： 一个Ig分子上最多能 标记15～20个FITC分子。 图3-5　FITC的吸收光谱和发射光谱   图3-6　 抗体

B淋巴细胞膜表面免疫球蛋白（SmIg）的检查 直接免疫荧光法

一、实验原理 SmIg是B细胞的抗原识别受体，也是B细胞特异的表面标志，用直接免疫荧光法可检查出SmIg。用荧光素标记的抗Ig抗体，在一定条件下与淋巴细胞混合，荧光素标记的抗Ig抗体可以与B细胞表面的Ig结合，在荧光显微镜下观察可见B细胞膜上出现荧光。此方法可用来鉴定B淋巴细胞。 二、实验材料 1. ICR小鼠（北京大学医学部实验动物中心提供） 2. 异硫氰酸荧光素（FITC）标记的兔抗小鼠Ig抗体（购自BD公司） 3. Hank's液：pH7.4(内含