AAV/Lentivirus介导lncRNA过表达及干扰服务

原理介绍

长链非编码RNA（long non-coding RNA，LncRNA）一般指不具有蛋白编码能力，转录本长度超过200 nt的RNA分子，包括intronic/exonic lncRNAs、antisense lncRNAs、overlapping lncRNA和long intergenic ncRNAs（lincRNAs）。LncRNA与细胞周期和分化、发育、生殖、性别调控、衰老以及多种人类疾病密切相关，在转录沉默、转录激活、染色体修饰、核内运输等均具有重要的功能。

lncRNA和mRNA一样是由对应的基因转录而成，具有5’帽子和poly（A）尾巴，通过剪接形成成熟体的lncRNA。lncRNA一般无蛋白编码能力，但是有很多lncRNA能编码一些短肽，保守性较低，表达具有组织特异性以及时空特性。不同的组织表达lncRNA的量是不同的，即使是同一组织中，处于不同状态时表达量也不同。不同的lncRNA在细胞内（外）的丰度也不同。

lncRNA的功能：1、lncRNA起到miRNA海绵作用，调控靶基因表达；2、lncRNA与蛋白结合，调控蛋白功能；3、作为结构组分与蛋白质形成核酸蛋白质复合体，如lncRNA与蛋白复合物结合到基因启动子区，调控基因的转录；4、干扰邻近蛋白编码基因的表达；5、抑制RNA聚合酶Ⅱ，或介导染色质重构和组蛋白修饰，而影响基因表达；6、lncRNA与编码蛋白基因的转录本形成互补双链，干扰mRNA的剪切，进而产生不同的剪切形式；7、lncRNA与编码蛋白基因的转录本形成互补双链，在Dicer酶作用下产生内源性的siRNA，调控基因的表达水平；8、结合在特定蛋白上从而改变该蛋白的胞质定位。

图1.lncRNA在转录调控功能中的机制。LncRNAs为蓝色，编码蛋白质基因为粉红色，带有淡粉色区域指示启动子/增强子元件（Ponting CP, Oliver PL, Reik W. Cell. 2009.）

图2.LncRNA机制示意图（Wang KC, Chang HY. Mol Cell. 2011.）
 

LV介导lncRNA过表达应用实例

为探索是否LncRNA MEG3可在体内影响肿瘤形成，NOZ细胞分为感染LV-NC、LV-MEG3的2组，皮下注射到裸鼠体内，结果显示过表达MEG3显著减少肿瘤体积和重量。LV-MEG3组肿瘤组织中MEG3表达水平显著高于LV-NC组，ki67阳性率更低。

图3.体内实验证明MEG3过表达抑制GBC细胞的肿瘤发生（Jin L et al.,Cell Death Dis.,2018）
 

我司提供AAV/Lentivirus介导lncRNA过表达及干扰服务

服务说明

我司提供rAAV-LncRNA、rLV-LncRNA等lncRNA过表达载体和干扰载体构建服务，同时可选择携带各种荧光报告基因或抗性基因，适用于普通真核表达、腺相关病毒包装、慢病毒包装与稳转细胞系建立等多种用途。
 

服务流程

1、客户提交lncRNA资料（ID号或者序列）、构建要求

2、lncRNA过表达载体构建

3、病毒包装

4、稳定细胞株构建（根据客户需要选择，需要客户提供目标细胞）

 

需客户提供内容/材料

1：过表达的目的基因模板（质粒/菌液）或基因序列（基因ID）；干扰的目的基因序列（基因ID）或干扰序列/载体；

2：病毒类型选择以及要求；

3：血清型选择。

 

最终交付

1：载体构建报告；

2：合同约定的rAAV/慢病毒的滴度和病毒量；

3：rAAV/慢病毒质检报告；

4：质检报告；

5：测序文件；

6：过表达、干扰质粒/病毒/稳定细胞系。

注：过表达筛选保证3条里面有1条干扰效率达到70%以上。