PTNseq感染病原微生物（呼吸道感染）纳米孔基因检测

实时荧光定量 PCR 的原理及应用

、引物序列不同，Tm 值的差异会很大。引物的熔解温度决定了退火温度。而且模版中碱基的组合千变万化，对于特殊片断，经验公式得到的数据不一定能得出准确的结果，退火温度细微的差异对结果都可能产生决定性的影响，因而「摸条件」一度是让人很头疼的问题。梯度 PCR 的出现部分解决了一些问题——在反应过程中每个孔的温度控制条件可以在指定范围内按照梯度变化，根据结果，一步就可以摸索出最适合的反应条件。 不单退火温度，连变性温度和延伸温度都可以优化——对于多种聚合酶混合酶扩增多数高保真 Taq 酶来说这个非常重要

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载体递送系统受载量限制。但此方法无法用于体内环境，而且显微注射在技术上是一项艰巨而费力的过程。 电穿孔技术利用脉冲高压电流瞬时打开悬浮在缓冲液中细胞的细胞膜，形成纳米级孔，从而使流体动力学直径为数十纳米的成分流入细胞。与其他递送技术相比，电穿孔对细胞类型的依赖性较小，并且可以有效地将组件转移到细胞中。同样，此方法无法用于体内环境。 流体动力传递可迅速且大量的（8~10% 体重）将含有组件的溶液推入动物的血液，通常使用小鼠的尾静脉，大量液体会导致流体动力压增加，从而暂时增强对细胞的渗透性，使通常无法穿过

实时荧光定量PCR

，对于特殊片断，经验公式得到的数据不一定能得出准确的结果，退火温度细微的差异对结果都可能产生决定性的影响，因而“摸条件”一度是让人很头疼的问题。梯度PCR的出现部分解决了一些问题——在反应过程中每个孔的温度控制条件可以在指定范围内按照梯度变化，根据结果，一步就可以摸索出最适合的反应条件。 不单退火温度，连变性温度和延伸温度都可以优化——对于多种聚合酶混合酶扩增多数高保真Taq酶来说这个非常重要，因为Taq和校正酶的最佳反应温度可能有显著差异，优化延伸温度就显得很重要。使用有梯度功能的荧