CRISPR-Cas13a(Lbu)基因编辑蛋白

给你一把 CRISPR-Cas9 大剪教你玩转小鼠基因编辑

在最新出版（2016.02）的冷泉港实验指南的头版，详细阐述了 CRISPR-Cas9 系统在小鼠基因编辑中应用。 在现代生物学中，实现对小鼠基因进行编辑或许是最重要的进步之一。然而，传统基因工程手段都很费时费力。可编程核酸酶的使用极大的提高了基因编辑技术的准确性（如，锌指核酸酶、转录激活效应核酸酶），但是这些核酸酶的设计和使用仍然纷繁复杂成本高昂。随着下一代可编程核酸酶系列--CRISPR-Cas9 系统的出现，使得基因编辑的能力更加高效准确，与此同时，该系统所涉及的试剂

搞定 CRISPR/Cas9 系统操作

CRISPR/Cas9 是一种强大的基因组编辑工具，今天我们介绍 CRISPR/Cas9 系统操作。以下操作说明是基于作者冰糖个人实验室操作，仅供参考。 质粒介绍我们使用的是 Feng Zhang 实验室的系统的 pX330 质粒，如下图所示： 酶切系统 37 ℃, 3 hr；Run 1% gel，回收。Elute 到 50 mL H2O。我们利用 BbsI 消化载体形成粘末端，以利于下游 oligo 退火产物的连接；酶切时请充分，且绝对不能加 CIP 处理

CRISPR-Cas9 基因敲除 sgRNA 设计

方法（有视频），个人认为，自行查资料理解每一个元件的含义和作用，可以帮助更快的补充背景知识。通过将散落的知识点集合起来，最后拼凑成自己的知识地图。那么，为什么看起来好像这些 mRNA 都一样，怎么不只放一条完事了？不是滴。。。还有不一样的 mRNA。在学生信的时候，听到过一个词，「可变剪接」，有了初步印象之后，在这里才算是实实在在看到了，我认真的数了数，mRNA 画了 15 条，TP53 蛋白也画了 15 条。那么我们可以理解为，TP53 有 15 个亚型，当然，每个亚型都有自己的 mRNA。Step