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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 服务名称:
PRM
- 提供商:
XSL
PRM是一种基于高分辨、高精度质谱的离子监视技术,能够对目标蛋白质、目标肽段(如发生翻译后修饰的肽段)进行选择性检测,从而实现对目标蛋白质/肽段进行绝对定量。PRM技术基于Q-Orbitrap为代表的高分辨、高精度质谱平台,首先 利用四级杆质量分析器的选择能力,用Q1选择目标肽段的母离子,随后在collision cell 中对母离子进行碎裂,最后利用 Orbitrap分析器在二级质谱中检测所选择的母离子窗口内的所有碎片信息。这样即可对复杂样本中的目标蛋白质/肽段进行准 确地特异性分析。
实验意义:
PRM技术是针对无抗体蛋白的验证新技术,用于label free, iTRAQ, TMT, SILAC等相对定量蛋白质组数据的验证,或对复杂 样本中的目标蛋白质进行靶向定量分析。
实验步骤:
用PRM进行蛋白质组数据验证的一般步骤为:
用PRM对特定蛋白质进行相对/绝对定量的一般步骤为:
结果展示:
实验完成周期及交付标准:
- 实验周期:一般PRM时间为:5-10天
- 交付标准:
- 主要仪器、试剂和实验方法。
- PRM目标离子信息:肽段序列和定量子离子。
- 方法学重复性评价:三次技术重复的色谱峰面积相对标准偏差(RSD)(预实验结果)。
- 实验结果:二级图谱,XIC图谱,原始峰面积强度值,矫正后的相对表达量,两组样本间的相对比值,t test p值。
- 主要仪器、试剂和实验方法。
- PRM目标离子信息:肽段序列和定量子离子。
- 方法学评价:相对定量的重复性评价—测试样本的三次技术重复的色谱峰面积相对标准偏差(RSD)(预实验结果);
- 实验结果:
绝对定量:二级图谱,XIC图谱,原始峰面积强度值,根据标准曲线计算得到的蛋白质浓度值,两组样本间的相对比值,t test p值。
需确认的信息:
- 样品:
② 如果是组织样品,样品总量≥0.1g; 如果是细胞样品,细胞数量≥107个; ③ 如果是体液样品,血清≥200ml,脑脊液≥200ml,尿液≥1ml,泪液≥1ml。
2. 样品采集过程中使用到塑料制品时,尽量使用无色进口产品,以减少塑料制品中杂质对质谱检测的影响。
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文献和实验平行反应监测( Parallel Reaction Monitor-ing, PRM)是一种基于高分辨、高精度质谱的离子监视技术,能够对目标蛋白质、目标肽段(如发生翻译后修饰的肽段)进行选择性检测,从而实现对目标蛋白质/肽段进行绝对定量。PRM技术首先利用四级杆质量分析器(如Orbitrap系列)的选择能力,用Q1选择目标肽段的母离子;随后在collision cell中对母离子进行碎裂;最后利用高分辨、高质量精度分析器在二级质谱中检测所选择的母离子窗口内的所有碎片的信息。可对复杂样本中的目标
备注: (1)普通 label free 要求量参考 DIA 2.0/ 4D-DIA/PRM; (2)细胞、组织、FFPE 石蜡样本低于最低送样量,可选择超微量提取方法。根据样本数,可选择在 Labonline 录制超微量 4D/480 Label free 或超微量 DIA 2.0 方案。
冷冻 23 年的睾丸组织,仍能产生有活力的精子!新研究为这些患者带来福音……
表达变化相似。长期冷冻的样品在未分化的精子中显示出增强的干细胞信号传导,并且圆形精子细胞较少。对长期冷冻和短期冷冻的 DEGs 进行细胞类型特异性通路分析显示,SSC 群体中最显著的变化包括经典的 SSC 自我更新通路,如 GDNF 家族配体受体相互作用、MAPK 信号通路和癌症信号通路上调。 在不同处理组中,两个表达差异最显著的基因是 Prm1 和 Tnp1。这些基因在圆形精子细胞中表现出高度显著的差异,Prm1 在新鲜移植和短冷冻中分别比移植长冷冻高 2.0 倍和 2.3 倍。同样,Tnp
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