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  • 平行反应监测技术(PRM)实验服务
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      晶莱生物

    • 服务名称

      平行反应监测技术(PRM)实验服务

    • 规格

      实验服务

    平行反应监测技术(PRM):
    PRM是一种基于高分辨、高精度质谱的离子监视技术,能够对目标蛋白质、目标肽段(如发生翻译后修饰的肽段)进行选择性检测,从而实现对目标蛋白质/肽段进行绝对定量。PRM技术基于Q-Orbitrap为代表的高分辨、高精度质谱平台,首先利用四级杆质量分析器的选择能力,用Q1选择目标肽段的母离子,随后在collision cell 中对母离子进行碎裂,最后利用Orbitrap分析器在二级质谱中检测所选择的母离子窗口内的所有碎片信息。这样即可对复杂样本中的目标蛋白质/肽段进行准确地特异性分析。
     
    实验意义:
    PRM技术是针对无抗体蛋白的验证新技术,用于label free, iTRAQ, TMT, SILAC等相对定量蛋白质组数据的验证,或对复杂样本中的目标蛋白质进行靶向定量分析。
     
    实验步骤:  
    用PRM进行蛋白质组数据验证的一般步骤为:
    产品细节图片1
    用PRM对特定蛋白质进行相对/绝对定量的一般步骤为:
    产品细节图片2
    结果展示:
    产品细节图片3
     
    实验完成周期及交付标准:
    1. 实验周期:一般PRM时间为:5-10天
    2. 交付标准:
    组学验证:
    ① 主要仪器、试剂和实验方法。
    ② PRM目标离子信息:肽段序列和定量子离子。
    ③ 方法学重复性评价:三次技术重复的色谱峰面积相对标准偏差(RSD)(预实验结果)。
    ④ 实验结果:二级图谱,XIC图谱,原始峰面积强度值,矫正后的相对表达量,两组样本间的相对比值,t test p值。
     
    相对/绝对定量:
    ① 主要仪器、试剂和实验方法。
    ② PRM目标离子信息:肽段序列和定量子离子。
    ③ 方法学评价:相对定量的重复性评价—测试样本的三次技术重复的色谱峰面积相对标准偏差(RSD)(预实验结果);绝对定量的方法学评价—标准品XIC图谱,LOD,LOQ,线性        范围,6个稀释梯度得到的标准曲线及线性公式(每个稀释度有3次技术重复)。
    ④ 实验结果:
    相对定量:二级图谱,XIC图谱,原始峰面积强度值,矫正后的相对表达量,两组样本间的相对比值,t test p值。
    绝对定量:二级图谱,XIC图谱,原始峰面积强度值,根据标准曲线计算得到的蛋白质浓度值,两组样本间的相对比值,t test p值。
     
    需确认的信息:
    1. 样品:
    ① 如果样品为蛋白质溶液,蛋白质总量≥300mg;
    ② 如果是组织样品,样品总量≥0.1g; 如果是细胞样品,细胞数量≥107个;
    ③ 如果是体液样品,血清≥200ml,脑脊液≥200ml,尿液≥1ml,泪液≥1ml。
    2. 样品采集过程中使用到塑料制品时,尽量使用无色进口产品,以减少塑料制品中杂质对质谱检测的影响。
     
    文献参考 
    [1]  Navin Rauniyar. Parallel Reaction Monitoring: A Targeted Experiment Performed Using High Resolution and High Mass Accuracy Mass Spectrometry. Int J Mol Sci. 2015 Dec; 16(12): 28566–28581.
    [2] Amelia C. Peterson, et al. Parallel Reaction Monitoring for High Resolution and High Mass Accuracy Quantitative, Targeted Proteomics. Mol Cell Proteomics. 2012 Nov; 11(11): 1475–1488.
     
    收费标准/服务周期/提供结果:
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    该产品被引用文献
    [1]  Navin Rauniyar. Parallel Reaction Monitoring: A Targeted Experiment Performed Using High Resolution and High Mass Accuracy Mass Spectrometry. Int J Mol Sci. 2015 Dec; 16(12): 28566–28581.
    [2] Amelia C. Peterson, et al. Parallel Reaction Monitoring for High Resolution and High Mass Accuracy Quantitative, Targeted Proteomics. Mol Cell Proteomics. 2012 Nov; 11(11): 1475–1488.
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