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- 重组腺相关病毒（AAV）是一种在体外或体内实验中均被广泛使用的病毒
- 广州
- 2025年12月31日
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云舟生物科技（广州）股份有限公司
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定制服务
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①我们可以做个性化的AAV载体，从而使AAV在DNA层面就已经体现了个性化--哺乳动物基因普通表达腺相关病毒载体-载体百科 | 云舟生物 (vectorbuilder.cn)
亮点
我们的AAV载体是经过优化的，可在大肠杆菌中进行高拷贝复制，是一个包装病毒滴度高，细胞转导效率高，转基因高水平表达的载体系统。该载体可用所有已知衣壳蛋白血清型的辅助质粒进行包装，包装出来的病毒具有非常高的转导效率，且具有极高的生物安全性。
②我们可以有CRO服务筛选血清型--AAV衣壳定向进化-云舟生物 (vectorbuilder.cn)、AAV组织分布鉴定-云舟生物 (vectorbuilder.cn)
③我们的超纯化滴度足够高，且有不同版本或者说是不同质量水平的AAV
④我们可以做全链条服务--科研，CRO，CDMO
2. 不同级别的AAV比较
3. 滴度保证
我们的滴度保证仅适用于包装进病毒的区域（从5’ ITR到3’ ITR）小于腺相关病毒承载限度（4.7 kb，～野生型AAV2基因组长度）的载体。超过该范围，超出4.7 kb的那部分序列在包入衣壳时会被剪切掉，导致包装出来的AAV病毒颗粒含有不完整的基因组，不仅影响ITR qPCR滴度检测，而且影响转基因表达。此外，对于如下情况，我们同样不能保证滴度：
- AAV血清型3、4、6、6.2、2.7m8的滴度通常偏低。对于这些血清型我们保证其滴度是其它血清型最小滴度的50%。
- 包含对包装过程有不利影响的序列，例如毒性基因（如促凋亡基因）；破坏包装细胞或病毒的完整性（如导致细胞聚集的膜蛋白）的基因 ；易于重排或者产生二级结构的序列（如重复序列或者高GC含量序列）。
- ⽤户提供的载体，因为我们无法控制载体质量。
4. 试验验证
（1）三质粒转染法生产的AAV
我们开发了一系列专有技术用以优化三质粒转染法包装AAV的效率。我们的三质粒转染法包装的AAV在哺乳动物细胞中表现出很高的转导效率
我们开发了一系列专有技术用于优化我们的杆状病毒生产AAV的流程。我们的杆状病毒生产的AAV在转导哺乳动物细胞时表现出良好的转导效率。
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文献和实验PCR 过程中免不了遇到各种问题，如扩不出目的条带、有非特异性条带、空白对照出现扩增产物、扩增产物跑胶弥散或拖尾、高保真 PCR 出现突变等等。今天师兄就带大家来聊一聊 PCR 的常见问题应该如何解决。 PCR 实验包括反应体系的配置和反应程序，反应体系中有模板、引物、dNTP、酶、buffer、Mg2+，反应程序又包括预变性、变性、退火、延伸和彻底延伸。那么在 PCR 出现问题时主要是从反应体系的各个组分和反应程序上来进行调节优化。 Q1: 实验组无扩增条带 A1
病毒载体表达目的基因效果差，可能是什么原因？ 可能的原因 解决方案 AAV 血清型靶向特异性不足 测试不同的 AAV 血清型对靶标组织/细胞的特异性；通过基因工程修饰 AAV 的衣壳蛋白，改进 AAV 的靶向性 病毒量不够 做预实验进行最佳感染剂量探索，确保使用适量的病毒 启动子选择不当，目的基因表达量低 优化启动子选择，根据目标细胞类型选择合适的启动子 mRNA 翻译效率低 增加 IRES 或其他元件来增强翻译效率；调整目的基因的序列
❀ 制备AAV载体的常规方法 目前用于制备分离空衣壳（CsCl或碘克沙醇梯度）的方法对于放大是具有挑战性的并且不适合于大规模生产。此外，用于检测空衣壳的分析方法和全空粒子比的测定（电子显微镜（EM）测定，总粒子测定[ELISA]结合基因组拷贝滴定[qPCR]）耗费时间和劳动力，受操作者的影响技术或不提供用于不同血清型AAV的容易获得的试剂。
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