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云舟生物科技(广州)股份有限公司
- 服务名称:
定制服务
- 规格:
询价
云舟生物提供的重组蛋白表达服务采用多种表达平台,适用于多类应用场景,包括蛋白质结构分析、酶活测定、药物开发、医学诊断以及生物工程等。我们的定制重组蛋白表达载体和蛋白表达流程经过高度优化,可生产高质量的重组蛋白。此外,我们还可以接收客户提供的载体用于生产重组蛋白。
亮点
- 一站式解决方案: 从载体设计到大规模重组蛋白生产
- 综合性平台: 可灵活选择多种表达系统
- 定制化服务: 直观易用的线上载体设计平台上可自由添加各种蛋白标签
- 高质量: 可提供多种类型的纯化方法以及质量控制项目


质量控制
云舟生物克隆的所有载体都保证100%的序列准确性。云舟生物生产的所有重组蛋白均经过严格的质量控制(QC)。对于大多数系统,默认的质量控制包括:(1)酶切分析和Sanger测序验证蛋白质表达载体;(2)通过A260/280测量和SDS-PAGE确定蛋白质的浓度和纯度。下表列出了常见的额外QC项目服务。这些服务可根据具体需求提供。
细菌表达系统技术详情
载体系统
常见的细菌重组蛋白表达载体系统有pET、pBAD、pCS等。其中,pET载体是一种广泛使用的载体系统。在pET载体中,目的基因位于噬菌体T7启动子下游,通过在细胞内提供T7 RNA聚合酶来激活转录表达。这种系统可利用几乎所有细胞资源用于表达目的基因。下图为 pET重组蛋白表达载体的关键元件。

案例研究

图2 利用大肠杆菌系统生产的重组蛋白。(A)SDS-PAGE结果展示了重组蛋白的分子量,纯度≥95%。(B)通过SEC-HPLC测定纯度为≥95%。(C)通过细胞生长试验测定重组蛋白的生物活性。ED50介于0.5和8 ng/ml之间。
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文献和实验先来看下传统重组蛋白表达系统: 传统重组蛋白表达系统应对的挑战: 操作流程长:5天-4周时间 很多蛋白不能在细胞内成功表达 不可以改造目标蛋白 以大肠杆菌为代表的原核蛋白表达系统是常用的表达系统,具有表达量高和成本低的优点,但是蛋白质翻译后缺乏加工机制(比如形成二硫键和蛋白糖基化等),且很难保留生物活性。 以甲醇毕赤酵母为代表的酵母蛋白表达系统,具有表达量高,可诱导,糖基化机制接近真核生物等优点,但是部分蛋白产品易降解,表达量不可控。 哺乳动物细胞和昆虫细胞
对35,000个人类基因所设计),专门用于解决E.coli中重组蛋白表达的瓶颈问题。 文章一开始就提到,在E.coli中表达真核蛋白的成功率很低,限制因素之一就是细菌和哺乳细胞的密码子使用频率不同;限制因素之二mRNA的二级结构导致翻译的低效率和蛋白的低产量;限制因素之三是信号肽的存在。而使用QIAgene E.coli预制表达载体则综合考虑了密码子使用频率的问题,同时消除了容易引起mRNA的二级结构的重复序列和其他因素。针对限制因素之三的信号肽因素,我们都知道在真核细胞中,糖基化蛋白和分泌
Gateway技术提供以下可能: 通过去除冗长的亚克隆步骤节省您的时间 同时将您的基因转移到多个表达系统 在任何您选择的系统――体外,细菌,酵母,昆虫,或哺乳动物――分析表达 一、一种更好的克隆方法 Gateway技术能够克隆一个或多个基因进入到任何蛋白表达系统(图1)。这项强大的体外技术大大地简化了基因克隆和亚克隆的步骤,而同时典型的克隆效率高达95%或更高。当基因在目的表达载体之间快速简便的穿梭时,还可以保证正确的方向和阅读框。Gateway也有助于进行带不同数目
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