本试剂盒仅供科研使用
总花青素(总花色苷)含量试剂盒说明书
(货号:WS6210F 分光法 48 样 )
一、产品简介:
花青素是一种广泛存在于自然界植物中的水溶性天然色素,但是在自然状态下常与各种单糖形成糖苷
形式存在,即花色苷。它是植物细胞中可见的植物水溶性色素,存在于几乎所有的陆地植物的根、茎、叶、
花及果实中;且还具有较强的抗氧化活性,能够清除自由基。
本试剂盒采用 PH 示差法,花色苷的颜色随 PH 值的改变而发生变化,而干扰物质的特征光谱不随 PH
的改变而变化。 pH 为 1 时,花色苷以红色的 2-苯基苯并吡喃的形式存在。pH 为 4.5 时,花色苷以无色
的甲醇假碱形式存在,通过确定两个对花色苷吸光度差别最大,但是对花色苷稳定的 pH 值 (一般选择
pH 值为 1.0 和 4.5),在最大吸收波长为 700 nm 处,花色苷溶液的吸光度差值与花色苷的含量成比例,
进而计算得出花色苷总量。
二、试剂盒组分与配制:
试剂名称
规格试剂名称
保存要求
提取液
液体 50mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 30mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
液体 30mL×1 瓶
4℃保存
三、所需的仪器和用品:
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、水浴锅、可调式移液器、研钵和蒸馏水。
四、总花青素含量的测定:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
样本和试剂浪费!
1、样本制备
① 组织样本:
称约 0.05g 样品(水分充足的样本,可取样 0.5g),加入 1mL 提取液,75℃震荡提取
25min,若提取过程中提取液有损失,最后可用提取液定容至 1mL 后,室温 12000rpm,
离心 10 min,上清液待测。
【注】:若是固体干样本,先磨碎并过 40 目筛后,取 0.02g 的过筛后干样,加入 1 mL 提取液,其他步
骤同上。最后离心得到的上清液待测。
② 液体样本:
澄清的液体的样本直接测定,若浑浊则离心后取上清液检测。
2、上机检测
① 可见分光光度计预热 30min 以上,用蒸馏水调零。
② 对于含量较高的样本,可先选取 2 个样本做预测定,找出适合本次检测样本的稀释
倍数 D(用蒸馏水进行稀释即可)。
③ 在 EP 管中依次加入:
试剂名称(µL)
测定管
对照管
上清液
200
200
试剂一
600
试剂二
600本试剂盒仅供科研使用
2
室温避光平衡 60min,分别取全部澄清液体(若浑浊可 12000rpm
室温离心 5min)至 1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)中,于 530nm 和
700nm 处读值。测定管记作 A 测定=A530-A700;对照管记作 A 对照
=A530-A700;△A=A 测定-A 对照(每个样本需做一个自身对照)。
【注】:1.若A测定管于530nm处的值大于1.5,则上清液可用提取液进行稀释,稀释后的
上清液再按照上述加样表操作。稀释倍数D需代入计算公式计算。
2.若△A值小于0.01,可增加样本取样质量W,则改变后的W需代入计算公式重新计算。
五、结果计算:
1、 按照样本质量计算:
总花青素含量(mg/g)=(ΔA÷(ε×d)×V2×103×Mr)÷(W×V1÷V)×D
=0.0668×ΔA÷W×D
2、 按照样本浓度计算:
总花青素浓度(mg/mL)=(ΔA÷(ε×d)×V2×103×Mr)÷V1×D
=0.0668×ΔA×D
ε---为矢车菊-3-葡萄糖苷消光系数,26900 L/mol /cm;
Mr---为矢车菊素-3-葡萄糖苷分子量,449.2;
d---光程,1cm;
D---稀释倍数,未稀释即为 1;
V---样本提取液,1mL;
W---样本重量,g;
V1---检测操作表里上清液加样体积,200µL=0.2mL;
V2---检测总体积,800µL =8×10-4L;