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土壤亚硝酸还原酶(S-NiR)试剂盒

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  • ￥580
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  • WS0130F
  • 国内
  • 2026年01月13日
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    • 英文名：

      Soil Nitrous acid Reductase (S-NiR) Kit

    • CAS号：

      WS0130F

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      24T

    本试剂盒仅供科研使用
    土壤亚硝酸还原酶（Solid-Nitrite reductase，S-NiR）试剂盒说明书
    (货号：WS0130F 分光法 24 样)
    一、产品简介：
    土壤亚硝酸还原酶是反硝化作用的关键酶，它是由土壤反硝化细菌产生的一种还原类
    酶，参与亚硝酸盐至 NO 的还原反应，它的活性反映了生物降解过程中氮素的转化效率，
    为氮素转化规律的研究提供一定的依据。
    土壤亚硝酸还原酶可将 NO2-还原为 NO，使样品中参与重氮化反应生成（粉）红色化
    合物的 NO2-减少，该（粉）红色物质在 540nm 有最大吸收峰，通过检测 540nm 处吸光
    值的变化来反应土壤亚硝酸还原酶的活性。
    二、试剂盒组分与配制：
    试剂名称
    规格试剂名称
    保存要求
    备注
    试剂一
    液体 15mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂二
    液体 30mL×1 瓶
    4℃保存
    有沉淀，临用前混匀即可
    试剂三
    液体 12mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂会出现过饱和，临用前 25℃水
    浴，5min 即可使用。
    试剂四
    A 液 21mL×1 瓶
    4℃保存
    临用前，可依据待检测样本数量，把
    A 液和 B 液等比例混合成无色的反应
    mix（注意观察，若变粉色，则不能
    使用），两天之内用完。
    B 液 21mL×1 瓶
    标准品
    粉体 mg×1 支
    4℃保存
    若重新做标曲，则用到该试剂
    三、所需的仪器和用品：
    可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、天平、水浴锅、低温离心机、可调式
    移液器。
    四、土壤亚硝酸还原酶（S-NiR）的测定：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
    样本和试剂浪费！
    1、样本制备
    取新鲜土样风干或者 37 度烘箱风干，先粗研磨，过 40 目筛网，备用。
    【注】：土壤风干，减少土壤中水分对于实验的干扰；土壤过筛，保证取样的均匀细腻；
    2、测定步骤
    ① 可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。
    ② 在 EP 管中依次加入：
    试剂名称（
    μL）
    测定管
    无基质对照管
    无土对照管
    （仅做一次）
    土样（
    g）
    0.1
    0.1
    试剂一
    400
    400
    蒸馏水
    800
    1200
    800
    试剂二
    500
    500
    500
    混匀，且务必用封口膜封口，25℃，培养 24h
    试剂三
    200
    200
    200
    混匀，12000rpm，4℃离心 10min，上清液待用本试剂盒仅供科研使用
    2
    ③ 显色反应，②步得到的上清液用蒸馏水稀释 70 倍后，在 EP 管中依次加：
    上清液
    70
    70
    70
    反应 mix
    700
    700
    700
    混匀，25℃反应 5min（准确时间），取出全部澄清液体至 1mL 玻璃比色
    皿（光径 1cm）中，立即于 540nm 处读取 A 值，△A=A 无土对照管-（
    A
    测定管-A 无基质对照管），（每个样本需做一个自身对照）。
    【注】：若△A 值低于 0.01，可增加土壤样本取样质量 W（如由 0.1g 增至 0.25g），则改变
    后的 W 需带入公式重新计算。
    五、结果计算：
    1、标准曲线方程：y = 3.5252x - 0.0036；x 为标准品浓度（
    μmoL/mL），y 为吸光值△A。
    2、单位定义：每克土样每天还原 1μmoL 的 NO2 ˉ量为一个酶活力单位。
    S-NiR（
    μmoL/d/g 土壤）=[(△A+0.0036)÷3.5252×V1]÷W÷T×D
    =0.54×(△A+0.0036)÷W×70
    3、单位定义：每克土样每天还原 1μg 的 NO2 ˉ量为一个酶活力单位。
    S- NiR（
    μg/d/g 土壤）=[(△A+0.0036)÷3.5252×V1]÷W÷T×46×D
    =24.8×(△A+0.0036)÷W×70
    V1---反应体系总体积，1900μL=1.9mL；
    T---反应时间，24h=1d；
    W---土样实际质量，g；
    D---稀释倍数，70 倍；
    标准品的分子量---69；
    NO2 -的分子量---46。
    附：标准曲线制作过程：
    1 制备标准品母液（100μmol/mL）：把标准品完全溶解于 1mL 蒸馏水中（母液需在两
    天内用且-20℃保存）。
    2 把母液用蒸馏水稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.06, 0.12, 0.18, 0.24, 0.3.
    μmol/mL。也可根据实际样本来调整标准品浓度。
    3 依据显色反应阶段的测定管的加样顺序操作，根据结果即可制作标准曲线。

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