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- wksubio
- WS0130F
- 国内
- 2025年12月19日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Soil Nitrous acid Reductase (S-NiR) Kit
- CAS号：
WS0130F
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海瓦兰生物
- 保存条件：
4℃
- 规格：
24T
本试剂盒仅供科研使用
土壤亚硝酸还原酶（Solid-Nitrite reductase，S-NiR）试剂盒说明书
(货号：WS0130F 分光法 24 样)
一、产品简介：
土壤亚硝酸还原酶是反硝化作用的关键酶，它是由土壤反硝化细菌产生的一种还原类
酶，参与亚硝酸盐至 NO 的还原反应，它的活性反映了生物降解过程中氮素的转化效率，
为氮素转化规律的研究提供一定的依据。
土壤亚硝酸还原酶可将 NO2-还原为 NO，使样品中参与重氮化反应生成（粉）红色化
合物的 NO2-减少，该（粉）红色物质在 540nm 有最大吸收峰，通过检测 540nm 处吸光
值的变化来反应土壤亚硝酸还原酶的活性。
二、试剂盒组分与配制：
试剂名称
规格试剂名称
保存要求
备注
试剂一
液体 15mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
液体 30mL×1 瓶
4℃保存
有沉淀，临用前混匀即可
试剂三
液体 12mL×1 瓶
4℃保存
试剂会出现过饱和，临用前 25℃水
浴，5min 即可使用。
试剂四
A 液 21mL×1 瓶
4℃保存
临用前，可依据待检测样本数量，把
A 液和 B 液等比例混合成无色的反应
mix（注意观察，若变粉色，则不能
使用），两天之内用完。
B 液 21mL×1 瓶
标准品
粉体 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、天平、水浴锅、低温离心机、可调式
移液器。
四、土壤亚硝酸还原酶（S-NiR）的测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备
取新鲜土样风干或者 37 度烘箱风干，先粗研磨，过 40 目筛网，备用。
【注】：土壤风干，减少土壤中水分对于实验的干扰；土壤过筛，保证取样的均匀细腻；
2、测定步骤
① 可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。
② 在 EP 管中依次加入：
试剂名称（
μL）
测定管
无基质对照管
无土对照管
（仅做一次）
土样（
g）
0.1
0.1
试剂一
400
400
蒸馏水
800
1200
800
试剂二
500
500
500
混匀，且务必用封口膜封口，25℃，培养 24h
试剂三
200
200
200
混匀，12000rpm，4℃离心 10min，上清液待用本试剂盒仅供科研使用
2
③ 显色反应，②步得到的上清液用蒸馏水稀释 70 倍后，在 EP 管中依次加：
上清液
70
70
70
反应 mix
700
700
700
混匀，25℃反应 5min（准确时间），取出全部澄清液体至 1mL 玻璃比色
皿（光径 1cm）中，立即于 540nm 处读取 A 值，△A=A 无土对照管-（
A
测定管-A 无基质对照管），（每个样本需做一个自身对照）。
【注】：若△A 值低于 0.01，可增加土壤样本取样质量 W（如由 0.1g 增至 0.25g），则改变
后的 W 需带入公式重新计算。
五、结果计算：
1、标准曲线方程：y = 3.5252x - 0.0036；x 为标准品浓度（
μmoL/mL），y 为吸光值△A。
2、单位定义：每克土样每天还原 1μmoL 的 NO2 ˉ量为一个酶活力单位。
S-NiR（
μmoL/d/g 土壤）=[(△A+0.0036)÷3.5252×V1]÷W÷T×D
=0.54×(△A+0.0036)÷W×70
3、单位定义：每克土样每天还原 1μg 的 NO2 ˉ量为一个酶活力单位。
S- NiR（
μg/d/g 土壤）=[(△A+0.0036)÷3.5252×V1]÷W÷T×46×D
=24.8×(△A+0.0036)÷W×70
V1---反应体系总体积，1900μL=1.9mL；
T---反应时间，24h=1d；
W---土样实际质量，g；
D---稀释倍数，70 倍；
标准品的分子量---69；
NO2 -的分子量---46。
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（100μmol/mL）：把标准品完全溶解于 1mL 蒸馏水中（母液需在两
天内用且-20℃保存）。
2 把母液用蒸馏水稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.06, 0.12, 0.18, 0.24, 0.3.
μmol/mL。也可根据实际样本来调整标准品浓度。
3 依据显色反应阶段的测定管的加样顺序操作，根据结果即可制作标准曲线。
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