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- 2025年07月15日
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详见说明书
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海西格
- 保存条件：
4°C保存
- 规格：
100T/盒
注意事项：
PATCHED/PTC mRNA原位杂交试剂盒100T/盒由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。
产品名称 PATCHED/PTC mRNA原位杂交试剂盒100T/盒
规格 100T/盒
特异性 人
标记方式 3’—尾段标记
保存条件 4°C保存一年
试剂盒内容 1.PATCHED/PTC 寡核苷酸探针杂交液 2ml；
2.预杂交液 2ml；
3.胃蛋白酶（×10;Pepsin） 2ml；
4.封闭液 5ml；
5.生物素化鼠抗5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
准备工作：
产品仅供科研固定液：4%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)；1%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加氯化钠17.6g，柠檬酸三钠(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加氯化钠30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
特点：
1. 安全、快速、重复性好；
2. 特异性100%，灵敏度超过90%；
3. 探针性能稳定，低温保存一年以上；
4. 荧光信号强，结果判定直观可靠；
5. 操作简单，定位精准，无实验污染。
操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
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3-Amino-5-mercapto-1,2,4-triazole 中文名：3-氨基-5-巯基-1,2,4-三唑 分子式：C2H4N4S 总蛋白S 英文名称： total protein S 规格： 48T/96T 英文缩写： TPS
3-Amino-4-methylbenzamide 中文名：3-氨基-4-甲基苯甲酰胺 分子式：C8H10N2O 坏死因子相关凋亡诱导配体 英文名称： tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand 规格： 48T/96T 英文缩写： AIL/APO 2L
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人可溶性白细胞抗原G(sHLA-G)ELISAKit ELISA. 96T/48T Capecitabine 中文名：卡培他滨 分子式：C15H22FN3O6
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普氏立克次体(RP)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T 3-Amino-3-phenylpropionic acid 中文名：C9H11NO2 分子式：C9H11NO2 度：98.0%
葡萄糖氧化酶（GOD）测试盒 可见分光光度法 50管/48样 Pirfenidone 中文名：哌非尼酮 分子式：C12H11NO
葡萄糖激酶 英文名称： Human Glucokinase 规格： 48T/96T 英文缩写： GCK Androstanolone heptanoate 中文名：雄诺龙庚酸酯 分子式：C26H42O3 度：98.0%
葡萄糖-6-0酸脱氢酶（G－6－PD）检测 BN N-ACETYL-D-GLUCOSAMINIDASE (NAG) detection Prilocaine 1786-81-8 中文名：盐酸丙胺卡因 分子式：C13H21ClN2O
葡萄糖60酸脱氢酶 英文名称： Human Glucose 6 Phosphate Dehydrogenase 规格： 48T/96T 英文缩写： G6PD Androstanolone heptanoate 中文名：雄诺龙庚酸酯 分子式：C26H42O3
PATCHED/PTC mRNA原位杂交试剂盒100T/盒N-Acetyl-D-tryptophan
2280/1/5
中文名：N-乙酰基-D-色氨酸 分子式：C13H14N2O3 三0酸腺苷酶 英文名称： Adenosine iphosphate 规格： 48T/96T 英文缩写： ATP
Allyl cinnamate 1866-31-5 中文名：肉桂酸烯丙酯 分子式：C12H12O2 紧张素Ⅱ一型受体抗原 英文名称： Angiotensin 2 Receptor 1 Aigen 规格： 48T/96T 英文缩写： AT1R
2-Aminofluorene 153-78-6 中文名：2-氨基芴 分子式：C13H11N 抗紧张素‖受体︱型自身抗体 英文名称： Angiotensin 2 Receptor 1 Aoaibodies 规格： 48T/96T 英文缩写： AT1R-AA
(1R,2S)-1-Amino-2-indanol 136030-00-7 中文名：(1R,2S)-1-氨基-2-茚醇 分子式：C9H11NO 紧张素Ⅰ 英文名称： AngiotensinⅠ 规格： 48T/96T 英文缩写： ANGⅠ
Amitraz 33089-61-1 中文名：双甲眯 分子式：C19H23N3 三(羟甲基)基盐酸盐 100g
PATCHED/PTC mRNA原位杂交试剂盒100T/盒由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。
| 产品名称 | PATCHED/PTC mRNA原位杂交试剂盒100T/盒 |
| 规格 | 100T/盒 |
| 货号 | XG-Y7358 |
产品名称 PATCHED/PTC mRNA原位杂交试剂盒100T/盒
规格 100T/盒
特异性 人
标记方式 3’—尾段标记
保存条件 4°C保存一年
试剂盒内容 1.PATCHED/PTC 寡核苷酸探针杂交液 2ml；
2.预杂交液 2ml；
3.胃蛋白酶（×10;Pepsin） 2ml；
4.封闭液 5ml；
5.生物素化鼠抗5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
准备工作：
产品仅供科研固定液：4%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)；1%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加氯化钠17.6g，柠檬酸三钠(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加氯化钠30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
特点：
1. 安全、快速、重复性好；
2. 特异性100%，灵敏度超过90%；
3. 探针性能稳定，低温保存一年以上；
4. 荧光信号强，结果判定直观可靠；
5. 操作简单，定位精准，无实验污染。
操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
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3-Amino-5-phenylpyrazole 中文名：3-氨基-5-苯基吡唑 分子式：C9H9N3 血小板生成素 英文名称： Thromboietin 规格： 48T/96T 英文缩写： TPO
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3-Amino-4-methylbenzamide 中文名：3-氨基-4-甲基苯甲酰胺 分子式：C8H10N2O 坏死因子相关凋亡诱导配体 英文名称： tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand 规格： 48T/96T 英文缩写： AIL/APO 2L
3-Amino-4-hydroxybenzoic acid 中文名：3-氨基-4-羟基苯甲酸 分子式：C7H7NO3 坏死因子相关凋亡诱导配体受体1 英文名称： tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand receptor 1 规格： 48T/96T 英文缩写： AIL R1
人可溶性白细胞抗原G(sHLA-G)ELISAKit ELISA. 96T/48T Capecitabine 中文名：卡培他滨 分子式：C15H22FN3O6
人可溶性P选择素(sP-selectin)ELISAKit ELISA. 96T/48T Tigecycline 中文名： 分子式：C29H39N5O8
人抗心0脂抗体IgM(ACA-IgM)ELISAKit ELISA. 96T/48T Tigogenin 77-60-1 中文名：剑麻皂素 分子式：C27H44O3 度：98.0% 关键词： 毛地黄属; 万年兰属; 螺甾烷; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库
人抗心0脂抗体IgG(ACA-IgG)ELISAKit ELISA. 96T/48T Tigogenin 77-60-1 中文名：剑麻皂素 分子式：C27H44O3
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普氏立克次体(RP)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T 3-Amino-3-phenylpropionic acid 中文名：C9H11NO2 分子式：C9H11NO2 度：98.0%
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2-Aminofluorene 153-78-6 中文名：2-氨基芴 分子式：C13H11N 抗紧张素‖受体︱型自身抗体 英文名称： Angiotensin 2 Receptor 1 Aoaibodies 规格： 48T/96T 英文缩写： AT1R-AA
(1R,2S)-1-Amino-2-indanol 136030-00-7 中文名：(1R,2S)-1-氨基-2-茚醇 分子式：C9H11NO 紧张素Ⅰ 英文名称： AngiotensinⅠ 规格： 48T/96T 英文缩写： ANGⅠ
Amitraz 33089-61-1 中文名：双甲眯 分子式：C19H23N3 三(羟甲基)基盐酸盐 100g
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文献和实验相关实验
外。配体蛋白结合到胞外域后诱导蛋白切断并释放胞内域，胞内域进而进入细胞膜并调控基因表达。Notch 信号通路提升了神经增殖过程中的增殖信号，而其活性被 Numb 所抑制，以促进神经分化。他在胚胎发育中起到重要的调控作用。8. Hedgehog signaling pathwayHedgehog 通路调控机制：Hh 信号传递受靶细胞膜上两种受体 Patched (Ptc) 和 Smoothened (Smo) 的控制。受体 Ptc 由肿瘤抑制基因 Patched 编码，是由 12 个跨膜区的单一肽链构成
之后而导致乳腺癌。卷曲蛋白（Frz）作为Wnt受体，其胞外N端具有富含半胱氨酸的结构域， Frz作用于胞质内的蓬乱蛋白（Dsh），Dsh能切断β-catenin的降解途径，从而使β-catenin在细胞质中积累，并进入细胞核，与T细胞因子（TCF/LEF）相互作用，调节靶基因的表达。 Hedgehog信号通路 Hedgehog是一种共价结合胆固醇的分泌性蛋白，在动物发育中起重要作用。果蝇的该基因突变导致幼虫体表出现许多刺突，形似刺猬，故名Hedgehog。两个跨膜蛋白Patched（Ptc
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