快速内切酶EcoRI

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产品描述：

产品名称：快速内切酶EcoRI

描述: 爱必信的快速内切酶是一系列经过基因工程重组、能够在5~15分钟内精确完成DNA切割的限制性内切酶，适用于质粒DNA、PCR产物或基因组DNA等的快速酶切。爱必信的快速内切酶具有如下特点：5~15分钟内即可完成酶切；共用一种酶切Buffer，大大简化酶切反应体系；良好的酶活冗余度，轻松应对底物过量或困难模板酶切。此外，爱必信生物去磷酸化、连接试剂在配套的Buffer中具有100%活性，支持一管化反应，提升“酶切-修饰-连接”的体验。
识别位点：
5'...G ↓ A A T T C ...3'
3'...C T T A A ↑ G ...5'
同裂酶：FunII
注： 同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性。

产品组分：

使用方法:

1. DNA 快速酶切流程：
① 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：

储存/保存方法: -20℃，有效期2年。

技术指标: 建议的反应条件：
1× Cut  缓冲液；
37℃温育；
参照“DNA 快速酶切流程”配制反应体系。
失活条件：
80℃温育 20 min。
质量控制：
功能活性检测：
最适反应温度下，在 20 μl 反应体系中，1 μl EcoRI
能够在 15 min 内完全消化 1 μg λDNA。
超长时间温育检测：
最适反应温度下，将 1 μlEcoRI 与 1 μg λDNA 共同温育 3 h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解，延时酶切可能出现星号活性。
酶切 - 连接 - 再酶切检测：
最适反应温度下，使用 1 μl EcoRI 消化底物，回收酶切产物。在 22℃下使用适量 Fast T4 DNA Ligase 可以将酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。
非特异性内切酶活性检测：
最适反应温度下，将 1 μl  EcoRI 与 1 μg 超螺旋质粒DNA 共同温育 4 h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，质粒 DNA 仍然处于超螺旋状态。
蓝白斑检测：
将含有单一 lacZα 基因的载体以 1 μl EcoRI 消化，重新连接后转化入大肠杆菌感受态细胞，涂布在含有对应抗生素、IPTG 和 X-gal 的 LB 培养基平板上。连接正确的产物会生长出蓝色菌落，而连接错误（即 DNA 末端切口不完整）的产物将得到白色菌落。对于爱必信的系列限制酶而言，白色菌落比例应小于 1%。

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