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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
低温保存
- 保质期:
6个月
- 英文名:
NADH-GOGAT测试盒
- 库存:
535
- 供应商:
江西江蓝纯生物有限公司
- 规格:
50管/48样
测定方法:分光光度法
测定规格:50管/48样
保存条件:低温避光保存
测定意义:
GOGAT分布于植物中,和谷氨酰胺合成酶共同构成GS/GOGAT循环,参与氨同化的调控。
测定原理:
GOGAT催化谷氨酰胺的氨基转移到α-酮戊二酸,形成两分子的谷氨酸;同时NADH氧化生成NAD+,340nm吸光度的下降速率可以反映GOGAT活性大小。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
测定步骤:
1、分光光度计预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
2、样本测定
(1)工作液的配制:在试剂二中加入25mL试剂一充分溶解混匀,置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴5min;现配现用(配后3h内用完);
(2)取0.1mL样本和0.9mL工作液于1mL比色皿中,混匀,加工作液的同时开始计时,在340 nm波长下记录20秒时的初始吸光度A1和5分20秒时的吸光度A2,计算ΔA=A1-A2。
注 意: 正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
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文献和实验亦称谷氨酰胺 -2-氧代(α酮)戊二酸氨基转移酶。缩写为 GOGAT。此酶可催化谷氨酰胺的胺基在 NAD( P) H或还原型铁氧还蛋白的存在下,还原转移于α -酮戊二酸,生成 2分子谷氨酸: L-谷氨酰氨 α -酮戊二酸 [2H]→ 2L-谷氨酸也可以说是以谷氨酰胺的胺基为氨供体还原α -酮戊二酸为谷氨酸的酶。是含 Fe及 S的黄素酶, EC1, 4, 1, 13( NADPH), 1, 4, 1, 14( NADH), 1, 4, 7, 1(含铁氧还素
酸脱氢酶催化又氧化生成草酰乙酸并释出NADH,还原当量从复合体I进入呼吸链经CoQ、复合体Ⅲ、Ⅳ传递,最image/005061360后给氧,所以仍可产生3分子ATP,与在线粒体内产生的NADH氧化相同。与此同时线粒体内的α酮戊二酸由于与苹果酸交换而减少,需要补充,于是在转氨酶作用下由谷氨酸与草酰乙酸进行转氨基反应,生成α酮戊二酸和天冬氨酸,天冬氨酸借线粒体膜上的谷氨酸天冬氨酸 载体 转移系统与胞液的谷氨酸交换,从而补充了线粒体内谷氨酸由于转氨基作用而造成的损失,进入胞液的天冬氨酸再与胞液
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