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- 基因沉默shRNA载体设计与构建
- 武汉
- 2026年04月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商：
BrainVTA
- 服务名称：
基因沉默shRNA载体设计与构建服务
腺相关病毒（Adeno-associated Virus, AAV）属于细小病毒科（parvoviridae），是迄今发现的一类结构最简单且无法自主复制的线性单链DNA缺陷型病毒，对分裂的细胞和非分裂细胞均具有感染力。研究中采用的重组腺相关病毒载体（Recombination adeno-associated virus, rAAV）是在非致病的野生型AAV的基础上改造的基因载体，具有种类多样、免疫原性低、安全性高、宿主范围广、扩散能力强、体内表达基因时间长等特点，已被广泛的应用在动物水平的基因表达、基因操作和基因治疗，rAAV被视为最有前途的基因研究和基因治疗载体。
RNA干扰（RNA interfering, RNAi）现象是由靶基因RNA序列与其互补的单链siRNA形成的RISC（RNA介导的转录沉默复合物）结合引发的广泛存在于生物体内的序列特异性基因转录后的沉默过程。由于RNAi具有高度的序列专一性，可以特异地沉默基因，从而获得基因功能丧失或基因表达量的降低。因此可以作为功能基因组学研究的一种强有力的工具。在实际应用中，通过AAV病毒载体表达shRNA进行RNAi已经非常成熟，能够有效、快捷和持久地干扰体内基因的表达。广泛应用到基因功能研究，药物靶点筛选，细胞信号传导通路分析和疾病治疗等方向。
应用
1．基因功能研究：RNAi具有高效特异性抑制基因表达的特点，运用AAV介导shRNA干扰可以调控基因表达，进而研究基因功能；
2．信号通路研究：AAV介导shRNA干扰具有宿主范围广，干扰能力强，持续时间长等特点，可以运用该技术进行体内体外相关信号通路及作用机制的研究；
3．构建疾病模型：通过AAV介导shRNA干扰可构建转基因小鼠模型；
4．基因治疗：AAV介导shRNA干扰被用于基因表达异常升高引起的疾病，如：肿瘤和病毒感染等；
5．药物开发：利用RNAi特异性高效地抑制基因的表达，获得基因功能抑制表型，进而大规模地筛选出基因靶点，从而实现短时间内药靶在细胞水平和动物水平的筛选和评定。
产品列表
| 可选择的rAAV-shRNA干扰载体 | ||||
|---|---|---|---|---|
| 功能描述 | 编号 | 产品名称 | Cre 依赖 |
标签 |
| 直接表达 shRNA |
PT-0916 | rAAV-U6- shRNA(scramble) -CMV-EGFP-pA | EGFP | |
| PT-0923 | rAAV-U6- shRNA(scramble) -CMV-mcherry-pA | mCherry | ||
| 结合cre实现 特异性干扰 |
PT-0900 | rAAV-Ef1α-mCherry-U6-Loxp-CMV-EGFP-loxp-shRNA(scramble) | Cre 依赖 |
mCherry |
| PT-0941 | rAAV-U6-loxp-CMV-EGFP-loxp-shRNA(scramble)-pA | Cre 依赖 |
EGFP | |
| PT-0967 | rAAV-U6-loxp-CMV-mCherry-loxp-shRNA(scramble)-pA | Cre 依赖 |
mCherry | |
| miR-30a特异性 干扰系类 |
PT-0933 | PFD-rAAV-hSyn-EGFP-5'miR-30a-shRNA(scramble)-3'-miR30a-WPREs | EGFP | |
| PT-1330 | PFD-rAAV-GFAP-EGFP-5'miR-30a-shRNA(scramble)-3'-miR30a-WPREs | EGFP | ||
| 备注：scramble为无效序列：CCTAAGGTTAAGTCGCCCTCG；shRNA(scramble) Target Gene: None in human and mouse | ||||
| 更多腺相关病毒rAAV载体信息，欢迎咨询枢密科技 | ||||
产品优势
● 载体种类多：广谱性和特异性干扰载体全，满足您的需求；
● 安全性高：目前未发现AAV对人体有致病性；
● 免疫原性低：感染AAV的细胞，很少被免疫系统清除；
● 感染谱广：几乎所有处于分裂和非分裂的细胞均可被AAV感染；
● 扩散性强：可穿透血脑屏障，是最理想的神经元和胶质细胞感染工具；
● 高稳定性：对氯仿等试剂有抗性；
● 特异性强：rAAV有十几种常用血清型，对不同的脏器有较高的识别及感染能力；
● 表达时间长：rAAV在组织中最长可持续表达6个月以上。
服务说明
服务内容
1：设计干扰序列：设计三条干扰序列或客户提供干扰序列；
2：干扰载体构建以及筛选检测；
3：rAAV干扰病毒包装与纯化；
4：滴度检测。
服务流程
客户提供
1：干扰的目的基因模板（质粒/菌液）或基因序列（序列/ID）；
2：病毒类型选择以及要求；
3：血清型选择。
最终交付
1：载体构建报告；
2：合同约定的rAAV病毒量；
3：rAAV质检报告。
案例展示
1. Lewandowski等人用AAV介导表达shRNA抑制成年大鼠的PTEN的表达，导致核糖体蛋白pS6磷酸化增加。
图1 成年大鼠皮质内注射AAV抑制PTEN的表达。（Lewandowski, et al.,Journal of Neuroscience, 2014）
2. Saal等人用AAV表达shRNA抑制ROCK2的表达，可减轻多巴胺能神经元在毒素诱导的帕金森病模型中的退变。
图2 AAV介导的shRNA体外特异性抑制ROCK2表达（Saal et al.,Neurobiology of Disease, 2015）
参考文献
1. Lewandowski, G., and Steward, O. (2014). AAVshRNA-mediated suppression of PTEN in adult rats in combination with salmon fibrin administration enables regenerative growth of corticospinal axons and enhances recovery of voluntary motor function after cervical spinal cord injury. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience 34, 9951-9962.
2. Saal K A , Koch J C , Tatenhorst L , et al. AAV.shRNA-mediated downregulation of ROCK2 attenuates degeneration of dopaminergic neurons in toxin-induced models of Parkinson"s disease in vitro and in vivo[J]. Neurobiology of Disease, 2015, 73:150-162.
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文献和实验RNA干扰(RNAi)而获此殊荣。 他们发现,双链RNA会使与之同源的基因沉默,并将这种作用命名为RNAi。这种生化机制在细胞的基本活动中扮演着重要角色,植物、动物和人体组织中均可见到RNAi这种特殊的基因表达控制方式。RNAi可抵抗RNA病毒感染(尤其是在植物和无脊椎动物中),并可削弱跳跃基因[(jumping gene)即转座子(transponson)]对基因组的影响。现在该技术已经被广泛用于对基因功能的研究,并可能在未来发展成为一种新的治疗方法。 细胞中的信息流:DNA→
1. 引言 转录后水平基因沉默（PTGS) ，又被称为 RNA 沉默，是指在植物中导入双链 RNA (dsRNA) 、外源基因或病毒而引起与之同源的植物基因下调表达。在 PTGS 过程中，目的基因能转录，但转录产物由于迅速被降解而不能积累 [1 , 2 ] 。RNA 干扰（RNAi ) 过程中 dsRNA 直接诱导与其同源的特异 mRNA 降解 [3~5 ] 。RNAi 的发现和对它的分子解析是现代科学史上最重要的技术突破之一。十几年前，在植物和真菌中，人们无意中发现 RNA 均能抑制
RNA干扰 RNA干扰（RNA interference，缩写为RNAi）是指一种分子生物学上由双链RNA诱发的基因沉默现象，其机制是通过阻碍特定基因的翻译或转录来抑制基因表达。当细胞中导入与内源性mRNA编码区同源的双链RNA时，该mRNA发生降解而导致基因表达沉默。RNAi在基因沉默(silent gene)方面具有高效性和简单性，所以是基因功能研究的重要工具。 siRNA是一类长约21～25 个核苷酸的双链小RNA分子，可作为一种特殊引物,在RNA 依赖RNA聚合
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