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- 武汉
- 2026年01月05日
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平板克隆形成实验
克隆形成实验检测每一个细胞扩增为一个克隆的能力，是一种在体外条件下评估细胞生存能力和增殖能力的方法。
实验步骤
DAY1
制备单细胞悬液，加到六孔板，每组依次（100/200/400个细胞），每孔2mL培养基，培养过夜。
DAY2-3
加药处理48小时。
DAY4-?
培养2-3周直到形成克隆（认为超过50个细胞的群是一个克隆），每2-3天换一次液，拍照，计数。
mitomycin C：属烷化剂，为生物还原性抗生素，可与DNA发生交叉联结，使DNA解聚，阻止DNA的复制过程。mitomycin C为细胞周期非特异性药物，作用于G1、G2及M期，并对S/G2期有延缓作用。10μM丝.裂霉素C (Mitomycin C)处理宫颈癌细胞系HeLa细胞，对照组添加等量DMSO，48小时后撤掉药物，培养一段时间后，细胞形成克隆，比较两组克隆数可知丝.裂霉素C抑制了HeLa细胞增殖。
细胞克隆形成率即细胞接种存活率，表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量。贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆，而形成克隆的细胞是能够贴壁并且有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力。
平板克隆实验检测沉默RSF-1的乳腺癌细胞系MCF-7/SKBR3的增殖能力
（Oncol Lett. 2018 Oct; 16(4): 4279–4284.）
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文献和实验vera21173 我研究的是一个基因对肿瘤细胞增殖的影响，上调这个基因的表达可以促进细胞增殖（CCK-8和平板集落形成实验的结果一致），下调这个基因的表达可以抑制细胞增殖。但有平板集落形成实验有一个奇怪的现象，稳转这个基因的细胞集落形成数量明显比空载细胞多，但集落大小比空载细胞小很多，镜下观察发现空载细胞形成的集落中的细胞很分散，而稳转目的基因的细胞集落中细胞很紧密。请问这能说明什么问题？ zhouyongchun_1
细胞集落形成实验 非整倍体无限细胞系和癌细胞株中，仍然存在不同细胞亚群，它们的功能和生长特点有些差异，其中有些亚群细胞对培养环境有较大的适应性和具有较强的独立生存能力，细胞集落率高。纯化细胞群来自一个共同的祖细胞，细胞遗传性状、生物学特性相似，利于实验研究。原代培养细胞和二倍体有限细胞系，细胞集落率很低。细胞集落化培养之前，应先测定细胞集落形成率，以了解细胞在极低密度条件下的生长能力。 目前认为仅有肿瘤干细胞具有形成集落的能力，集落抑制率常用于抗癌药物敏感试验、肿瘤放射生物学试验
，到细胞形成克隆时终止培养。 基本步骤： (1)取对数生长期细胞，用0.25%胰蛋白酶消化并轻轻吹打，使之成为单细胞，作活细胞计数，用含20%胎牛血清的DMEM培养液调整细胞密度至1×106细胞/L。然后根据实验要求作梯度倍数稀释。 (2)用蒸馏水分别制备出1.2%和0.7%两个浓度的低溶点琼脂糖液，高压灭菌后，维持在40℃中不会凝固。 (3)按1:1比例使1.2%的琼脂糖和2×DMEM培养基(含有2×抗生素和20%的小牛血清)混合后，取3mL混合液注入直径6cm平皿中(10cm平皿加
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