- ￥1298
- 博尔森/BIOESN
- BES20050KB
- 中国
- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
50
- 英文名：
AH109-pBridge Yeast Three-Hybrid Media Kit
- 供应商：
上海博尔森生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
1Set
AH109-pBridge系统酵母三杂培养基套装
储存温度：序号 1-6 常温保存，序号 7-8 需-20℃储存，蓝冰运输。
产品组分说明：
1：产品组分设计针对于已知蛋白验证性实验，如需要筛库，部分筛选培养基需求量大，可单独购买。
2：产品组分设计转化方案是共转，简化培养基使用种类和操作流程。
3：如需要分步转化，单独检测自激活，培养基略有不同，可在购买前跟本公司协商调换试剂盒培养基成分。
4：酵母三杂针对于 Bridge 蛋白互作，实验一般很顺畅，对于 Inhititor/blocker蛋白互作，实验常常会遇到问题。
产品组成：（0.5 L/pouch）
使用说明：
Yeast Three-Hybrid Media Kit（YM3000 酵母三杂培养基套装）包含酵母三杂验证性实验所需要的全部培养基。整套销售，性价比更高。培养基以非常方便使用的铝箔袋形式包装，每个独立包装可以配制 0.5 L 的培养基。使用时仅需要将袋中的所有干粉倒入三角瓶或培养瓶中，加入 0.5 L 的 ddH2O，然后 121℃灭菌 15分钟即可。无需称量和调整 pH 值。
Yeast Three-Hybrid Media Kit Plus（YM3001）在 Yeast Three-Hybrid Media Kit（YM3000）基础上增加了 3-AT（用于自激活抑制）和 X-α-gal（互作蓝白斑显色验证）。 使用方法：
Rich Liquid Media (Broth)
1. 序号1产品 YPDA 每袋干粉倒入三角瓶或培养瓶中，加0.5 L 的去离子水中溶解。
2. 如有必要，调 pH 至6.5。121℃高压灭菌十五分钟。
3. 避光、室温条件下储存灭菌培养基备用。
Minimal Plating Media with Agar
1. 序号2-6产品，每袋干粉倒入三角瓶中，加0.5 L 的去离子水，搅拌溶解（琼脂高温灭菌后溶解）。
2. 如有必要，调节 pH 至5.8。121℃高压灭菌15分钟。
3. 冷却到50℃把培养基倒入平板中，室温使其凝固。封口膜封好后倒置保存在4℃冰箱。
3-AT 的使用方法：
1.计算所需平板的数量，计算配置培养基体积；
2.设置3-AT 的浓度梯度(建议设置10-50mM 的浓度梯度，常见浓度约30mM )；
3.灭菌筛选培养基，待培养基冷却到55℃左右，加入3-AT 母液，摇匀后倒板；
4.标记每个平板的3-AT 浓度，超净台冷却凝固后，将转化或培养物涂板；
5.28-30℃培养 3-5天。
X-a-gal 的使用方法：
（一）涂布于预制平板：
1. 储存液配制：溶解24 mg X-α-gal 于6 mL DMF，终浓度为4 mg/mL。
2. 涂布200 μl（15 cm） 或者100 μl（10 cm）X-α-gal 储存液于预制平板上。
3. 置于37 ℃培养箱至液体被吸收（DMF 挥发性低，最长可放4小时）。
4. 将转化细菌或酵母涂于平板上，于37 ℃或30 ℃培养直至蓝色菌斑出现。
（二）直接加入培养基中：
1. 储存液配制：溶解60 mg X-α-gal 于3 mL DMF，终浓度为20 mg/mL。
2. 将已灭菌固体培养基冷却至50-55 ℃。
3. 加入 2-10 ml X-α-Gal 储存液，混匀，快速倒平板。
酵母三杂筛库流程参考：
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文献和实验10×贮存液浓度（g/L;mg/100ml） 1L培养基所需贮存液体积(ml)腺嘌呤硫酸盐（adenine hemisulfate salt） 0.2 ;20 100 ml注：1．高压灭菌，4℃保存一年2．丝氨酸，天冬氨酸，谷氨酸，酵母可内源性合成。但AH109在-Met上时，应加入天冬氨酸（10×天冬氨酸，1000mg/LL-精氨酸LiCL（Arg HCL） 0.2 ;20 L-组氨酸HCL（His HCL monohydrate） 0.2 ;20 L-
与胞浆突变的哺乳动物Ras融合（诱饵），将蛋白质Y与膜定位信号如豆蔻酰基化序列相融合（猎物），如果X与Y结合，则突变Ras被定位于膜上而发挥作用，使酵母菌株cdc25-2得以在36℃生长[20]。（六）酵母双杂交系统的拓展国外学者为了拓宽传统的酵母双杂交的应用范围，在完善该系统的同时，创立了许多基于双杂交原理的新系统。目前应用较为成功的主要有：单杂交系统(One-hybrid system)、三杂交系统(Three-hybrid system)和逆向双杂交系统(Reverse two hybrid
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