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- 2025年07月10日
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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃保存
- 供应商：
Bestbio-贝博
- 保质期：
一年
- 库存：
大量
- 规格：
20 reactions/100 reactions
产品简介：
BestBio贝博cDNA第一链合成试剂盒提供全套试剂，适用于以RNA为模板合成第一链cDNA的逆转录。本试剂盒选用缺失了Ribonuclease H(RNase H)酶活性的M-MLV酶，可以合成长达13kb的第一链cDNA；逆转录过程中的特异的RNase抑制剂可有效降低由于外源RNase污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷，使用本试剂盒合成的第一链，可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR等。
产品组成：
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产品组成
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111001
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111002
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序号
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规格
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20 assays
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100 assays
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1
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M-MLV酶
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20ul
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100ul
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2
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5X M-MLV酶反应Buffer
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80ul
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400ul
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3
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RNase抑制剂
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20ul
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100ul
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4
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dNTP Mix
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40ul
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200ul
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5
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Oligo(dT)15
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20ul
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100ul
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6
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随机引物
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20ul
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100ul
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7
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ddH2O
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0.2ml
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1ml
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使用方法：
1. RNA的变性：（以20μl为例，可根据比例放大或缩小）
按下表加入试剂：
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组分
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备注
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体积
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ddH2O
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DEPE-treated Water
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11-x μl
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Templat RNA
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Total RNA 0.1-5μg / Poly(A) RNA/mRNA 10-500ng / Specific RNA 0.01pg-500ng
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X μl
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Primer
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Oligo(dT)12-18 10pmol / random hexamer 25pmol / Gene specific primer 10pmol
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1 μl
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dNTP Mix
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10mM
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2 μl
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轻轻混匀，随后离心沉淀液体，将离心管于PCR仪上65°C反应5分钟，降温至4°C后取出置于冰上。
2. 反应体系配制：
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组分
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备注
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体积
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上述变性后退火反应液
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14 μl
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5×M-MLV酶Buffer
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4 μl
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RNase Inhibitor
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20 U/μl
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1 μl
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M-MLV逆转录酶
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200 U/μl
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1 μl
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Total volum
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20 μl
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3. PCR仪上进行下列反应：
（使用随即引物时请进行30°C孵育10分钟，可使模板充分退火、延伸）
42°C反应30-60分钟；
95°C，5分钟（长片段DNA扩增时为了避免cDNA降解，请进行70°C，15分钟）；
4°C，5分钟。
逆转录产物可以直接用于后续的PCR等反应，也可以-20°C冻存以备以后使用。
注意事项：
1. 当同时需要进行数次逆转录反应时，应先配制各种试剂的混合液，然后再分装到每个反应管中。这样，避免重复分取同一试剂，可使所取的试剂体积更准确，减少试剂损失。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。
2. 各试剂分取之前要小心地离心收集到管底部；由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取。
3. 酶制品应在实验前才从-20℃中取出，使用后也应立即放回-20℃中保存。
4. 尽量避免反复冻融。
储存条件：
-20℃保存。
有效期：
一年。
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cDNA第一链合成试剂盒(mmlv)
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