核膜蛋白和核内蛋白提取试剂盒

贝博® BBproExtra® 核膜蛋白与核内蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种原代或传代动物细胞和各种动物实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等动物组织中提取核膜蛋白和核内蛋白，包括组蛋白核非组蛋白。制备的核膜蛋白和核内蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。

 本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞核膜组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。 

 

细胞蛋白提取
1. 提取液制备：
每300ul冷的蛋白提取液B中加入1ul蛋白酶抑制剂混合物和1ul磷酸酶抑制剂，混匀后置冰上备用。
每300ul冷的膜蛋白溶解液C中加入1ul蛋白酶抑制剂混合物和1ul磷酸酶抑制剂，混匀后置冰上备用。
2. 取5-10×106个细胞，在4℃，500×g力条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每20ul体积细胞沉淀（约20mg，2×106个细胞）中加入100-200μl冷的提取液 A，高速涡旋混匀或吹打混匀，置2-8℃条件振荡15-30分钟。
5. 再次高速涡旋振荡混匀，然后在4℃，10000×g条件下离心5分钟。
6. 弃上清，收集沉淀。
7. 沉淀用PBS洗涤一次，然后在4℃，10000×g条件下离心5分钟，弃上清。
8. 在沉淀中加入100-200μl冷的提取液B，高速涡旋混匀15秒。置2-8℃条件振荡30分钟-2小时。
9. 置37℃水浴10分钟。然后在37℃ 500-1000g力离心2分钟。
10. 此时溶液分为两层，小心移除上层，即为核内蛋白。
11. 留下管底部下层大约20-30ul液体。
12. 用30-100ul膜蛋白溶解液C溶解该溶液，即得核膜蛋白样品。
13. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

组织蛋白提取
1. 提取液制备：
每300ul冷的蛋白提取液B中加入1ul蛋白酶抑制剂混合物和1ul磷酸酶抑制剂，混匀后置冰上备用。
每300ul冷的膜蛋白溶解液C中加入1ul蛋白酶抑制剂混合物和1ul磷酸酶抑制剂，混匀后置冰上备用。
2. 取适量组织样本用剪刀剪碎，加冷PBS，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。
3. 匀浆液在4℃，500×g力条件下离心2-3分钟，弃上清。
4. 每20ul体积细胞沉淀（约20mg，2×106个细胞）中加入100-200μl冷的提取液 A，高速涡旋混匀或吹打混匀，置2-8℃条件振荡15-30分钟。
5. 再次高速涡旋振荡混匀，然后在4℃，10000×g条件下离心5分钟。
6. 弃上清，收集沉淀。
7. 沉淀用PBS洗涤一次，然后在4℃，10000g条件下离心5分钟，弃上清。
8. 在沉淀中加入100-200μl冷的提取液B，高速涡旋混匀15秒。置2-8℃条件振荡30分钟-2小时。
9. 置37℃水浴10分钟。然后在37℃ 500-1000×g力离心2分钟。
10. 此时溶液分为两层，小心移除上层，即为核内蛋白。
11. 留下管底部下层大约20-30ul液体。
12. 用30-100ul膜蛋白溶解液C溶解该溶液，即得核膜蛋白样品。
13. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。