lncRNA与microRNA互作-经验丰富案例多-服务到投

lncRNA与microRNA互作概述

 

lncRNA (Long non-coding RNA)即长链非编码RNA，通常长度在200-100000 nt，具有5’帽子和3’polyA尾巴结构。

lncRNAs作用范围广泛，机制非常复杂，可以与DNA、RNA、蛋白质互作，参与表观、转录、转录后等多个层面的调控，在生命活动中有重要作用。lncRNA与miRNA的结合是其重要的调控方式之一，lncRNA作为“miRNA海绵”，抑制miRNA与mRNA的结合，促进mRNA表达，该机制被称为ceRNA调控机制。

 

 

 

lncRNA与microRNA互作服务信息

 

目前主要有两类方法用于研究lncRNA与microRNA的互作，一是双荧光素酶报告基因法，二是RNA pull down法。

 

lncRNA与microRNA互作技术服务
技术类型	技术目标	技术原理	价格
双荧光素酶	验证lncRNA与miRNA结合	将待测lncRNA序列构建到荧光素酶基因的下游，该质粒与miRNA mimics共转染待测细胞；如果miRNA能够结合lncRNA，则会抑制上游荧光素酶表达，使荧光素酶催化底物的光强减弱，根据化学发光值判断miRNA是否与待测lncRNA结合	点击询价
双荧光素酶	验证ceRNA机制	将待测mRNA的3’UTR序列构建到荧光素酶基因的下游，该质粒与miRNA mimics、lncRNA表达载体共转染待测细胞；与lncRNA空载对照组相比，当转入lncRNA表达载体时，miRNA对靶基因3’UTR的调控减弱，说明三者间存在ceRNA调控
外源性RNA pull down	验证lncRNA与miRNA结合	体外转录带有生物素标记的lncRNA，并与样本裂解液孵育，之后利用链霉亲和素磁珠捕获体外条件下结合的靶RNA-蛋白质复合物，采用Western Blot或质谱技术确定复合物中的蛋白质
内源性RNA pull down	验证lncRNA与miRNA结合	将自主研发的特异性RNA标签与目标lncRNA构建融合表达载体，转染细胞使其融合表达，通过与特异性RNA标签结合的亲和介质，将RNA标签-lncRNA与miRNA的复合体纯化出来，采用qPCR法检测待测miRNA

 

 

 

lncRNA与microRNA互作服务优势-辉骏生物
1、十年服务经验，众多服务案例，服务成果得到优秀期刊认可
2、自有分子及细胞生物实验平台，能有效制定并执行优质的实验路线
3、售后技术支持将一直保持到客户发表文章，确保客户安心进行下游实验及投稿



 

lncRNA与microRNA互作研究案例-辉骏生物

 

 

研究背景

 

肝细胞癌（HCC）极易发生转移。TGF-β诱导的上皮-间充质转化（EMT）在癌细胞扩散中的作用已被证实，但lncRNAs在TGF信号转导中的作用仍不清楚。

 

 

研究路线

1、对HCC细胞和TGF-β诱导HCC细胞的基因表达检测发现lncRNA-ATB表达水平较高
2、RIP、RNA pull down、双荧光素酶和基因表达实验证实对EMT和肿瘤侵袭有抑制作用的miR-200家族可结合lncRNA-ATB
3、表达检测和荧光素酶实验表明lncRNA与ZEB1或ZEB2竞争结合miR-200s，三者存在ceRNA调控
4、细胞实验、肝组织检测和小鼠模型实验均表明lncRNA-ATB通过上述ceRNA作用诱导EMT并促进癌细胞侵袭
5、RIP、RNA pull down等实验筛选并确定了与lncRNA-ATB结合的mRNA“IL-11”
6、细胞实验、肝组织检测和小鼠模型实验均表明lncRNA-ATB以不依赖于miR-200s的方式促进IL-11 mRNA稳定性，进而激活STAT3信号，促进癌转移

 

研究结论

 

TGF-β激活的lncRNA（lncRNA-ATB）在肝细胞癌（HCC）转移中上调，并与不良预后相关。本研究从两个方向揭示了lncRNA促进HCC转移的机制：（1）lncRNA-ATB通过竞争性结合miR-200家族上调ZEB1和ZEB2，诱导EMT和侵袭；（2）lncRNA-ATB通过结合IL-11mRNA、自分泌诱导IL-11和触发STAT3信号，促进癌细胞转移到其它部位。

 

客户文献

 

Yuan J.H. et al: A Long Noncoding RNA Activated by TGF-b Promotes the Invasion-Metastasis Cascade in Hepatocellular Carcinoma. Cancer cell. 2014.

 

 

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