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    辉骏生物-基于SILAC技术的蛋白质相互作用(SILAC-IP)

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    辉骏生物-基于SILAC技术的蛋白质相互作用(SILAC-IP)
    • ¥1
    • 广东
    • 不同的同位素培养基分别培养实验组和对照组细胞,达到体内标记的目的。在此基础上进行Co-IP实验,依靠抗原与抗体之间的专一性反应分离得到免疫复合物;之后,利用LC-MS/MS来定性和定量免疫复合物中的蛋白:当实验组与对照组中某个蛋白质的含量达到统计学差异时,判定这个蛋白质与诱饵蛋白质具有相互作用。
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      • 提供商:

        广州辉骏生物科技股份有限公司

      • 服务名称:

        SILAC-IP

      • 规格:

        具体价格请咨询:4006991663

      SILAC-IP服务简介-辉骏生物
      不同的同位素培养基分别培养实验组和对照组细胞,达到体内标记的目的。在此基础上进行Co-IP实验,依靠抗原与抗体之间的专一性反应分离得到免疫复合物;之后,利用LC-MS/MS来定性和定量免疫复合物中的蛋白:当实验组与对照组中某个蛋白质的含量达到统计学差异时,判定这个蛋白质与诱饵蛋白质具有相互作用。

      SILAC-IP技术优势-辉骏生物
      1、特异性强,结果可信,假阳性极低;
      2、灵敏度高,样本需求量少;
      3、高通量,能一次性检测到多种互作蛋白;
      4、能直接检测出与bait蛋白互作的其它蛋白的相对含量。

      SILAC-IP服务内容-辉骏生物
      1、细胞同位素标记          
      2、蛋白提取、免疫沉淀;     
      3、蛋白分离                
      4、液质联用检测
      5、数据库检索和定性、定量分析
      6、相互作用蛋白的生物信息学分析

      技术应用
      3.5.1野生型细胞系(图1)

      1、分别用轻、重链氨基酸培养2组相同的野生型细胞,培养至第5~6代时做标记测试;
      2、待标记完全后,取等量的2组细胞提取蛋白质;
      3、提取的轻链、重链细胞总蛋白分别用Normal IgG和抗诱饵蛋白的特异性抗体做免疫共沉淀(Co-IP);
      4、混合轻、重链Co-IP产物,SDS-PAGE分离;
      5、胶内酶切,肽段抽提、纯化;
      6、LC-MS/MS定性和定量免疫复合物中的蛋白质(图1:成对出现的峰为非特异性结合蛋白)。


      3.5.2基因过表达细胞系(图2)
      1、构建兴趣基因(带标签)的过表达细胞系和对照细胞系;
      2、分别用轻、重链氨基酸培养上述2组细胞系,培养至第5~6代时做标记测试;
      3、待标记完全后,取等量的2组细胞混合并提取蛋白质;
      4、轻、重链蛋白混合物用标签蛋白的抗体做Co-IP;
      5、(1)若抗体和磁珠非化学偶联,Co-IP洗脱液中常有抗体干扰,需要用SDS-PAGE胶分离的方法先去除抗体轻、重链,之后做蛋白条带的胶内酶切并抽提肽段;
         (2)若抗体和磁珠已化学偶联,做SDS-PAGE确认是否无抗体干扰;在确保无干扰的情况下,进行溶液内酶切,之后做LC将肽段混合物分为多个组分;
      6、胶内酶切的肽段组分或一维LC分离的肽段组分再经LC-MS/MS,得到免疫复合物中蛋白质的定性和定量信息。


      3.5.3基因干扰细胞系(图3)
      1、构建兴趣基因的干扰细胞系和对照细胞系;
      2、分别用轻、重链氨基酸培养上述2组细胞系,培养至第5~6代时做标记测试;
      3、待标记完全后,取等量的2组细胞混合并提取蛋白质;
      4、轻、重链蛋白混合物用兴趣蛋白的抗体做Co-IP;
      5、同上,亦可采用2种方法:
      (1) SDS-PAGE分离蛋白质、胶内酶切;
      (2) 溶液内酶切、LC分离肽段;
      6、肽段再经LC-MS/MS,得到免疫复合物中蛋白质的定性和定量信息。


      客户须知

       
      服务项目 客户提供 交付产物 实验周期
      SILAC-CoIP 1、可传代细胞
      2、诱饵蛋白信息
      3、Co-IP抗体
      1、蛋白定性和定量原始结果和分析结果;
      2、客户指定蛋白质对应的质谱峰图;
      3、互作蛋白的生物信息学分析;
      4、完整的实验报告
      2-3个月


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      刘经理

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      试剂,技术服务

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