蛋白质/多肽N-糖基化位点分析

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本实验室以生物质谱技术为基础，主要研究方向为蛋白质组学，包括蛋白质的表达、定量、翻译后修饰等方法学及应用研究。

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糖修饰蛋白质结构分析及糖蛋白质组检测
基于亲水作用色谱(HILIC)，对强亲水性和极性物质有特异的吸附作用，可与样品中具有糖基化修饰的肽段或糖链特异性结合，实现对样本中糖基化肽段和糖链特异性富集的目的。糖基化肽段富集完成后，可利用液相色谱-串联质谱、MALDI-TOF质谱等，对样品进行检测，解析糖链结构信息。

应用领域：
1.不同实验条件下糖基化蛋白质组变化及信号通路分析；
2.筛选候选糖蛋白标志物；
3.单个糖蛋白质的糖含量分析，糖链结构确认及定量分析。


技术优点：
1.独特的HILIC富集结合条件，可特异性富集细胞、组织、
单个糖蛋白质酶解混合物中的糖肽或糖链；
2.可开展糖修饰变化的定量比较分析。

可选仪器：
QExactive HF、Orbitrap Fusion


分析流程
样品经Trypsin 酶切后脱盐，用HILIC富集糖基化肽段，
经PNGF酶切之后分离糖链和糖肽，糖肽经液相色谱-串
联质谱分析获得糖基化位点信息、采用MALDI-TOF获得
糖链结构信息，Mascot等软件对质谱数据进行定性、定
量分析。

可选数据分析

1. 糖链的鉴定与定量分析；
2. 糖修饰位点确认分析
3. 完整糖肽结构鉴定及定量；

样品要求
蛋白提取物：≥2mg
细胞：≥10⁷
组织：动物组织≥100mg,植物组织≥100 mg



参考文献
1. Xinyuan Zhao, Cheng Ma, Huanhuan Han, Jing Jiang, Fang Tian, Jifeng Wang, Wantao Ying*, Xiaohong Qian*.Comparison and optimization of strategies for a more profound profiling of the sialylated N-glycoproteomics in human plasma using metal oxide enrichment. Analytical and Bioanalytical Chemistry.2013, 405(16): 5519-5529
2.Qichen Cao, Cheng Ma, Haihong Bai, Xianyu Li, Hui Yan, Yan Zhao, Wantao Ying* and Xiaohong Qian*. Multivalent Hydrazide-Functionalized Magnetic Nanoparticles for Glycopeptide Enrichment and Identification. Analyst.2014, 139: 603-609