- ￥6980
- 采用CRISPR/Cas9基因敲除系统， 脱靶率低。提高转染率，实验周期短，价格实惠，不成功不收费
- 广州
- 2025年10月16日
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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商：
艾迪基因
- 服务名称：
基因编辑服务
- 规格：
株
基因敲除细胞是应用基因敲除技术，可精准地去除或失活特定基因。构建基因敲除的细胞模型，可揭示基因在生物体中的功能，并在药物靶点筛选、药物开发等领域有广泛的应用。现有的基因编辑工具有CRISPR/Cas9、TALENs或ZFNs等。目前，CRISPR/Cas9系统因其高效性和操作便捷性，已成为基因敲除的首要选择工具。该系统通过gRNA引导Cas9核酸酶，对目标DNA进行特异性的识别和切割，产生DNA双链断裂（DSB）。随后，细胞通过非同源末端连接（NHEJ）途径修复这些双链断裂。在修复过程中，常常会产生非三倍数的插入或缺失（indel），导致移码突变，进而实现基因敲除。
艾迪基因基于自主研发的CRISPR-EDITx基因编辑平台，采用优化升级的CRISPR/Cas9系统，可根据基因与细胞、实验目的，制定合适的敲除策略和方案，可高效地构建符合需求的基因敲除细胞模型。
| 细胞类型 | 各种细胞类型，包括肿瘤、常规、干细胞、原代和永生化细胞系 |
|---|---|
| 服务类型 | 单基因敲除/多基因敲除/移码突变/片段敲除 |
| 交付标准 | 基因敲除单克隆细胞≥1株（2管细胞/株，1×106/管）；项目结题报告 |
| 周期 | 现货1周 （查看现货）；定制快至4周 |
| 价格 | 4980元起 ；具体可来电咨询18102225074 |
| 单基因敲除 | 实现单个基因的有效敲除 |
|---|---|
| 多基因敲除 | 实现多个基因的有效敲除 |
| 移码突变 | 针对编码基因的编码区前端设计sgRNA，实现碱基非3的倍数的indel |
| 片段敲除 | 针对基因设计sgRNA，实现基因片段的删除 |
（2）项目结题报告包含sgRNA序列、实验详细记录、测序结果及分析等，满足客户后期论证材料需求。
（3）基因敲除阳性单克隆均经过靶标片段T载体克隆测序验证，保证基因敲除。
| 细胞 | 基因名 (ID) | Cell pool敲除率 |
| MH-S | Sirt2 (64383) | ★★★★★ |
| HEPG2 | MAP1S (55201) | ★★★★★ |
| BHK-21 | TMEM41b (101842799) | ★★★★★ |
| KGN | TFE3 (7030) | ★★★★★ |
| LLC | CILP (214425) | ★★★★★ |
| MDA-MB-231 | OLFML2A (169611) | ★★★★★ |
| ID8 | DUSP1 (19252) | ★★★★★ |
| HmrSv5 | FN1 (2335) | ★★★★★ |
| huh7 | EGFL9 (65989) | ★★★★★ |
| MKN28 | TRIM54 (57159) | ★★★★★ |
| MB49 | STUB1 (56424) | ★★★★★ |
| hela | TRAPPC2（6399） | ★★★★★ |
| L929 | RIPK1（19766） | ★★★★★ |
| Bv2 | PKM（18746） | ★★★★★ |
| caco-2 | PEPT1（6564） | ★★★★★ |
| MOC2 | Itga5（16402） | ★★★★★ |
| PC3 | HJURP（55355） | ★★★★★ |
| CFSC-8B | Rock2 (25537) | ★★★★★ |
| HT22 | DJ-1 | ★★★★★ |
| A549 | PKM1（5315） | ★★★★★ |
| kupffer | sirt6（50721） | ★★★★★ |
| HBMEC | S100A6(6277) | ★★★★★ |
| Mia PaCa-2 | MMP1（4312） | ★★★★★ |
| HLE B3 | PXDN | ★★★★★ |
| HepG2/Dox | PIK3CA（5290） | ★★★★★ |
| HEK293 | DDR1（780） | ★★★★★ |
| RPE1 hTERT p53-/- Cell | BMF（90427） | ★★★★★ |
| HEK293T | WTAP（9589） | ★★★★★ |
1、研究目的：在THP-1细胞中实现双基因敲除
2、项目目标：成功在THP-1细胞中同时敲除B基因和C基因，从而开展基因相互作用及代偿机制的研究。
3、项目设计：在B基因外显子区域设计2个sgRNA，C基因外显子区域设计2个sgRNA。
▍ 案例分析
一、抗生素敏感浓度摸索
将细胞如下图1稀释。给药7天后，弃培养液，用台盼蓝染色2 min，显微镜下观察细胞存活情况。确定细胞多克隆细胞筛选和单克隆细胞筛选浓度。
图1 抗性浓度摸索
二、单克隆形成验证
细胞计数，将细胞悬液稀释混匀后加入96孔板，用封口胶将孔板封好，放于培养箱中培养。静置培养48 h后每日观察并记录单克隆形成情况。
三、靶标基因sgRNA 设计
根据基因序列信息，设计 sgRNA。
四、位点序列信息确认
PCR扩增（图2），测序验证基因序列，以确定sgRNA区域有无SNP。
图2 靶标序列扩增
五、敲除载体构建
退火，连接，转化，涂板（LB/Amp）培养。
每个实验组各挑取6个单克隆菌落，于LB/ Amp培养基中扩增，提取质粒，琼脂糖凝胶电泳检测质粒提取效果（图3）。
图3 质粒抽提
酶切验证 ：取3个单克隆酶切，琼脂糖凝胶电泳检测酶切效果（图4）。选择2个样品送样测序。
图4 单克隆酶切验证
六、慢病毒包装
敲除载体无内毒素质粒提取，病毒包装。
七、细胞转染
配制梯度病毒稀释液，细胞于培养箱中静置培养48h。
八、阳性多克隆细胞株筛选
九、阳性单克隆细胞株筛选
细胞转染48h后，更换完全培养基，筛选至对照组大部分细胞死亡，实验组细胞扩大培养，进行单克隆筛选。几天后挑选阳性单克隆进行扩增，并取样验证。
十、阳性单克隆细胞株验证
1、测序验证
提取阳性单克隆细胞株的基因组，将靶标基因酶切克隆至T载体后测序，以确定是否敲除成功。
结果示例：该基因有两个单克隆细胞株，A1和A2。
（1）单克隆细胞A1的目的基因在sgRNA2位置出现两种突变形式，分别缺失1个和19个碱基，在新序列的第337位和第355位碱基提前出现终止密码子。
（2）单克隆细胞A2的目的基因在sgRNA2位置发生突变，插入1个碱基，在新序列的第340位碱基提前出现终止密码子。
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文献和实验动物模型是现代生命科学研究的重要工具，特别是基因工程小鼠和大鼠，在基因功能研究、人类生理病理机制研究及新药研发中起着不可替代的作用。近几年来，制备动物模型的基因修饰技术层出不穷，这不仅包括传统 ES 打靶、TALEN、CRISPR/Cas9， 还有 TetraOneTM 基因敲除新技术。如此繁多的技术该如何选择？本文将对这四种技术的原理、特点、缺陷及未来发展趋势作系统的介绍和对比。 1、 传统 ES 打靶基因敲除——成熟、修饰准确、效果稳定，但制作周期长达一年 基于胚胎
近年来，ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9等基因组编辑技术可谓是层出不穷，尤其是CRISPR/Cas9，一出现便在全球范围内掀起一股热潮。同时，各大公司也开发出一系列相应的产品，其中一种至关重要的就是基因敲除阳性克隆筛选的试剂。 目前用的比较多的有CEL I酶，CEL I是植物来源的一种特异性识别碱基错配的酶，活性高，不会产生假阳性。而且CEL I酶是目前生物界发现的唯一能准确切割异源双链DNA中存在错配位点的酶，在遗传学研究和应用领域中扮演重要的角色，多应用在临床诊断领域
手把手教你利用 CRISPR-Cas9 系统精准敲除靶标基因
一、CRISPR-Cas 系统简介图 1 CRISPR-Cas9 系统介绍CRISPR-Cas9 系统是一种被广泛运用的基因组编辑工具，它来源于细菌的适应性免疫系统。CRISPR-Cas9 系统包括：Cas9 酶和一个向导 RNA。 向导 RNA 作用是引导 cas9 到基因组的特异性位点上切割。如图 1 所示。目前为止，CRISPR-Cas9 系统主要有两方面应用: 基因敲除和基因敲入。基因敲除时, 一旦 DNA 的双链断裂反应（DSB）被 Cas9 切割诱导发生, 细胞会启动 NHEJ
