- ￥16800
- PE7点突变免电转且难转细胞效率高达85%
- 广州
- 2025年10月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商：
艾迪基因
- 服务名称：
基因编辑服务
- 规格：
株
▍ 服务详情
| 细胞类型 | 各种细胞类型，包括肿瘤、常规、干细胞、原代和永生化细胞系 |
|---|---|
| 服务类型 | 模型构建/基因治疗方向的点突变效率验证 |
| 交付标准 | 基因点突变单克隆细胞≥1株（2管细胞/株，1×106/管） |
| 周期 | 现货1周 （查看现货）；定制快至8周 |
| 价格 | 16800元起 ；具体可来电咨询18102225074 |
▍ 基因点突变介绍
人类超过75,000种疾病与遗传变异相关，其中单碱基突变占主要类型。构建基因点突变细胞株在疾病检测、研究与治疗中具有巨大潜力，例如点突变细胞株可用于神经退行性疾病机制研究、小分子药物研发、肿瘤及遗传病诊断等。曾被寄予厚望的CRISPR-Cas9基因编辑技术，因脱靶效应及DNA双链断裂引发的副产物（如染色体易位、大片段缺失）等问题，限制了其在基因治疗中的应用。而无需双链断裂的碱基编辑技术（Base Editing）仅能实现4种单碱基转换（C→T、G→A、A→G、T→C），无法完成其余8种颠换编辑（C→A、C→G、G→C、G→T、A→C、A→T、T→A、T→G）。
先导编辑系统（Prime Editing）通过融合Cas9切口酶与逆转录酶，结合特殊设计的gRNA（prime editing guide RNA），实现精准且通用的基因编辑。
艾迪基因基于先导编辑PE (Prime Editing)技术全新研发的 Bingo™ 平台 ，可提供精准、高效的基因定点突变细胞定制服务。依托十多年基因编辑经验，在上千例基因编辑CRO项目经验中总结、优化、提升，成功率远超传统基因定点突变HDR系统。
Prime Editing的技术原理：利用一种融合了逆转录酶的Cas9 nickase（Cas9n-RT）和一种特殊的引导RNA——pegRNA，这种RNA不仅指导编辑酶到达目标DNA序列，还携带了需要插入或替换的遗传信息。在pegRNA的指导下，Cas9n-RT在目标DNA上产生一个单链切口，然后逆转录酶使用pegRNA作为模板合成新的DNA序列，从而实现精准的单碱基替换或小片段的插入和删除，而不需要双链DNA断裂，提高了编辑的精确性和安全性。
▍服务优势
▍ 服务类型
可根据客户需求、综合基因等情况，为客户设计点突变方案。
| 1 | 点突变细胞株模型构建 |
|---|---|
| 2 | 基因治疗方向应用的pegRNA效率验证 |
| 3 | 作为IVD用的生物来源标准DNA的原料 |
▍ 服务流程
▍ 点突变细胞系
▍ Bingo™ 7 的技术优势
艾迪基因对基于prime editing技术开发的Bingo™ 平台进行迭代升级，正式推出Bingo™ 7，具有更高的编辑效率。
1）相较于Bingo™ 5，成功率提高4.71倍
Bingo™ 7优化了PE蛋白系统，增加了与RNA结合的活性，从而了增加编辑效率。我们在多个编辑位点进行测试，相较于Bingo™ 5，成功率提高了1倍以上，最高可达4.71倍。这意味着更加高效、低成本地提供符合您实验需求的细胞模型。
与 Bingo™5 相比，Bingo™7 的编辑效率有所提高
2）在挑战性位点实现有效的编辑
Bingo™ 7高效的编辑效率，使那些挑战性的位点有了编辑的可能。我们对多个难以编辑的位点，分别使用Bingo™ 7和Bingo™ 5系统进行测试，结果显示Bingo™ 7可以对这些位点实现有效的编辑。这意着以前难以编辑的任务变得可行，为突破性研究创造了可能。
Bingo™5 编辑失败 Bingo™7 编辑成功的位点
3）部分定点突变细胞Pool编辑效率
▍ 成功案例
一、Ishikawa细胞MAPK7基因点突变（c.A599C）细胞株构建
1）项目信息
2）Bingo™PE系统质粒设计
3）多克隆编辑效率
在多克隆阶段，进行编辑效率检测，结果显示编辑效率约为60%。
编辑效率检测
4）单克隆测序验证
通过PCR及测序验证，确认单克隆已发生 c.A599C的编辑。
单克隆测序峰图
二、Hela细胞HSPD1基因点突变（c.A391G）细胞株构建
1）项目信息
2）Bingo™PE系统质粒设计
3）编辑效率检测
Hela细胞HSPD1基因c.A391G位点细胞Pool编辑效率为71%，获得纯合突变单克隆细胞。
Hela细胞HSPD1基因c.A391G点突变细胞Pool Sanger测序结果
Hela细胞HSPD1基因c.A391G点突变单克隆细胞Sanger测序结果
三、HCT116细胞EGFR基因点突变（c.2319_2320 ins CAC）细胞株构建
1）项目信息
2）Bingo™ PE系统质粒设计
3）编辑效率检测
HCT116细胞EGFR基因点突变（c.2319_2320 ins CAC）细胞Pool Sanger测序结果。
HCT116细胞EGFR基因点突变多克隆细胞编辑效率为38%。
四、 HCT116细胞GJB2基因点突变（c.35 ins G）细胞株构建
1）项目信息
2）Bingo™ PE系统质粒设计
3）编辑效率检测
HCT116细胞GJB2基因点突变（c.35 ins G）多克隆细胞测序结果。
HCT116细胞GJB2基因点突变多克隆细胞编辑效率为56%。
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文献和实验该产品被引用文献
▍ 参考文献
1.iPS细胞中实现多个二型糖尿病（T2D）风险SNVs的点突变
Generation of Human Isogenic Induced Pluripotent Stem Cell Lines with CRISPR Prime Editing
随着人类分子遗传学和基因组学的发展，数千个与常见疾病风险相关的基因位点被识别出来，这些位点通常包含多个候选变异。然而大多数与疾病相关的变异是非编码的，这使得识别这些变异背后的分子机制变得困难。CRISPR技术的发展为靶向基因组编辑提供了更精确的方法，特别是prime editing，它可以介导几乎任何单核苷酸替换。因此许多研究员期望利用prime editing研究特定基因变异功能相关性中的应用并在多能干细胞中生成等基因系列，以控制遗传背景，同时评估因果等位基因的剂量效应。 在该文章中，研究员们开发了一种高效的CRISPR prime editing技术，用于在诱导多能干细胞（iPSC）中生成携带杂合或纯合等位基因的细胞系，并对prime editing技术进行优化。接着选择了与2型糖尿病（T2D）风险相关的六个单核苷酸变异（SNVs）进行编辑，并针对每个位点从遗传背景不同的人类供体衍生的iPSCs中进行编辑，通过系列实验和对比评估编辑效率。研究结果表明，研究员们成功生成了27个编辑过的iPSC克隆，涵盖了6个与2型糖尿病或先天性高胰岛素血症（CHI）相关的SNVs。他们还发现，prime editing技术在iPSCs中的效率比在HEK293T细胞中更高。总的来说，这项研究展示了prime editing技术在生成特定遗传背景的iPSCs中的潜力，并为研究特定遗传变异对疾病影响提供了一个有力的工具。
2.通过冷冻电镜研究Prime editor复合体的作用过程推动Prime editin技术的迭代升级
Structural basis for pegRNA-guided reverse transcription by a prime editor
关于Prime editor如何识别pegRNA并与目标DNA相互作用的分子机制尚不清楚，限制了对Prime editing过程的理解和进一步的优化。为解决这个问题，研究人员在多种状态下测定了Prime editor的冷冻电镜(cryo-EM)结构，为理解这一创新的基因组工程系统提供了结构框架。 研究人员使用冷冻电镜技术（cryo-EM）对Prime editor复合体在不同状态下的结构进行了分析，包括预启动、启动、延伸和终止状态，成功获得了Prime editor复合体在多个状态下的高分辨率结构，揭示了其在引导逆转录过程中的动态变化；基于结构信息，研究人员设计了pegRNA变体和Prime editor变体，并对M-MLV RT进行截短和融合，成功开发了一种更小尺寸的Prime editor变体（PECO-Mini），它在保持编辑效率的同时，提高了AAV载体的滴度和Prime editing效率，活性测试结果显示工程化后的Prime editor变体在体外具有与原始Prime editor相当的活性。该研究揭示了Prime editor复合体在不同工作状态下的结构特征，为理解其分子机制提供了重要信息。
3.通过截短RT酶提高经AAV递送的Prime editing编辑效率
A truncated reverse transcriptase enhances prime editing by split AAV vectors
Prime editing是一种新型的基于CRISPR的基因组编辑技术，它不需要双链DNA断裂或外源性供体模板DNA，展现出在生物医学研究和基因治疗方面的巨大潜力。尽管Prime editing技术具有多功能性和精确性，但它在不同类型的编辑、目标位点和细胞类型中的效率存在很大差异。因此，为了实现更广泛的应用，需要提高Prime editing的效率。 研究人员筛选了11种不同来源的RT变体，使用GenScript算法优化其人类密码子，发现PE蛋白表达水平提高了1.4倍；通过删除RNase H结构域和进一步缩短RT序列，创建多个截短的PECO变体，使Prime editor在保持编辑效率的同时长度减少了621bp；为了实现有效的双AAV传递PE，研究人员构建了基于不同Cas9分裂位点和intein的分裂PE系统，确定了Rma 573-574和674-675分裂位点，这两个位点与Rma intein结合使用时，显著提高AAV载体的滴度和Prime editor效率。通过工程化改造和优化，研究人员成功提高了Prime editing技术的编辑效率，并且解决了AAV载体大小限制的问题，为未来的基因治疗和生物医学研究提供了一个更加有效和实用的工具。
4.通过研究Prime editin作用机制推动Prime editin技术的迭代升级
Structural basis for pegRNA-guided reverse transcription by a prime editor
该文章解析了prime editing技术中pegRNA引导逆转录的结构基础。研究通过高分辨率的结构分析，揭示了Prime Editor中的关键蛋白质，包括Cas9和逆转录酶的三维构象及其与pegRNA的相互作用。详细描述了pegRNA如何引导Prime Editor识别特定DNA序列并进行逆转录，将预定的基因序列插入目标位置。此外，研究还讨论了关键氨基酸残基在pegRNA结合和逆转录过程中的作用，解析了这些分子互动的精确机制。这一发现不仅深化了我们对Prime Editing机制的理解，还为优化和改进该技术提供了宝贵的结构信息，推动其在基因治疗等领域的应用。
5.在造血干细胞和祖细胞（HSPCs）实现HBBS基因的点突变
Ex vivo prime editing of patient haematopoietic stem cells rescues sickle-cell disease phenotypes after engraftment in mice
镰状细胞病（Sickle-cell disease, SCD）是一种由β-珠蛋白基因（HBB）中的一个A·T到T·A的点突变引起的常染色体隐性遗传病。目前，美国食品药品监督管理局（FDA）批准的唯一治愈SCD的方法是同种异体造血干细胞移植。然而，大多数患者缺乏理想的供体，并且该手术会导致严重的毒性。通过校正患者自身的造血干细胞（HSCs），可以绕过免疫并发症，并消除对组织相容性供体的需求。目前，已有一些关于使用Cas9核酸酶启动的同源定向修复（HDR）和腺相关病毒类型6（AAV6）递送的DNA模板来校正SCD突变的临床试验研究正在进行中。 在该文章中，研究员们利用优化的prime editing系统对SCD患者造血干细胞和祖细胞（HSPCs）进行体外校正，通过电穿孔将PEmax mRNA与合成的epegRNA和切割sgRNA结合使用，成功将SCD等位基因（HBBS）校正回野生型（HBBA），校正频率在15%到41%之间。之后，研究员们将经过启动编辑的HSPCs移植到免疫缺陷的小鼠体内，7周后，编辑的HSPCs在小鼠骨髓中维持了HBBA水平，并显示出与未编辑的健康供体HSPCs相似的植入频率、造血分化和谱系成熟。治疗效果评估发现，在移植后的小鼠中，平均42%的人红细胞前体和网织红细胞表达了HBBA，超过了预测的治疗益处水平。基因特异性分析也表明启动编辑系统具有高度的目标DNA特异性。最终研究结果证实了该技术手段的安全性和效率，具有长期效果和多克隆性。总结来说，这项研究展示了prime editing技术在治疗SCD中的潜力，证明了其在提高治疗效果和降低非目标编辑风险方面的有效性。
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先导编辑（PE）基因点突变细胞稳转株构建服务（支持原代/难转染细胞的单点/多点突变；单碱基/多碱基编辑）
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