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研载生物
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ChIP-qPCR和ChIP-Seq
一、技术简介
ChIP(染色质免疫共沉淀)是检测体内条件下DNA与蛋白质相互作用的方法,采用特异性抗体将目的蛋白进行免疫沉淀,由此可以把目的蛋自所结合的基因组DNA片段也富集下来。ChIP-qPCR可以对目的片段进行定量分析,通过对目的序列的扩增,并与Input、阳性对照和阴性对照的量对比,就可以证明目的蛋白是否与预想的DNA序列发生了相互作用。ChIP-Seq是将回收纯化的DNA进行建库测序,用于发现目的蛋白潜在结合的DNA序列。
目前ChIP技术已广泛应用于组蛋白修饰、转录因子作用位点和DNA甲基化等研究中。相比其他DNA与蛋白相互作用的研究方法,ChIP的突出优势在于通过检测蛋白与DNA的结合,研究体内真实情况下的染色质结构,从而得出确凿的诱导或阻碍转录的证据,这对构架信号调控网络至关重要。
一、实验流程
1. 甲醛处理细胞,使DNA-protein的相互结合作用被交联固定。
2. 裂解细胞:得到全细胞裂解液。
3. 超声处理:将基因组DNA打断至100-500bp。
4. 免疫沉淀:在细胞裂解液中加入一抗和beads,并进行孵育。
5. 洗脱,并解交联。
6. DNA纯化
7. 检测产物结果(qPCR或ChIP-Seq)
三、服务说明
客户提供:样本,ChIP级抗体(或由我司代购),目的基因及蛋白的相关信息。
公司提供:实验报告(实验仪器设备、试剂、实验方法、数据分析结果),原始数据及图片;
ChIP(染色质免疫共沉淀)是检测体内条件下DNA与蛋白质相互作用的方法,采用特异性抗体将目的蛋白进行免疫沉淀,由此可以把目的蛋自所结合的基因组DNA片段也富集下来。ChIP-qPCR可以对目的片段进行定量分析,通过对目的序列的扩增,并与Input、阳性对照和阴性对照的量对比,就可以证明目的蛋白是否与预想的DNA序列发生了相互作用。ChIP-Seq是将回收纯化的DNA进行建库测序,用于发现目的蛋白潜在结合的DNA序列。
目前ChIP技术已广泛应用于组蛋白修饰、转录因子作用位点和DNA甲基化等研究中。相比其他DNA与蛋白相互作用的研究方法,ChIP的突出优势在于通过检测蛋白与DNA的结合,研究体内真实情况下的染色质结构,从而得出确凿的诱导或阻碍转录的证据,这对构架信号调控网络至关重要。
一、实验流程
1. 甲醛处理细胞,使DNA-protein的相互结合作用被交联固定。
2. 裂解细胞:得到全细胞裂解液。
3. 超声处理:将基因组DNA打断至100-500bp。
4. 免疫沉淀:在细胞裂解液中加入一抗和beads,并进行孵育。
5. 洗脱,并解交联。
6. DNA纯化
7. 检测产物结果(qPCR或ChIP-Seq)
三、服务说明
客户提供:样本,ChIP级抗体(或由我司代购),目的基因及蛋白的相关信息。
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