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嘉兴硕玺生物有限公司
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iTRAQ&TMT
同位素标记定量:
iTRAQ(isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation)&TMT(Tandem Mass Tags)分别由AB Sciex公司和 Thermo公司研发的多肽体外标记定量技术,利用多种同位素试剂标记蛋白多肽N末端或者赖氨酸侧链基团,不同分子量的试 剂对不同来源的样品进行标记从而实现不同样品间蛋白质组的比较。
iTRAQ实验步骤:
- 样品准备:将待测样品进行定量计算出样品蛋白浓度;
- 蛋白还原烷基化及酶解:每组样品各取100μg按照iTRAQ试剂盒要求进行处理,使用测序级胰蛋白酶溶液酶解后,超滤管 离心收集酶解肽段;
- iTRAQ标记:将iTRAQ试剂平衡到室温,用150μL异.丙.醇溶解,取酶解肽段加入iTRAQ试剂后室温反应2 h,加入水终止 反应,等量混合不同组样品,真空冷冻干燥样品;
- LC-MS-MS分析:使用Thermo的Q-Exactive Orbitrap进行串联质谱鉴定。
5. 数据处理及生信分析
结果展示:
实验周期及交付标准
- 实验周期:4-6周
- 交付标准:蛋白定量结果、鉴定结果、质谱原始数据、生信分析结果(GO分析、KEGG分析等等)
需确认的信息
- 样本的种属
- 样本的类型(组织or细胞or血液)
- 样本的数量及分组
4. 分析要求.
收费标准/服务周期/提供结果:
欢迎咨询详谈,我们会根据您的方案及需求制定详细的服务协议。
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文献和实验的自动搜索(SPIDER)和PTM鉴定技术整合了PTM和突变表征。 PEAKS可提供各种肽的完整序列,各个氨基酸序列的可信度评分,简单的高通量分析报告,以及其他信息。 PEAKS可以对多个数据库搜索引擎的结果进行比较。PEAKS inChorus会自动将测试结果同其他蛋白质ID搜索引擎(例如Sequest,OMSSA,X!Tandem和Mascot)进行交叉检查,这样可防止肽鉴定结果的假阳性。 PEAKS Q是一种用于蛋白质定量的附加工具,支持标记(ICAT, iTRAQ, SILAC, TMT
共沉淀蛋白互作分析、MRM/PRM定量蛋白组学分析、SILAC/Dimethyl标记定量蛋白组分析、SWATH定量蛋白组学、TMT/iTRAQ/multinotch定量蛋白组学分析。下面介绍两种比较常见的定量蛋白质组学技术。 iTRAQ定量蛋白质组学分析 iTRAQ (isobaric tags for relative and absolute quantitation) 技术是由美国应用生物系统公司ABI研发的一种多肽体外标记技术。该技术采用4种或8种同位素的标签,通过特异性标记多肽的氨基基团,而后进
蛋白质组作为重要的科研技术,广泛应用于科研中,在每年数万篇论文中发挥重要作用。如何利用组学工具快速切入临床科学问题形成科研思路,为我们的研究提速?可参考以下三种研究思路: 6.1、IF 1-3 分文章:蛋白质组学+差异蛋白 蛋白质组学检测 筛选差异蛋白进行表达量验证 分析差异蛋白,对差异蛋白进行 GO 和 KEGG 分析 6.1.1、案例一,影响因子 IF=2.2 iTRAQ-based quantitative proteomics analysis of immune
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