- ￥100 - 1000
- Xybio
- 上海
- P1448
- 2025年07月15日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
NM_207173.2;ASRT2; GPR154; GPRA; NPS
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：DH10Bac大肠克隆菌株
别称: NM_207173.2;ASRT2; GPR154; GPRA; NPS
| 复制子: | pUC |
|---|---|
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 备注: | 1134bp |
质粒属性
| 载体宿主： | 大肠杆菌 |
|---|---|
| 载体用途： | PCR模板 |
| 基因种属： | 人 |
| 基因类型： | cDNA |
| 原核抗性： | Kan |
| 筛选标记： | |
| 荧光蛋白： |
pCR4-TOPO-NPSR1(human)
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P1710/pUB6-V5-His-LacZ哺乳表达质粒 |
| P0699/pENTR5-UbCp哺乳表达质粒 |
| P1133/pDEST27-CMV-GST哺乳表达质粒 |
| P2190/pCMV-SPORT6哺乳表达质粒 |
| P3016/pcDNA3.1-ccdB-3xFLAG-V5哺乳表达质粒 |
| P2055/pAP3neo哺乳表达质粒 |
| P2275/pSG5哺乳表达质粒 |
| P0164/pVAX1哺乳表达质粒 |
| P0375/pVAX1-FLAG-N哺乳表达质粒 |
| P0342/pTT5哺乳表达质粒 |
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验相关专题 准备工作： ①制做选择平板LB+25 mg/l Kan。 ②核对好要转化的质粒 DNA，在15 ml Falcon tube 和cuvette（电转化用的石英样品槽，两面磨光，两面磨砂）标好质粒名称。将Falcon tube、cuvette、质粒DNA、SOC培养基按顺序对应置于冰上预冷或解冻。转化前将大肠杆菌（45 µl aliquot of E. coli DH10B Cell s）置于
系列）：高拷贝会导致大片段质粒复制压力大，易丢失或断裂，优先用低拷贝载体（如 pACYC184，拷贝数 10-15）或大片段专用载体（如 BAC 载体 pBeloBAC11，可容纳 100kb 以上片段，在大肠杆菌中稳定存在）； ④选择合适的连接方法，比如 Gibson 组装（无缝克隆）的方法更适合 10-20kb 大片段的连接，相比传统的 T4 连接的方法，成功率更高，操作更简便； ⑤选择重组缺陷型感受态，提高大质粒的转化效率，如 Stbl3、DH10B 等，此外转化方式也会影响转化
Mutagenesis of Viral BACs With Linear PCR Fragments (ET Recombination)
Principle steps of mutagenesis. (A) Preparation of electrocompetent bacterial cells for mutagenesis. Prior to mutagenesis the plasmid pKD46, encoding the recombination functions, is introduced into DH10B containing the viral BAC. In the next step
