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- Xybio
- 上海
- P1447
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
DH10B Strain
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：DH10B大肠克隆菌株
别称: DH10B Strain
抗性：Str
培养基：LB
菌株类别：大肠杆菌
培养条件：37℃，有氧，LB
质粒转化：42℃热激
保存方式：20%甘油，-20℃
基本应用：用于基因克隆
备注：
质粒简介
DH10B菌株来源于MC1061菌株，mcrA、mcrBC及mrr突变使DH10B菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA（Therefore , genomic DNA , both prokaryotic and eukaryotic, can be cloned efficiently in DH10B）。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。 φ80dlacZ∆M15 marker的存在使DH10B可用于蓝白斑筛选，rpsL赋予其链霉素抗性。对DH10B使用LB，在37℃有氧的环境下培养，然后使用20%的甘油保藏菌种，42℃热激处理可将质粒成功转入DH10B中。
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P0166/pCAGGS-HA-N哺乳表达质粒 |
| P1267/pCAGGS-FLAG-N哺乳表达质粒 |
| P1390/pCIG哺乳表达质粒 |
| P1706/pCAG-IRES-Puro哺乳表达质粒 |
| P1771/pHLmMBP-10哺乳表达质粒 |
| P0181/pEF-GFP哺乳表达质粒 |
| P0454/pEF1-V5-HisA哺乳表达质粒 |
| P1707/pEF1-Myc-HisB哺乳表达质粒 |
| P1708/pEF4-V5-HisA哺乳表达质粒 |
| P0868/pEF6-Myc-HisC哺乳表达质粒 |
| P1202/pEF6-V5-HisA哺乳表达质粒 |
| P1709/pUB6-V5-HisB哺乳表达质粒 |
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文献和实验Prior to getting cells:1) Turn on 42 deg bath. Takes about 30 min to reach 42 deg.2) Put 0.1 M sterile CaCl2 on ice.3) One tube of cells is good for several transformations.For two transformations:1) Put 10 μl of your ligation
(Meselson68) 2. nalidixic acid resistant DH10B F- endA1 recA1 galU galK deoR nupG rpsL ΔlacX74 Φ80lacZΔM15 araD139 Δ(ara,leu)7697 mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) λ- 1.suitable for cloning
相关专题 准备工作： ①制做选择平板LB+25 mg/l Kan。 ②核对好要转化的质粒 DNA，在15 ml Falcon tube 和cuvette（电转化用的石英样品槽，两面磨光，两面磨砂）标好质粒名称。将Falcon tube、cuvette、质粒DNA、SOC培养基按顺序对应置于冰上预冷或解冻。转化前将大肠杆菌（45 µl aliquot of E. coli DH10B Cell s）置于
