DH10Bac甘油菌(重组Bacmid制备用菌株)

大肠杆菌感受态细胞的制备、重组DNA的转化、克隆筛选

（如果用玻璃棒涂抹，酒精灯烧过后稍微凉一下再用，不要过烫）。(2) 菌液完全被培养基吸收后，倒置培养皿，于37℃恒温培养箱内培养过夜(12-16小时)，待菌落生长良好而又未互相重叠时停止培养，对于可以蓝白斑筛选的质粒和菌株来说，此时应该能清楚地看到蓝色和白色菌落。用 CaCl2法制备的感受态细胞，可使每微克超螺旋质粒 DNA产生5×106-2×107个转化菌落。在实际工作中，每微克有105以上的转化菌落足以满足一般的克隆实验。4) 检出转化体和计算转化率各实验组在培养皿内菌落生长状况及结果分析转化

重组蛋白制备工艺优化策略

成分。5.优化表达条件（1）重组蛋白不表达或者表达量低。如果重组蛋白不表达（包含体和可溶蛋白都没有）通过改变诱导剂浓度，诱导温度，时间等都不表达的时候，然后尝试更换菌株、质粒载体。降低诱导后培养温度。重组蛋白表达得越慢，其折叠效果就越好，大肠杆菌在4℃时依然可以表达重组蛋白，而将培养温度降低至25-30℃就能显著改善蛋白折叠。此方法不适用于温度诱导的重组蛋白表达；减少诱导剂。诱导剂浓度可以降低至1/10；选用Lac渗透酶缺陷型菌株，如Tuner、Rosetta等，也有很好的效果。这类菌株能够使进入每个细胞

携带多个目的基因的重组腺病毒的制备

5 a 感受态细胞，以便于保存。 4 、重组腺病毒的制备： 将 PacI 酶切线性化的高纯度高浓度重组腺病毒质粒，以脂质体介导的方式转染 293 细胞， 7 ～ 10 天出现噬斑，待完全病变后，收集细胞和上清，于 -70 ℃ 保存。 5 、重组腺病毒的鉴定 在基因水平，提取腺病毒基因组 DNA ，采用目的基因的引物， PCR 扩增病毒基因组 DNA ；并采用相应的引物，检测是否含有复制型腺病毒。 在蛋白水平，分泌蛋白，采用 ELISA 检测目的基因的表达；膜蛋白