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- Xybio
- 上海
- P0300
- 2025年07月08日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
p1Aβ8
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pIAβ8乳酸菌胞内质粒菌种
别称: p1Aβ8
| 启动子: | 需要克隆进入 |
|---|---|
| 复制子: | pBR322 |
| 终止子: | rrnB T1，rrnB T2 |
| 质粒分类: | 乳杆菌表达质粒 |
| 质粒大小: | 7975bp |
| 质粒标签: | LacZ |
| 原核抗性: | Amp |
| 真核抗性: | Chl |
| 克隆菌株: | DH5α |
| 培养条件: | 37℃ |
| 表达宿主: | 乳杆菌 |
质粒属性
| 质粒宿主： | 乳酸菌 |
|---|---|
| 质粒用途： | 蛋白表达 |
| 片段类型： | |
| 片段物种： | |
| 原核抗性： | 氨苄青霉素 |
| 真核抗性： |
质粒简介
pIAβ8是一个乳杆菌表达质粒
质粒图谱
质粒序列
M13R测序序列：
1 gtggcttgct gcctgcaggt cgactctaga ggaccccggg taccgagctc gaattcactg
61 gccgtcgttt tacaacgtcg tgactgggaa aaccctggcg ttacccaact taatcgcctt
121 gcagcacatc cccctttcgc cagctggcgt aatagcgaag aggcccgcac cgatcgccct
181 tcccaacagt tgcgcagcct gaatggcgaa tgccgggaat tattcaccac tccaagaatt
241 ggagccaatc aattcttgcg gagaactgtg aatgcgcaaa ccaacccttg gcagaacata
301 tccatcgcgt ccgccatctc cagcagccgc acgcggcgca tctcggctgt tttggcggat
361 gagagaagat tttcagcctg atacagatta aatcagaacg cagaagcggt ctgataaaac
421 agaatttgcc tggcggcagt agcgcggtgg tcccacctga ccccatgccg aactcagaag
481 tgaaacgccg tagcgccgat ggtagtgtgg ggtctcccca tgcgagagta gggaactgcc
541 aggcatcaaa taaaacgaaa ggctcagtcg aaagactggg cctttcgttt tatctgttgt
601 ttgtcggtga acgctctcct gagtaggaca aatccgccgg gagcggattt gaacgttgcg
661 aagcaacggc ccggagggtg gcgggcagga cgcccgccat aaactgccag gcatcaaatt
721 aagcagaagg ccatcctgac ggatggcctt tttgcgtttc tacaaactct tcctgtcgtc
781 atatctacaa gccatccccc cacagatacg gtaaactagc ctcgtttttg catcaggaaa
841 gcagctgttt tggcggatga gagaagattt tcagcctgat acagattaaa tcagaacgca
901 gaagcggtct gataaaacag aatttgcctg gcggcagtaa cgcggtggtc ccacctgacc
961 ccatgccgaa ctcagaagtg aaacgccgta gcgccgatgg taatgtgggg tctccccatg
1021 ccaaaatagg aaactgccag gcttcaaatt aaacgaaagg gtcagtcgaa aaaactgggc
1081 ctttcggttt atctt
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4916/pCMV-SPORT6-NEU4人源基因质粒 |
| P4917/pCMV-SPORT6-FGFR1人源基因质粒 |
| P4918/pCMV-SPORT6-ZNF41人源基因质粒 |
| P4919/pCMV-SPORT6-ADGRE5人源基因质粒 |
| P4920/pCMV-SPORT6-CRTAC1（389-1986bp）人源基因质粒 |
| P4921/pCMV-SPORT6-RACK1人源基因质粒 |
| P4922/pCMV-SPORT6-ALDH16A1人源基因质粒 |
| P4923/pCMV-SPORT6-COASY（277-1695bp）人源基因质粒 |
| P4924/pCMV-SPORT6-TMEM184A人源基因质粒 |
| P4925/pCMV-SPORT6-PAK4人源基因质粒 |
| P3648/pCMV-SPORT6-ZG16B人源基因质粒 |
| P3649/pCMV-SPORT6-DNAJC19(1同义突变）人源基因质粒 |
| P3650/pCMV-SPORT6-CCNDBP1人源基因质粒 |
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文献和实验基因克隆的四大要素(Four Elements for Gene Cloning)
一、受体细胞 ：受体细胞的选择是否合适将关系到能否表达，特别是高效表达。首先要注意不同的表达载体与受体细胞的关系，即原核表达载体适合原核细胞，真核载体则适合真核细胞，而农杆菌仅适用于植物细胞。即使大肠杆菌质粒，也应注意选择合适的菌种。例如，当用含有T7 噬菌体启动子的载体表达外源基因时，由于T7 启动子只能被其本身的RNA 聚合酶（T7 RNA 聚合酶）所识别，所以必须使用具有产生T7 RNA 聚合酶能力的受体菌，如：BL21（DE3）、JM109（DE3）。对于一些缺失β-D-半乳糖酶氨
，例如细菌的质粒、噬菌体、病毒等，常用的载体一般为质粒；根据需要可直接从公司购买合适的载体，也可以自己构建。（3）连接：目的 DNA 片段和适当载体的连接, 一般采用核酸内切酶分别消化 DNA 片段和载体，使它们的末端能够连接到一起构成重组 DNA 分子。由于所用内切酶的切割特点不同，产生三种连接方式：粘端连接、平端连接和不相配的连接。（4）转化：将连接的重组 DNA 产物导入合适的宿主细胞，使其在宿主细胞内复制扩增或表达，赋予宿主细胞新的生物特征。（5）克隆化：重组 DNA 分子转化大肠杆菌后，在平板
染色体长55kb，在细胞内很稳定，只是每个细胞里的拷贝数很少。比如已构成的人工微小染色体为7～15kb，每个细胞里的拷贝数虽然增多，但不够稳定。 人工构建酵母微小染色体的具体步骤见图23-6。从图中可以看到，先用质粒pBR322为材料，连接酵母的标记基因Leu2（亮氨酸）后去转化大肠杆菌，然后再接上酵母染色体上分离得到的着丝粒CEN3，再去转化大肠杆菌以增殖重组质粒，取得下一步实验用的DNA。接下去是连接从酵母（真核生物）中分离得到的ARS1。ARS是指自主复制顺序
