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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
负80度
- 保质期:
3年
- 英文名:
pIAβ8乳酸菌胞内质粒菌种
- 库存:
100
- 供应商:
上海柯雷生物
- 规格:
20ul
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文献和实验基因克隆的四大要素(Four Elements for Gene Cloning)
一、受体细胞 :受体细胞的选择是否合适将关系到能否表达,特别是高效表达。首先要注意不同的表达载体与受体细胞的关系,即原核表达载体适合原核细胞,真核载体则适合真核细胞,而农杆菌仅适用于植物细胞。即使大肠杆菌质粒,也应注意选择合适的菌种。例如,当用含有T7 噬菌体启动子的载体表达外源基因时,由于T7 启动子只能被其本身的RNA 聚合酶(T7 RNA 聚合酶)所识别,所以必须使用具有产生T7 RNA 聚合酶能力的受体菌,如:BL21(DE3)、JM109(DE3)。对于一些缺失β-D-半乳糖酶氨
,例如细菌的质粒、噬菌体、病毒等,常用的载体一般为质粒;根据需要可直接从公司购买合适的载体,也可以自己构建。(3)连接:目的 DNA 片段和适当载体的连接, 一般采用核酸内切酶分别消化 DNA 片段和载体,使它们的末端能够连接到一起构成重组 DNA 分子。由于所用内切酶的切割特点不同,产生三种连接方式:粘端连接、平端连接和不相配的连接。(4)转化:将连接的重组 DNA 产物导入合适的宿主细胞,使其在宿主细胞内复制扩增或表达,赋予宿主细胞新的生物特征。(5)克隆化:重组 DNA 分子转化大肠杆菌后,在平板
染色体长55kb,在细胞内很稳定,只是每个细胞里的拷贝数很少。比如已构成的人工微小染色体为7~15kb,每个细胞里的拷贝数虽然增多,但不够稳定。 人工构建酵母微小染色体的具体步骤见图23-6。从图中可以看到,先用质粒pBR322为材料,连接酵母的标记基因Leu2(亮氨酸)后去转化大肠杆菌,然后再接上酵母染色体上分离得到的着丝粒CEN3,再去转化大肠杆菌以增殖重组质粒,取得下一步实验用的DNA。接下去是连接从酵母(真核生物)中分离得到的ARS1。ARS是指自主复制顺序
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