pET-24b大肠表达质粒

基本信息
名称：pET24b
别称: NM_001308090.1;HD7;HD7A;HDAC7A

启动子:	T7
复制子:	pBR322
终止子:	T7 terminator
质粒分类:	大肠系列质粒；大肠表达质粒；pET系列质粒
质粒大小:	5309bp
质粒标签:	N-T7, C-6×His
原核抗性:	Kan
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	37度
表达宿主:	大肠杆菌BL21(DE3)
培养条件:	37℃，有氧，LB
诱导方式:	IPTG或乳糖及其类似物
5'测序引物:	T7（TAATACGACTCACTATAGGG）
3'测序引物:	T7-ter（TGCTAGTTATTGCTCAGCGG）
备注:	需要诱导后才表达

质粒属性

载体宿主：	大肠杆菌
载体用途：	蛋白表达
基因种属：	空载体
基因类型：	ORF
原核抗性：	Kan
真核抗性：
荧光蛋白：

质粒简介
   pET-24b质粒是一种原核表达载体，N端含有一个T7标签、C端的6×His affinity标签。该质粒含有多个常用的酶切位点，便于不同基因克隆。表达由宿主细胞提供的T7 RNA聚合酶诱导，目的基因被克隆到质粒载体上，受噬菌体强转录及翻译信号控制。pET系统是有史以来在大肠杆菌中表达重组蛋白的功能最强大的系统，也是现今原核表达方面使用最广泛的系统。该系列质粒能很容易的通过降低诱导物的浓度来削弱蛋白表达。在非诱导条件下，可以使目的基因处于完全沉默状态而不转录。

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                5309 bp ds-DNA     circular SYN 27-AUG-2016
DEFINITION  synthetic circular DNA
KEYWORDS    pET-24b
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 5309)
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Exported Saturday, August 27, 2016 from MiaoLingPlasmid
            http://www.miaolinjgbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..5309
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     terminator      26..73
                     /note="T7 terminator"
                     /note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
                     polymerase"
     CDS             complement(140..157)
                     /codon_start=1
                     /product="6xHis affinity tag"
                     /note="6xHis"
                     /translation="HHHHHH"
     CDS             complement(206..238)
                     /codon_start=1
                     /product="leader peptide from bacteriophage T7 gene 10"
                     /note="T7 tag (gene 10 leader)"
                     /note="promotes efficient translation in E. coli"
                     /translation="MASMTGGQQMG"
     protein_bind    283..307
                     /bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
                     /note="lac operator"
                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to
                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
                     relieved by adding lactose or
                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
     promoter        complement(308..326)
                     /note="T7 promoter"
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     promoter        635..712
                     /gene="lacI"
                     /note="lacI promoter"
     CDS             713..1795
                     /codon_start=1
                     /gene="lacI"
                     /product="lac repressor"
                     /note="lacI"
                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to
                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
                     relieved by adding lactose or
                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
                     /translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL
                     NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
                     EACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSIIFSH
                     EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA
                     MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
                     YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
                     ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
     CDS             2604..2795
                     /codon_start=1
                     /gene="rop"
                     /product="Rop protein"
                     /note="rop"
                     /translation="MTKQEKTALNMARFIRSQTLTLLEKLNELDADEQADICESLHDHA
                     DELYRSCLARFGDDGENL"
     rep_origin      complement(3225..3813)
                     /direction=LEFT
                     /note="ori"
                     /note="high-copy-number colE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
                     replication"
     CDS             3935..4750
                     /codon_start=1
                     /gene="aph(3')-Ia"
                     /product="aminoglycoside phosphotransferase"
                     /note="KanR"
                     /note="confers resistance to kanamycin"
                     /translation="MSHIQRETSCSRPRLNSNMDADLYGYKWARDNVGQSGATIYRLYG
                     KPDAPELFLKHGKGSVANDVTDEMVRLNWLTEFMPLPTIKHFIRTPDDAWLLTTAIPGK
                     TAFQVLEEYPDSGENIVDALAVFLRRLHSIPVCNCPFNSDRVFRLAQAQSRMNNGLVDA
                     SDFDDERNGWPVEQVWKEMHKLLPFSPDSVVTHGDFSLDNLIFDEGKLIGCIDVGRVGI
                     ADRYQDLAILWNCLGEFSPSLQKRLFQKYGIDNPDMNKLQFHLMLDEFF"
     rep_origin      complement(4843..5298)
                     /direction=LEFT
                     /note="f1 ori"
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
ORIGIN
        1 atccggatat agttcctcct ttcagcaaaa aacccctcaa gacccgttta gaggccccaa
       61 ggggttatgc tagttattgc tcagcggtgg cagcagccaa ctcagcttcc tttcgggctt
      121 tgttagcagc cggatctcag tggtggtggt ggtggtgctc gagtgcggcc gcaagcttgt
      181 cgacggagct cgaattcgga tcccgaccca tttgctgtcc accagtcatg ctagccatat
      241 gtatatctcc ttcttaaagt taaacaaaat tatttctaga ggggaattgt tatccgctca
      301 caattcccct atagtgagtc gtattaattt cgcgggatcg agatctcgat cctctacgcc
      361 ggacgcatcg tggccggcat caccggcgcc acaggtgcgg ttgctggcgc ctatatcgcc
      421 gacatcaccg atggggaaga tcgggctcgc cacttcgggc tcatgagcgc ttgtttcggc
      481 gtgggtatgg tggcaggccc cgtggccggg ggactgttgg gcgccatctc cttgcatgca
      541 ccattccttg cggcggcggt gctcaacggc ctcaacctac tactgggctg cttcctaatg
      601 caggagtcgc ataagggaga gcgtcgagat cccggacacc atcgaatggc gcaaaacctt
      661 tcgcggtatg gcatgatagc gcccggaaga gagtcaattc agggtggtga atgtgaaacc
      721 agtaacgtta tacgatgtcg cagagtatgc cggtgtctct tatcagaccg tttcccgcgt
      781 ggtgaaccag gccagccacg tttctgcgaa aacgcgggaa aaagtggaag cggcgatggc
      841 ggagctgaat tacattccca accgcgtggc acaacaactg gcgggcaaac agtcgttgct
      901 gattggcgtt gccacctcca gtctggccct gcacgcgccg tcgcaaattg tcgcggcgat
      961 taaatctcgc gccgatcaac tgggtgccag cgtggtggtg tcgatggtag aacgaagcgg
     1021 cgtcgaagcc tgtaaagcgg cggtgcacaa tcttctcgcg caacgcgtca gtgggctgat
     1081 cattaactat ccgctggatg accaggatgc cattgctgtg gaagctgcct gcactaatgt
     1141 tccggcgtta tttcttgatg tctctgacca gacacccatc aacagtatta ttttctccca
     1201 tgaagacggt acgcgactgg gcgtggagca tctggtcgca ttgggtcacc agcaaatcgc
     1261 gctgttagcg ggcccattaa gttctgtctc ggcgcgtctg cgtctggctg gctggcataa
     1321 atatctcact cgcaatcaaa ttcagccgat agcggaacgg gaaggcgact ggagtgccat
     1381 gtccggtttt caacaaacca tgcaaatgct gaatgagggc atcgttccca ctgcgatgct
     1441 ggttgccaac gatcagatgg cgctgggcgc aatgcgcgcc attaccgagt ccgggctgcg
     1501 cgttggtgcg gatatctcgg tagtgggata cgacgatacc gaagacagct catgttatat
     1561 cccgccgtta accaccatca aacaggattt tcgcctgctg gggcaaacca gcgtggaccg
     1621 cttgctgcaa ctctctcagg gccaggcggt gaagggcaat cagctgttgc ccgtctcact
     1681 ggtgaaaaga aaaaccaccc tggcgcccaa tacgcaaacc gcctctcccc gcgcgttggc
     1741 cgattcatta atgcagctgg cacgacaggt ttcccgactg gaaagcgggc agtgagcgca
     1801 acgcaattaa tgtaagttag ctcactcatt aggcaccggg atctcgaccg atgcccttga
     1861 gagccttcaa cccagtcagc tccttccggt gggcgcgggg catgactatc gtcgccgcac
     1921 ttatgactgt cttctttatc atgcaactcg taggacaggt gccggcagcg ctctgggtca
     1981 ttttcggcga ggaccgcttt cgctggagcg cgacgatgat cggcctgtcg cttgcggtat
     2041 tcggaatctt gcacgccctc gctcaagcct tcgtcactgg tcccgccacc aaacgtttcg
     2101 gcgagaagca ggccattatc gccggcatgg cggccccacg ggtgcgcatg atcgtgctcc
     2161 tgtcgttgag gacccggcta ggctggcggg gttgccttac tggttagcag aatgaatcac
     2221 cgatacgcga gcgaacgtga agcgactgct gctgcaaaac gtctgcgacc tgagcaacaa
     2281 catgaatggt cttcggtttc cgtgtttcgt aaagtctgga aacgcggaag tcagcgccct
     2341 gcaccattat gttccggatc tgcatcgcag gatgctgctg gctaccctgt ggaacaccta
     2401 catctgtatt aacgaagcgc tggcattgac cctgagtgat ttttctctgg tcccgccgca
     2461 tccataccgc cagttgttta ccctcacaac gttccagtaa ccgggcatgt tcatcatcag
     2521 taacccgtat cgtgagcatc ctctctcgtt tcatcggtat cattaccccc atgaacagaa
     2581 atccccctta cacggaggca tcagtgacca aacaggaaaa aaccgccctt aacatggccc
     2641 gctttatcag aagccagaca ttaacgcttc tggagaaact caacgagctg gacgcggatg
     2701 aacaggcaga catctgtgaa tcgcttcacg accacgctga tgagctttac cgcagctgcc
     2761 tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca
     2821 cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg
     2881 ttggcgggtg tcggggcgca gccatgaccc agtcacgtag cgatagcgga gtgtatactg
     2941 gcttaactat gcggcatcag agcagattgt actgagagtg caccatatat gcggtgtgaa
     3001 ataccgcaca gatgcgtaag gagaaaatac cgcatcaggc gctcttccgc ttcctcgctc
     3061 actgactcgc tgcgctcggt cgttcggctg cggcgagcgg tatcagctca ctcaaaggcg
     3121 gtaatacggt tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa agaacatgtg agcaaaaggc
     3181 cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca taggctccgc
     3241 ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa cccgacagga
     3301 ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc tgttccgacc
     3361 ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc gctttctcat
     3421 agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg
     3481 cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc
     3541 aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag gattagcaga
     3601 gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta cggctacact
     3661 agaaggacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg aaaaagagtt
     3721 ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtggtttttt tgtttgcaag
     3781 cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc ctttgatctt ttctacgggg
     3841 tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcatgaa caataaaact
     3901 gtctgcttac ataaacagta atacaagggg tgttatgagc catattcaac gggaaacgtc
     3961 ttgctctagg ccgcgattaa attccaacat ggatgctgat ttatatgggt ataaatgggc
     4021 tcgcgataat gtcgggcaat caggtgcgac aatctatcga ttgtatggga agcccgatgc
     4081 gccagagttg tttctgaaac atggcaaagg tagcgttgcc aatgatgtta cagatgagat
     4141 ggtcagacta aactggctga cggaatttat gcctcttccg accatcaagc attttatccg
     4201 tactcctgat gatgcatggt tactcaccac tgcgatcccc gggaaaacag cattccaggt
     4261 attagaagaa tatcctgatt caggtgaaaa tattgttgat gcgctggcag tgttcctgcg
     4321 ccggttgcat tcgattcctg tttgtaattg tccttttaac agcgatcgcg tatttcgtct
     4381 cgctcaggcg caatcacgaa tgaataacgg tttggttgat gcgagtgatt ttgatgacga
     4441 gcgtaatggc tggcctgttg aacaagtctg gaaagaaatg cataaacttt tgccattctc
     4501 accggattca gtcgtcactc atggtgattt ctcacttgat aaccttattt ttgacgaggg
     4561 gaaattaata ggttgtattg atgttggacg agtcggaatc gcagaccgat accaggatct
     4621 tgccatccta tggaactgcc tcggtgagtt ttctccttca ttacagaaac ggctttttca
     4681 aaaatatggt attgataatc ctgatatgaa taaattgcag tttcatttga tgctcgatga
     4741 gtttttctaa gaattaattc atgagcggat acatatttga atgtatttag aaaaataaac
     4801 aaataggggt tccgcgcaca tttccccgaa aagtgccacc tgaaattgta aacgttaata
     4861 ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc attttttaac caataggccg
     4921 aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga gatagggttg agtgttgttc
     4981 cagtttggaa caagagtcca ctattaaaga acgtggactc caacgtcaaa gggcgaaaaa
     5041 ccgtctatca gggcgatggc ccactacgtg aaccatcacc ctaatcaagt tttttggggt
     5101 cgaggtgccg taaagcacta aatcggaacc ctaaagggag cccccgattt agagcttgac
     5161 ggggaaagcc ggcgaacgtg gcgagaaagg aagggaagaa agcgaaagga gcgggcgcta
     5221 gggcgctggc aagtgtagcg gtcacgctgc gcgtaaccac cacacccgcc gcgcttaatg
     5281 cgccgctaca gggcgcgtcc cattcgcca
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P2710/pENTR223-TRAPPC1人源基因质粒

P2711/pENTR223-CDCA8人源基因质粒

P2712/pENTR223-GALNT12（928-1746bp）人源基因质粒

P2713/pENTR223-ASGR2人源基因质粒

P2714/pENTR223-ADAM22人源基因质粒

P2715/pENTR223-FLCN人源基因质粒

P2716/pENTR223-IL5RA-A646G人源基因质粒

P2717/pENTR223-BST2人源基因质粒

P2718/pENTR223-TRIM5人源基因质粒

P2719/pENTR223-LRG1-C397T人源基因质粒