- ￥100 - 1000
- Xybio
- 上海
- P0555
- 2025年07月16日
9 年钻石会员
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pEGFP-Notch1-NICD(rat)
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pCDNA3-HA-p53人源基因质粒
别称: NM_001308090.1;HD7;HD7A;HDAC7A
启动子：CMV
复制子: pUC
终止子: SV40 poly(A) signal
质粒分类: 基因文库质粒；大鼠基因质粒；大鼠真核质粒
质粒大小：7079bp
质粒标签：C-EGFP
原核抗性: Kan
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：大鼠
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：
质粒简介
pEGFP-Notch1-NICD-r质粒在CMV强启动子的作用下表达EGFP-Notch1-NICD融合蛋白，其中的跨膜大分子Notch1受体主要参与发育过程中的细胞命运的选择。其G1743和V1744部位发生水解释放产生的活性片段－胞质段（Notch1 intracellular cytoplasmic domain，NICD）能被转运进核，激活下激靶基因的表达，Notch1参与细胞的增殖、分化、程序性死亡、发育过程中的形态发生和器官形成等许多重要过程。我们构建的pEGFP-Notch1-NICD-r质粒转染进COS-7L细胞，可以观察到绿色荧光蛋白为核定位，提示克隆的NICD基因符合进一步研究NICD在分裂后神经元的功能。
质粒分享者信息：金卫林，上海交通大学硕士生导师。1994 年，武汉大学生物化学专业毕业，获学士学位；2004年第四军医大学全军神经科学研究所神经生物学研究生毕业，获博士学位。2005年底转业到上海交通大学，聘为神经科学研究所副研究员。中国神经科学学会会员。实验室的研究兴趣为：中枢神经发育再生分子信号和脑肿瘤的分子干预。近十年来, 一直聚焦研究Nogo和srGAPs的功能和信号机制研究。主持四项国家自然科学基金委的面上项目，如“精神发育迟滞候选基因MEGAP/srGAP3调控树突发育的双模态机制研究” 、 “神经元Nogo剪接异构体对突起生长和细胞凋亡的双重调控作用及其机制研究” 和“nNOS基因作为神经元细胞核Nogo-A蛋白的靶标研究”。相关结果已经整理论文发表在Cell、Cell Death and Differention、Mol Cell Neurosci、Anesthesiology、J Comp Neurol、Cell Mol Neurobiol、Neurosignals、Neurosci Lett等国际杂志上。实验室研究成果被国际广泛关注和引用。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7097 bp ds-DNA circular SYN 04-JUL-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pEGFP-Notch1-NICD-r
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 7097)
AUTHORS yinchu
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Tuesday, July 4, 2017 from SnapGene Viewer 3.3.4
http://www.snapgene.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7097
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 61..364
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 365..568
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
misc_feature 637..3002
/label=Notch1-NICD-r
/note="Rattus norvegicus notch 1 (Notch1), mRNA
NCBI Reference Sequence: NM_001105721.1
"
CDS 3043..3762
/codon_start=1
/product="enhanced GFP"
/label=EGFP
/note="mammalian codon-optimized"
/translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
EFVTAAGITLGMDELYK"
polyA_signal 3885..4006
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(4013..4468)
/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 4495..4599
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
promoter 4601..4958
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 4809..4944
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
CDS 4993..5787
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/label=NeoR/KanR
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATC-PFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 6019..6066
/label=HSV TK poly(A) signal
/note="herpes simplex virus thymidine kinase
polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"
rep_origin 6395..6983
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg
61 cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt
121 gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca
181 atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc
241 aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta
301 catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac
361 catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg
421 atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg
481 ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt
541 acggtgggag gtctatataa gcagagctgg tttagtgaac cgtcagatcc gctagcgcta
601 ccggactcag atctcgagct caagcttcga attctgatgc tgctgtcccg caagcgcagg
661 cggcagcatg gccagctctg gttccctgag ggtttcaaag tgtcagaggc cagcaagaag
721 aagcggagag aacccctcgg cgaggactca gtcggcctca agcccctgaa gaacgcctca
781 gatggtgccc tgatggacga caatcagaac gagtgggggg acgaagacct ggagaccaag
841 aagttccggt ttgaggaacc agtggttctc cctgacctgg atgatcagac tgaccaccgg
901 cagtggaccc agcagcacct ggatgccgct gacctacgtg tgtctgccat ggccccaacg
961 ccgcctcagg gggaggtaga tgctgactgc atggacgtca atgttcgagg accagatggc
1021 ttcactcccc taatgattgc ctcctgcagc ggagggggcc tggagacagg caacagtgag
1081 gaagaagaag atgcacctgc tgtcatctcc gacttcatct atcagggtgc cagcttgcac
1141 aaccagacgg accgcacagg ggagactgcc ctgcacctgg ctgcccgata ctctcgttca
1201 gatgctgcca agcgcttgct ggaggccagc gcagatgcca acatccaaga caacatgggg
1261 cgtaccccat tacatgccgc tgtttctgca gacgctcagg gtgtcttcca gatcctgctc
1321 cggaacagag ccacagatct ggatgcccga atgcatgatg gcacaacccc tctgatcctg
1381 gcggcacgcc tggccgtgga aggcatgcta gaggacctca tcaactctca cgctgatgtc
1441 aatgctgtgg atgacctagg caagtcagct ctgcactggg cagccgctgt gaacaatgtg
1501 gacgctgctg ttgtgctcct gaagaacgga gccaacaaag acatgcagaa caacaaggag
1561 gagactcccc tgttcctggc cgcccgtgag ggcagctatg agactgccaa agtgttgctg
1621 gaccactttg ccaaccggga catcacggat cacatggacc gattgccacg ggacattgca
1681 caggagcgca tgcaccacga tatcgtgcgg cttttggatg aatacaacct ggtgcgcagc
1741 ccacagctgc atggcactgc cttgggtggc acacccactc tgtctcccac actctgctcg
1801 cccaacggct acctgggcaa cctcaagtct gccacacagg gcaagaaggc ccgaaagccc
1861 agcaccaaag ggctggcttg cagtagcaag gaagctaagg acctcaaggc ccggaggaag
1921 aagtcccagg atggcaaggg ctgcctgttg gacagctcaa gcatgctgtc acccgtggac
1981 tccctcgagt caccccatgg ctacttgtca gatgtggcct caccacccct ccttccctcc
2041 ccgttccagc agtctccatc catgcctctc agccacctgc caggtatgcc tgacacccac
2101 ctgggcatca gccacttgaa tgtggcagcc aagcccgaga tggcagctct ggccggaggc
2161 agccggttgg cctttgagcc acccccacca cgcctctccc acctgcctgt agcctccagt
2221 gccagcacag tgctgagtac caatggcaca ggggctatga atttcaccgt gggtgcaccg
2281 gcaagcttga atggccagtg tgagtggctt ccccggctcc agaatggcat ggtgcccagc
2341 cagtacaacc cgctaaggcc aggtgtgact ccgggcacac taagcacaca ggcagctggc
2401 ctccagcatg gcatgatggg cccgatacac agcagcctct ccaccaatac cttgtccccg
2461 attatctacc agggcctgcc caacacaagg ctggccacac agccccacct ggtgcagacc
2521 cagcaggtgc agccacagaa cttacaaatc cagcctcaga acctgcagcc accatcgcag
2581 ccacacctca gtgtgagctc agcagccaat gggcacctgg gtcggagctt cctgagcggg
2641 gagcccagcc aggcagacgt acagccgctg ggccccagca gtctgcctgt gcacaccatt
2701 ctgccccagg aaagccaggc tctgccgaca tcactgccat cctccatggt cccacccatg
2761 accactaccc agttcctgac ccctccttct cagcacagct actcatcctc acctgtggac
2821 aacaccccca gccaccagct gcaggtgcca gagcacccct tcctcacccc atcccctgag
2881 tcccctgacc agtggtccag ctcctccccg cattccaaca tctctgattg gtccgagggc
2941 atctctagcc cgcccacgag catgccgtcc cagatcaccc acattccaga ggcatttaag
3001 tcgtcgacgg taccgcgggc ccgggatcca ccggtcgcca ccatggtgag caagggcgag
3061 gagctgttca ccggggtggt gcccatcctg gtcgagctgg acggcgacgt aaacggccac
3121 aagttcagcg tgtccggcga gggcgagggc gatgccacct acggcaagct gaccctgaag
3181 ttcatctgca ccaccggcaa gctgcccgtg ccctggccca ccctcgtgac caccctgacc
3241 tacggcgtgc agtgcttcag ccgctacccc gaccacatga agcagcacga cttcttcaag
3301 tccgccatgc ccgaaggcta cgtccaggag cgcaccatct tcttcaagga cgacggcaac
3361 tacaagaccc gcgccgaggt gaagttcgag ggcgacaccc tggtgaaccg catcgagctg
3421 aagggcatcg acttcaagga ggacggcaac atcctggggc acaagctgga gtacaactac
3481 aacagccaca acgtctatat catggccgac aagcagaaga acggcatcaa ggtgaacttc
3541 aagatccgcc acaacatcga ggacggcagc gtgcagctcg ccgaccacta ccagcagaac
3601 acccccatcg gcgacggccc cgtgctgctg cccgacaacc actacctgag cacccagtcc
3661 gccctgagca aagaccccaa cgagaagcgc gatcacatgg tcctgctgga gttcgtgacc
3721 gccgccggga tcactctcgg catggacgag ctgtacaagt aaagcggccg cgactctaga
3781 tcataatcag ccataccaca tttgtagagg ttttacttgc tttaaaaaac ctcccacacc
3841 tccccctgaa cctgaaacat aaaatgaatg caattgttgt tgttaacttg tttattgcag
3901 cttataatgg ttacaaataa agcaatagca tcacaaattt cacaaataaa gcattttttt
3961 cactgcattc tagttgtggt ttgtccaaac tcatcaatgt atcttaaggc gtaaattgta
4021 agcgttaata ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc attttttaac
4081 caataggccg aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga gatagggttg
4141 agtgttgttc cagtttggaa caagagtcca ctattaaaga acgtggactc caacgtcaaa
4201 gggcgaaaaa ccgtctatca gggcgatggc ccactacgtg aaccatcacc ctaatcaagt
4261 tttttggggt cgaggtgccg taaagcacta aatcggaacc ctaaagggag cccccgattt
4321 agagcttgac ggggaaagcc ggcgaacgtg gcgagaaagg aagggaagaa agcgaaagga
4381 gcgggcgcta gggcgctggc aagtgtagcg gtcacgctgc gcgtaaccac cacacccgcc
4441 gcgcttaatg cgccgctaca gggcgcgtca ggtggcactt ttcggggaaa tgtgcgcgga
4501 acccctattt gtttattttt ctaaatacat tcaaatatgt atccgctcat gagacaataa
4561 ccctgataaa tgcttcaata atattgaaaa aggaagagtc ctgaggcgga aagaaccagc
4621 tgtggaatgt gtgtcagtta gggtgtggaa agtccccagg ctccccagca ggcagaagta
4681 tgcaaagcat gcatctcaat tagtcagcaa ccaggtgtgg aaagtcccca ggctccccag
4741 caggcagaag tatgcaaagc atgcatctca attagtcagc aaccatagtc ccgcccctaa
4801 ctccgcccat cccgccccta actccgccca gttccgccca ttctccgccc catggctgac
4861 taattttttt tatttatgca gaggccgagg ccgcctcggc ctctgagcta ttccagaagt
4921 agtgaggagg cttttttgga ggcctaggct tttgcaaaga tcgatcaaga gacaggatga
4981 ggatcgtttc gcatgattga acaagatgga ttgcacgcag gttctccggc cgcttgggtg
5041 gagaggctat tcggctatga ctgggcacaa cagacaatcg gctgctctga tgccgccgtg
5101 ttccggctgt cagcgcaggg gcgcccggtt ctttttgtca agaccgacct gtccggtgcc
5161 ctgaatgaac tgcaagacga ggcagcgcgg ctatcgtggc tggccacgac gggcgttcct
5221 tgcgcagctg tgctcgacgt tgtcactgaa gcgggaaggg actggctgct attgggcgaa
5281 gtgccggggc aggatctcct gtcatctcac cttgctcctg ccgagaaagt atccatcatg
5341 gctgatgcaa tgcggcggct gcatacgctt gatccggcta cctgcccatt cgaccaccaa
5401 gcgaaacatc gcatcgagcg agcacgtact cggatggaag ccggtcttgt cgatcaggat
5461 gatctggacg aagagcatca ggggctcgcg ccagccgaac tgttcgccag gctcaaggcg
5521 agcatgcccg acggcgagga tctcgtcgtg acccatggcg atgcctgctt gccgaatatc
5581 atggtggaaa atggccgctt ttctggattc atcgactgtg gccggctggg tgtggcggac
5641 cgctatcagg acatagcgtt ggctacccgt gatattgctg aagagcttgg cggcgaatgg
5701 gctgaccgct tcctcgtgct ttacggtatc gccgctcccg attcgcagcg catcgccttc
5761 tatcgccttc ttgacgagtt cttctgagcg ggactctggg gttcgaaatg accgaccaag
5821 cgacgcccaa cctgccatca cgagatttcg attccaccgc cgccttctat gaaaggttgg
5881 gcttcggaat cgttttccgg gacgccggct ggatgatcct ccagcgcggg gatctcatgc
5941 tggagttctt cgcccaccct agggggaggc taactgaaac acggaaggag acaataccgg
6001 aaggaacccg cgctatgacg gcaataaaaa gacagaataa aacgcacggt gttgggtcgt
6061 ttgttcataa acgcggggtt cggtcccagg gctggcactc tgtcgatacc ccaccgagac
6121 cccattgggg ccaatacgcc cgcgtttctt ccttttcccc accccacccc ccaagttcgg
6181 gtgaaggccc agggctcgca gccaacgtcg gggcggcagg ccctgccata gcctcaggtt
6241 actcatatat actttagatt gatttaaaac ttcattttta atttaaaagg atctaggtga
6301 agatcctttt tgataatctc atgaccaaaa tcccttaacg tgagttttcg ttccactgag
6361 cgtcagaccc cgtagaaaag atcaaaggat cttcttgaga tccttttttt ctgcgcgtaa
6421 tctgctgctt gcaaacaaaa aaaccaccgc taccagcggt ggtttgtttg ccggatcaag
6481 agctaccaac tctttttccg aaggtaactg gcttcagcag agcgcagata ccaaatactg
6541 tccttctagt gtagccgtag ttaggccacc acttcaagaa ctctgtagca ccgcctacat
6601 acctcgctct gctaatcctg ttaccagtgg ctgctgccag tggcgataag tcgtgtctta
6661 ccgggttgga ctcaagacga tagttaccgg ataaggcgca gcggtcgggc tgaacggggg
6721 gttcgtgcac acagcccagc ttggagcgaa cgacctacac cgaactgaga tacctacagc
6781 gtgagctatg agaaagcgcc acgcttcccg aagggagaaa ggcggacagg tatccggtaa
6841 gcggcagggt cggaacagga gagcgcacga gggagcttcc agggggaaac gcctggtatc
6901 tttatagtcc tgtcgggttt cgccacctct gacttgagcg tcgatttttg tgatgctcgt
6961 caggggggcg gagcctatgg aaaaacgcca gcaacgcggc ctttttacgg ttcctggcct
7021 tttgctggcc ttttgctcac atgttctttc ctgcgttatc ccctgattct gtggataacc
7081 gtattaccgc catgcat
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pCDNA3-HA-p53人源基因质粒
别称: NM_001308090.1;HD7;HD7A;HDAC7A
启动子：CMV
复制子: pUC
终止子: SV40 poly(A) signal
质粒分类: 基因文库质粒；大鼠基因质粒；大鼠真核质粒
质粒大小：7079bp
质粒标签：C-EGFP
原核抗性: Kan
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
| 表达宿主: | 293T等哺乳细胞 |
|---|---|
| 培养条件: | 5%CO2，37℃ |
| 诱导方式: | 无需诱导 |
| 5'测序引物: | pEGFP-N-5（TGGGAGGTCTATATAAGCAGAG） |
| 3'测序引物: | pEGFP-N-3（CGTCGCCGTCCAGCTCGACCAG） |
| 备注: | 本质粒由上海交通大学的金卫林教授分享至淼灵质粒平台。 |
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：大鼠
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：
质粒简介
pEGFP-Notch1-NICD-r质粒在CMV强启动子的作用下表达EGFP-Notch1-NICD融合蛋白，其中的跨膜大分子Notch1受体主要参与发育过程中的细胞命运的选择。其G1743和V1744部位发生水解释放产生的活性片段－胞质段（Notch1 intracellular cytoplasmic domain，NICD）能被转运进核，激活下激靶基因的表达，Notch1参与细胞的增殖、分化、程序性死亡、发育过程中的形态发生和器官形成等许多重要过程。我们构建的pEGFP-Notch1-NICD-r质粒转染进COS-7L细胞，可以观察到绿色荧光蛋白为核定位，提示克隆的NICD基因符合进一步研究NICD在分裂后神经元的功能。
质粒分享者信息：金卫林，上海交通大学硕士生导师。1994 年，武汉大学生物化学专业毕业，获学士学位；2004年第四军医大学全军神经科学研究所神经生物学研究生毕业，获博士学位。2005年底转业到上海交通大学，聘为神经科学研究所副研究员。中国神经科学学会会员。实验室的研究兴趣为：中枢神经发育再生分子信号和脑肿瘤的分子干预。近十年来, 一直聚焦研究Nogo和srGAPs的功能和信号机制研究。主持四项国家自然科学基金委的面上项目，如“精神发育迟滞候选基因MEGAP/srGAP3调控树突发育的双模态机制研究” 、 “神经元Nogo剪接异构体对突起生长和细胞凋亡的双重调控作用及其机制研究” 和“nNOS基因作为神经元细胞核Nogo-A蛋白的靶标研究”。相关结果已经整理论文发表在Cell、Cell Death and Differention、Mol Cell Neurosci、Anesthesiology、J Comp Neurol、Cell Mol Neurobiol、Neurosignals、Neurosci Lett等国际杂志上。实验室研究成果被国际广泛关注和引用。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7097 bp ds-DNA circular SYN 04-JUL-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pEGFP-Notch1-NICD-r
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 7097)
AUTHORS yinchu
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Tuesday, July 4, 2017 from SnapGene Viewer 3.3.4
http://www.snapgene.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7097
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 61..364
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 365..568
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
misc_feature 637..3002
/label=Notch1-NICD-r
/note="Rattus norvegicus notch 1 (Notch1), mRNA
NCBI Reference Sequence: NM_001105721.1
"
CDS 3043..3762
/codon_start=1
/product="enhanced GFP"
/label=EGFP
/note="mammalian codon-optimized"
/translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
EFVTAAGITLGMDELYK"
polyA_signal 3885..4006
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(4013..4468)
/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 4495..4599
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
promoter 4601..4958
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 4809..4944
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
CDS 4993..5787
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/label=NeoR/KanR
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATC-PFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 6019..6066
/label=HSV TK poly(A) signal
/note="herpes simplex virus thymidine kinase
polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"
rep_origin 6395..6983
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg
61 cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt
121 gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca
181 atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc
241 aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta
301 catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac
361 catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg
421 atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg
481 ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt
541 acggtgggag gtctatataa gcagagctgg tttagtgaac cgtcagatcc gctagcgcta
601 ccggactcag atctcgagct caagcttcga attctgatgc tgctgtcccg caagcgcagg
661 cggcagcatg gccagctctg gttccctgag ggtttcaaag tgtcagaggc cagcaagaag
721 aagcggagag aacccctcgg cgaggactca gtcggcctca agcccctgaa gaacgcctca
781 gatggtgccc tgatggacga caatcagaac gagtgggggg acgaagacct ggagaccaag
841 aagttccggt ttgaggaacc agtggttctc cctgacctgg atgatcagac tgaccaccgg
901 cagtggaccc agcagcacct ggatgccgct gacctacgtg tgtctgccat ggccccaacg
961 ccgcctcagg gggaggtaga tgctgactgc atggacgtca atgttcgagg accagatggc
1021 ttcactcccc taatgattgc ctcctgcagc ggagggggcc tggagacagg caacagtgag
1081 gaagaagaag atgcacctgc tgtcatctcc gacttcatct atcagggtgc cagcttgcac
1141 aaccagacgg accgcacagg ggagactgcc ctgcacctgg ctgcccgata ctctcgttca
1201 gatgctgcca agcgcttgct ggaggccagc gcagatgcca acatccaaga caacatgggg
1261 cgtaccccat tacatgccgc tgtttctgca gacgctcagg gtgtcttcca gatcctgctc
1321 cggaacagag ccacagatct ggatgcccga atgcatgatg gcacaacccc tctgatcctg
1381 gcggcacgcc tggccgtgga aggcatgcta gaggacctca tcaactctca cgctgatgtc
1441 aatgctgtgg atgacctagg caagtcagct ctgcactggg cagccgctgt gaacaatgtg
1501 gacgctgctg ttgtgctcct gaagaacgga gccaacaaag acatgcagaa caacaaggag
1561 gagactcccc tgttcctggc cgcccgtgag ggcagctatg agactgccaa agtgttgctg
1621 gaccactttg ccaaccggga catcacggat cacatggacc gattgccacg ggacattgca
1681 caggagcgca tgcaccacga tatcgtgcgg cttttggatg aatacaacct ggtgcgcagc
1741 ccacagctgc atggcactgc cttgggtggc acacccactc tgtctcccac actctgctcg
1801 cccaacggct acctgggcaa cctcaagtct gccacacagg gcaagaaggc ccgaaagccc
1861 agcaccaaag ggctggcttg cagtagcaag gaagctaagg acctcaaggc ccggaggaag
1921 aagtcccagg atggcaaggg ctgcctgttg gacagctcaa gcatgctgtc acccgtggac
1981 tccctcgagt caccccatgg ctacttgtca gatgtggcct caccacccct ccttccctcc
2041 ccgttccagc agtctccatc catgcctctc agccacctgc caggtatgcc tgacacccac
2101 ctgggcatca gccacttgaa tgtggcagcc aagcccgaga tggcagctct ggccggaggc
2161 agccggttgg cctttgagcc acccccacca cgcctctccc acctgcctgt agcctccagt
2221 gccagcacag tgctgagtac caatggcaca ggggctatga atttcaccgt gggtgcaccg
2281 gcaagcttga atggccagtg tgagtggctt ccccggctcc agaatggcat ggtgcccagc
2341 cagtacaacc cgctaaggcc aggtgtgact ccgggcacac taagcacaca ggcagctggc
2401 ctccagcatg gcatgatggg cccgatacac agcagcctct ccaccaatac cttgtccccg
2461 attatctacc agggcctgcc caacacaagg ctggccacac agccccacct ggtgcagacc
2521 cagcaggtgc agccacagaa cttacaaatc cagcctcaga acctgcagcc accatcgcag
2581 ccacacctca gtgtgagctc agcagccaat gggcacctgg gtcggagctt cctgagcggg
2641 gagcccagcc aggcagacgt acagccgctg ggccccagca gtctgcctgt gcacaccatt
2701 ctgccccagg aaagccaggc tctgccgaca tcactgccat cctccatggt cccacccatg
2761 accactaccc agttcctgac ccctccttct cagcacagct actcatcctc acctgtggac
2821 aacaccccca gccaccagct gcaggtgcca gagcacccct tcctcacccc atcccctgag
2881 tcccctgacc agtggtccag ctcctccccg cattccaaca tctctgattg gtccgagggc
2941 atctctagcc cgcccacgag catgccgtcc cagatcaccc acattccaga ggcatttaag
3001 tcgtcgacgg taccgcgggc ccgggatcca ccggtcgcca ccatggtgag caagggcgag
3061 gagctgttca ccggggtggt gcccatcctg gtcgagctgg acggcgacgt aaacggccac
3121 aagttcagcg tgtccggcga gggcgagggc gatgccacct acggcaagct gaccctgaag
3181 ttcatctgca ccaccggcaa gctgcccgtg ccctggccca ccctcgtgac caccctgacc
3241 tacggcgtgc agtgcttcag ccgctacccc gaccacatga agcagcacga cttcttcaag
3301 tccgccatgc ccgaaggcta cgtccaggag cgcaccatct tcttcaagga cgacggcaac
3361 tacaagaccc gcgccgaggt gaagttcgag ggcgacaccc tggtgaaccg catcgagctg
3421 aagggcatcg acttcaagga ggacggcaac atcctggggc acaagctgga gtacaactac
3481 aacagccaca acgtctatat catggccgac aagcagaaga acggcatcaa ggtgaacttc
3541 aagatccgcc acaacatcga ggacggcagc gtgcagctcg ccgaccacta ccagcagaac
3601 acccccatcg gcgacggccc cgtgctgctg cccgacaacc actacctgag cacccagtcc
3661 gccctgagca aagaccccaa cgagaagcgc gatcacatgg tcctgctgga gttcgtgacc
3721 gccgccggga tcactctcgg catggacgag ctgtacaagt aaagcggccg cgactctaga
3781 tcataatcag ccataccaca tttgtagagg ttttacttgc tttaaaaaac ctcccacacc
3841 tccccctgaa cctgaaacat aaaatgaatg caattgttgt tgttaacttg tttattgcag
3901 cttataatgg ttacaaataa agcaatagca tcacaaattt cacaaataaa gcattttttt
3961 cactgcattc tagttgtggt ttgtccaaac tcatcaatgt atcttaaggc gtaaattgta
4021 agcgttaata ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc attttttaac
4081 caataggccg aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga gatagggttg
4141 agtgttgttc cagtttggaa caagagtcca ctattaaaga acgtggactc caacgtcaaa
4201 gggcgaaaaa ccgtctatca gggcgatggc ccactacgtg aaccatcacc ctaatcaagt
4261 tttttggggt cgaggtgccg taaagcacta aatcggaacc ctaaagggag cccccgattt
4321 agagcttgac ggggaaagcc ggcgaacgtg gcgagaaagg aagggaagaa agcgaaagga
4381 gcgggcgcta gggcgctggc aagtgtagcg gtcacgctgc gcgtaaccac cacacccgcc
4441 gcgcttaatg cgccgctaca gggcgcgtca ggtggcactt ttcggggaaa tgtgcgcgga
4501 acccctattt gtttattttt ctaaatacat tcaaatatgt atccgctcat gagacaataa
4561 ccctgataaa tgcttcaata atattgaaaa aggaagagtc ctgaggcgga aagaaccagc
4621 tgtggaatgt gtgtcagtta gggtgtggaa agtccccagg ctccccagca ggcagaagta
4681 tgcaaagcat gcatctcaat tagtcagcaa ccaggtgtgg aaagtcccca ggctccccag
4741 caggcagaag tatgcaaagc atgcatctca attagtcagc aaccatagtc ccgcccctaa
4801 ctccgcccat cccgccccta actccgccca gttccgccca ttctccgccc catggctgac
4861 taattttttt tatttatgca gaggccgagg ccgcctcggc ctctgagcta ttccagaagt
4921 agtgaggagg cttttttgga ggcctaggct tttgcaaaga tcgatcaaga gacaggatga
4981 ggatcgtttc gcatgattga acaagatgga ttgcacgcag gttctccggc cgcttgggtg
5041 gagaggctat tcggctatga ctgggcacaa cagacaatcg gctgctctga tgccgccgtg
5101 ttccggctgt cagcgcaggg gcgcccggtt ctttttgtca agaccgacct gtccggtgcc
5161 ctgaatgaac tgcaagacga ggcagcgcgg ctatcgtggc tggccacgac gggcgttcct
5221 tgcgcagctg tgctcgacgt tgtcactgaa gcgggaaggg actggctgct attgggcgaa
5281 gtgccggggc aggatctcct gtcatctcac cttgctcctg ccgagaaagt atccatcatg
5341 gctgatgcaa tgcggcggct gcatacgctt gatccggcta cctgcccatt cgaccaccaa
5401 gcgaaacatc gcatcgagcg agcacgtact cggatggaag ccggtcttgt cgatcaggat
5461 gatctggacg aagagcatca ggggctcgcg ccagccgaac tgttcgccag gctcaaggcg
5521 agcatgcccg acggcgagga tctcgtcgtg acccatggcg atgcctgctt gccgaatatc
5581 atggtggaaa atggccgctt ttctggattc atcgactgtg gccggctggg tgtggcggac
5641 cgctatcagg acatagcgtt ggctacccgt gatattgctg aagagcttgg cggcgaatgg
5701 gctgaccgct tcctcgtgct ttacggtatc gccgctcccg attcgcagcg catcgccttc
5761 tatcgccttc ttgacgagtt cttctgagcg ggactctggg gttcgaaatg accgaccaag
5821 cgacgcccaa cctgccatca cgagatttcg attccaccgc cgccttctat gaaaggttgg
5881 gcttcggaat cgttttccgg gacgccggct ggatgatcct ccagcgcggg gatctcatgc
5941 tggagttctt cgcccaccct agggggaggc taactgaaac acggaaggag acaataccgg
6001 aaggaacccg cgctatgacg gcaataaaaa gacagaataa aacgcacggt gttgggtcgt
6061 ttgttcataa acgcggggtt cggtcccagg gctggcactc tgtcgatacc ccaccgagac
6121 cccattgggg ccaatacgcc cgcgtttctt ccttttcccc accccacccc ccaagttcgg
6181 gtgaaggccc agggctcgca gccaacgtcg gggcggcagg ccctgccata gcctcaggtt
6241 actcatatat actttagatt gatttaaaac ttcattttta atttaaaagg atctaggtga
6301 agatcctttt tgataatctc atgaccaaaa tcccttaacg tgagttttcg ttccactgag
6361 cgtcagaccc cgtagaaaag atcaaaggat cttcttgaga tccttttttt ctgcgcgtaa
6421 tctgctgctt gcaaacaaaa aaaccaccgc taccagcggt ggtttgtttg ccggatcaag
6481 agctaccaac tctttttccg aaggtaactg gcttcagcag agcgcagata ccaaatactg
6541 tccttctagt gtagccgtag ttaggccacc acttcaagaa ctctgtagca ccgcctacat
6601 acctcgctct gctaatcctg ttaccagtgg ctgctgccag tggcgataag tcgtgtctta
6661 ccgggttgga ctcaagacga tagttaccgg ataaggcgca gcggtcgggc tgaacggggg
6721 gttcgtgcac acagcccagc ttggagcgaa cgacctacac cgaactgaga tacctacagc
6781 gtgagctatg agaaagcgcc acgcttcccg aagggagaaa ggcggacagg tatccggtaa
6841 gcggcagggt cggaacagga gagcgcacga gggagcttcc agggggaaac gcctggtatc
6901 tttatagtcc tgtcgggttt cgccacctct gacttgagcg tcgatttttg tgatgctcgt
6961 caggggggcg gagcctatgg aaaaacgcca gcaacgcggc ctttttacgg ttcctggcct
7021 tttgctggcc ttttgctcac atgttctttc ctgcgttatc ccctgattct gtggataacc
7081 gtattaccgc catgcat
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4044/pCMV-SPORT6-OXCT1人源基因质粒 |
| P4045/pCMV-SPORT6-UTP15（1同义突变）人源基因质粒 |
| P4046/pCMV-SPORT6-RPS3A人源基因质粒 |
| P4047/pCMV-SPORT6-RAB38（1同义突变）人源基因质粒 |
| P4048/pCMV-SPORT6-ABRAXAS2人源基因质粒 |
| P4049/pCMV-SPORT6-SMNDC1人源基因质粒 |
| P4050/pCMV-SPORT6-C11orf68人源基因质粒 |
| P4051/pCMV-SPORT6-CXADR（1同义突变）人源基因质粒 |
| P4052/pCMV-SPORT6-NFATC2IP（482-1260bp）人源基因质粒 |
| P4053/pCMV-SPORT6-SLC25A11人源基因质粒 |
| P4054/pCMV-SPORT6-MINA人源基因质粒 |
| P4055/pCMV-SPORT6-PRKACB人源基因质粒 |
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验相关实验
就可以了。 如果我找到个质粒，将这个基因连上去之后，怎么才能鉴别/筛选目的基因正反向的问题 你可以根据质粒图谱看，定向将启动子CMV后 将基因定向克隆进去，利用酶切反应及连接的特异性。 ps： 感觉你对自己的实验目的都不是很清楚，这很危险！宁可不做，就怕费力不讨好！ bigbang_0_0 用pEGFP质粒，很适合GFP标签的蛋白的表达； 如果做稳定转染，需要用G418筛选标记 (neo r)
（只有上游T7无下游SP6）：T7+目的基因-R pEGFP（MCS两侧无通用序列）：自己设计靠近两侧的特异性引物（也可以求助 于测序公司，如：上海英骏/Invitrogen，他们有绝大多数载体的测序用的引物序列） 仔细的阅读你的载体图，选择针对阳性重组子的特异性引物组合 2. 菌落的处理 （我用的是质粒小提，用15ml离心管摇菌，通常加5ml培养基） 挑取新鲜菌落于含抗性的（LB）培养基中 37°C 200rpm摇床 摇2-4小时
，Chl pTALEN_v2 (NN) 基因敲除质粒 Amp，Chl pTALEN_v2 (ND) 基因敲除质粒 Amp，Chl pEGFP-1 哺乳细胞质粒 Kan 真核表达载体,表达
pEGFP-Notch1-NICD-r大鼠基因质粒
￥100 - 1000
