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- Xybio
- 上海
- P1238
- 2025年07月12日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pT7-Luc
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pT7-Luc大肠报告质粒
别称: pT7-Luc
| 克隆菌株: | DH5a |
|---|---|
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 质粒宿主： | 大肠杆菌 |
|---|---|
| 质粒用途： | |
| 片段类型： | |
| 片段物种： | |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | |
| 荧光标记： | Fluc |
质粒简介
pT7-Luc质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P1487/Rosetta(DE3)pLysS大肠表达菌 |
| P1488/BL21 Star(DE3)大肠表达菌 |
| P1489/Origami B(DE3)大肠表达菌 |
| P1490/Origami B(DE3)pLysS大肠表达菌 |
| P1491/Rosetta-gami-B(DE3)大肠表达菌 |
| P1492/Origami2(DE3)大肠表达菌 |
| P1493/Origami2 (DE3) pLysS大肠表达菌 |
| P1494/Rosetta-gami (DE3) pLysS大肠表达菌 |
| P1495/ArcticExpress(DE3)RP大肠表达菌 |
| P1496/JM109(DE3)大肠表达菌 |
| P1497/M15(pREP4)大肠表达菌 |
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文献和实验panzerking 我在设计实验 想用NF-kB-luc做报告基因 是不是一定要用β-galactosidase 报告质粒或者Renilla荧光素酶报告质粒作为内参？ 我看了有些文献 好像有的用 有的一个都没用 是有这样的情况吗 或者是不是只要保证control组NF-kB-luc转染条件一样就可以做为可用的数据了？ lwjssry 不可以，一定要用内参，需要校正对照和处理组细胞数目的差异
【求助】请教荧光素酶报告基因检测NF-KB转录活性需要哪些试剂？
阿兰梦 之前没有做过，只是根据文献的简单描述依葫芦画瓢，但是毕竟是好几千的试剂，生怕弄错了 临床医生一下子做科研，确实很多地方不懂，很艰难 目的是想用双荧光素酶报告基因的方法检测药物内皮细胞的NF-KB的转录活性影响，需要买pNF-kB-Luc 报告质粒，碧云天有；然后需要双荧光素酶报告基因检测系统，promega有；另外还需要一个内参，文献是β-半乳糖苷酶 问题是： 1、不知道买哪一个对： http://www
―1、pro―caspase―9、ATP／dATP形成凋亡体(apoptosome)，凋亡体引起的变构能大大加强caspase―9的活性，活化的caspase―9可激活caspase―3、caspase―6和caspase―7等成员，进而引发caspases级联反应，导致细胞凋亡。此时，一个核心的问题是细胞色素C究竟通过哪一种途径释放到细胞质中?由于大部分凋亡细胞中很少发生线粒体肿胀和线粒体外膜破裂的现象，所以目前普遍认为细胞色素C是通过线粒体PT孑L(permeabilitytransitionpore
