pUC-SPYCE(MR)植物双分子荧光质粒

基本信息
名称：pUC-SPYCE(MR)植物双分子荧光质粒
别称: pUC-SPYCE(MR)

启动子:	35s
复制子:	pUC
原核抗性:	Amp
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	37度

质粒属性

载体宿主：	植物
载体用途：	双分子荧光
基因种属：
基因类型：
原核抗性：	Amp
筛选标记：
荧光蛋白：

质粒简介
 pUC-SPYCE(MR)是一个植物双分子荧光BIFC质粒。
质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                4113 bp ds-DNA     circular SYN 04-JAN-2018
DEFINITION  synthetic circular DNA
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..4113
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     promoter        863..1208
                     /label=CaMV 35S promoter
                     /note="strong constitutive promoter from cauliflower mosaic
                     virus"
     CDS             1226..1477
                     /codon_start=1
                     /product="C-terminal fragment of mVenus for use in 
                     bimolecular fluorescence complementation (BiFC) (Kodama and
                     Hu, 2010)"
                     /label=VC155
                     /translation="DKQKNGIKVNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNH
                     YLSYQSKLSKDPNEKRDHMVLLEFVTAAGITLGMDELYK"
     CDS             1478..1504
                     /codon_start=1
                     /product="HA (human influenza hemagglutinin) epitope tag"
                     /label=HA
                     /translation="YPYDVPDYA"
     misc_feature    1505..1564
                     /label=MCS
     terminator      1575..1827
                     /label=NOS terminator
                     /note="nopaline synthase terminator and poly(A) signal"
     promoter        2326..2430
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
     CDS             2431..3291
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /label=AmpR
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     rep_origin      3462..4050
                     /direction=RIGHT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
ORIGIN
        1 tttcctgcgt tatcccctga ttctgtggat aaccgtatta ccgcctttga gtgagctgat
       61 accgctcgcc gcagccgaac gaccgagcgc agcgagtcag tgagcgagga agcggaagag
      121 cgcccaatac gcaaaccgcc tctccccgcg cgttggccga ttcattaatg cagctggcac
      181 gacaggtttc ccgactggaa agcgggcagt gagcgcaacg caattaatgt gagttagctc
      241 actcattagg caccccaggc tttacacttt atgcttccgg ctcgtatgtt gtgtggaatt
      301 gtgagcggat aacaatttca cacaggaaac agctatgacc atgattacgc caagcttgca
      361 tgcctgcagg tccccagatt agccttttca atttcagaaa gaatgctaac ccacagatgg
      421 ttagagaggc ttacgcagca ggtctcatca agacgatcta cccgagcaat aatctccagg
      481 aaatcaaata ccttcccaag aaggttaaag atgcagtcaa aagattcagg actaactgca
      541 tcaagaacac agagaaagat atatttctca agatcagaag tactattcca gtatggacga
      601 ttcaaggctt gcttcacaaa ccaaggcaag taatagagat tggagtctct aaaaaggtag
      661 ttcccactga atcaaaggcc atggagtcaa agattcaaat agaggaccta acagaactcg
      721 ccgtaaagac tggcgaacag ttcatacaga gtctcttacg actcaatgac aagaagaaaa
      781 tcttcgtcaa catggtggag cacgacacac ttgtctactc caaaaatatc aaagatacag
      841 tctcagaaga ccaaagggca attgagactt ttcaacaaag ggtaatatcc ggaaacctcc
      901 tcggattcca ttgcccagct atctgtcact ttattgtgaa gatagtggaa aaggaaggtg
      961 gctcctacaa atgccatcat tgcgataaag gaaaggccat cgttgaagat gcctctgccg
     1021 acagtggtcc caaagatgga cccccaccca cgaggagcat cgtggaaaaa gaagacgttc
     1081 caaccacgtc ttcaaagcaa gtggattgat gtgatatctc cactgacgta agggatgacg
     1141 cacaatccca ctatccttcg caagaccctt cctctatata aggaagttca tttcatttgg
     1201 agagaacacg ggggactcta gaatggacaa gcagaagaac ggcatcaagg tgaacttcaa
     1261 gatccgccac aacatcgagg acggcagcgt gcagctcgcc gaccactacc agcagaacac
     1321 ccccatcggc gacggccccg tgctgctgcc cgacaaccac tacctgagct accagtccaa
     1381 gctgagcaaa gaccccaacg agaagcgcga tcacatggtc ctgctggagt tcgtgaccgc
     1441 cgccgggatc actctcggca tggacgagct gtacaagtac ccatacgatg ttccagatta
     1501 cgctgggccc aggcctacta gtggatccgt cgacctcgag ggtaccgctc ccgggtagga
     1561 gctcgaattt ccccgatcgt tcaaacattt ggcaataaag tttcttaaga ttgaatcctg
     1621 ttgccggtct tgcgatgatt atcatataat ttctgttgaa ttacgttaag catgtaataa
     1681 ttaacatgta atgcatgacg ttatttatga gatgggtttt tatgattaga gtcccgcaat
     1741 tatacattta atacgcgata gaaaacaaaa tatagcgcgc aaactaggat aaattatcgc
     1801 gcgcggtgtc atctatgtta ctagatcggg aattcactgg ccgtcgtttt acaacgtcgt
     1861 gactgggaaa accctggcgt tacccaactt aatcgccttg cagcacatcc ccctttcgcc
     1921 agctggcgta atagcgaaga ggcccgcacc gatcgccctt cccaacagtt gcgcagcctg
     1981 aatggcgaat ggcgcctgat gcggtatttt ctccttacgc atctgtgcgg tatttcacac
     2041 cgcatatggt gcactctcag tacaatctgc tctgatgccg catagttaag ccagccccga
     2101 cacccgccaa cacccgctga cgcgccctga cgggcttgtc tgctcccggc atccgcttac
     2161 agacaagctg tgaccgtctc cgggagctgc atgtgtcaga ggttttcacc gtcatcaccg
     2221 aaacgcgcga gacgaaaggg cctcgtgata cgcctatttt tataggttaa tgtcatgata
     2281 ataatggttt cttagacgtc aggtggcact tttcggggaa atgtgcgcgg aacccctatt
     2341 tgtttatttt tctaaataca ttcaaatatg tatccgctca tgagacaata accctgataa
     2401 atgcttcaat aatattgaaa aaggaagagt atgagtattc aacatttccg tgtcgccctt
     2461 attccctttt ttgcggcatt ttgccttcct gtttttgctc acccagaaac gctggtgaaa
     2521 gtaaaagatg ctgaagatca gttgggtgca cgagtgggtt acatcgaact ggatctcaac
     2581 agcggtaaga tccttgagag ttttcgcccc gaagaacgtt ttccaatgat gagcactttt
     2641 aaagttctgc tatgtggcgc ggtattatcc cgtattgacg ccgggcaaga gcaactcggt
     2701 cgccgcatac actattctca gaatgacttg gttgagtact caccagtcac agaaaagcat
     2761 cttacggatg gcatgacagt aagagaatta tgcagtgctg ccataaccat gagtgataac
     2821 actgcggcca acttacttct gacaacgatc ggaggaccga aggagctaac cgcttttttg
     2881 cacaacatgg gggatcatgt aactcgcctt gatcgttggg aaccggagct gaatgaagcc
     2941 ataccaaacg acgagcgtga caccacgatg cctgtagcaa tggcaacaac gttgcgcaaa
     3001 ctattaactg gcgaactact tactctagct tcccggcaac aattaataga ctggatggag
     3061 gcggataaag ttgcaggacc acttctgcgc tcggcccttc cggctggctg gtttattgct
     3121 gataaatctg gagccggtga gcgtgggtct cgcggtatca ttgcagcact ggggccagat
     3181 ggtaagccct cccgtatcgt agttatctac acgacgggga gtcaggcaac tatggatgaa
     3241 cgaaatagac agatcgctga gataggtgcc tcactgatta agcattggta actgtcagac
     3301 caagtttact catatatact ttagattgat ttaaaacttc atttttaatt taaaaggatc
     3361 taggtgaaga tcctttttga taatctcatg accaaaatcc cttaacgtga gttttcgttc
     3421 cactgagcgt cagaccccgt agaaaagatc aaaggatctt cttgagatcc tttttttctg
     3481 cgcgtaatct gctgcttgca aacaaaaaaa ccaccgctac cagcggtggt ttgtttgccg
     3541 gatcaagagc taccaactct ttttccgaag gtaactggct tcagcagagc gcagatacca
     3601 aatactgttc ttctagtgta gccgtagtta ggccaccact tcaagaactc tgtagcaccg
     3661 cctacatacc tcgctctgct aatcctgtta ccagtggctg ctgccagtgg cgataagtcg
     3721 tgtcttaccg ggttggactc aagacgatag ttaccggata aggcgcagcg gtcgggctga
     3781 acggggggtt cgtgcacaca gcccagcttg gagcgaacga cctacaccga actgagatac
     3841 ctacagcgtg agctatgaga aagcgccacg cttcccgaag ggagaaaggc ggacaggtat
     3901 ccggtaagcg gcagggtcgg aacaggagag cgcacgaggg agcttccagg gggaaacgcc
     3961 tggtatcttt atagtcctgt cgggtttcgc cacctctgac ttgagcgtcg atttttgtga
     4021 tgctcgtcag gggggcggag cctatggaaa aacgccagca acgcggcctt tttacggttc
     4081 ctggcctttt gctggccttt tgctcacatg ttc
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P1112/pECMV-3×FLAG-Myc-6×His哺乳表达质粒

P0160/pCDNA3.1-3×HA-N哺乳表达质粒

P1042/pCDNA3.1-3×Myc哺乳表达质粒

P0896/pCDNA3.1-His B哺乳表达质粒

P0161/pCDNA3.1-Myc-HisA(-)哺乳表达质粒

P0162/pCDNA3.1-Myc-HisB(-)哺乳表达质粒

P1017/pCDNA3.1(-)/myc-His C哺乳表达质粒

P0343/pCDNA3.1-Myc-HisB哺乳表达质粒

P0163/pCDNA3.1-V5-HisB哺乳表达质粒

P1102/pCDNA3.1-Myc-BioID2-MCS 哺乳表达质粒

P1132/MCS-BioID2-HA哺乳表达质粒