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-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid#19365;HIF1A;HIF-1-alphaHIF-1
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：HA-HIF1alpha-wt-pBabe-puro人源基因质粒
别称: Plasmid#19365;HIF1A;HIF-1-alphaHIF-1
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：Puro
克隆菌株: Stbl3
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Puro
荧光蛋白：
质粒简介
HA-HIF1alpha-wt-pBabe-puro是一个人源基因哺乳表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7703 bp ds-DNA circular SYN 28-SEP-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS HA-HIF1alpha-wt-pBabe-puro
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 7703)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Sep 28, 2017 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7703
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
LTR 8..477
/note="long terminal repeat from Moloney murine leukemia
virus"
misc_feature 542..741
/label=MMLV Psi
/note="packaging signal of Moloney murine leukemia virus
(MMLV)"
CDS 934..1350
/label=gag (truncated)
/note="truncated Moloney murine leukemia virus (MMLV) gag
gene lacking the start codon"
CDS 1379..1405
/codon_start=1
/product="HA (human influenza hemagglutinin) epitope tag"
/label=HA
/translation="YPYDVPDYA"
misc_feature 1406..3904
/label=HIF1alpha
promoter 3947..4276
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 4127..4262
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
CDS 4286..4885
/codon_start=1
/gene="pac from Streptomyces"
/product="puromycin N-acetyltransferase"
/label=PuroR
/note="confers resistance to puromycin"
/translation="MTEYKPTVRLATRDDVPRAVRTLAAAFADYPATRHTVDPDRHIER
VTELQELFLTRVGLDIGKVWVADDGAAVAVWTTPESVEAGAVFAEIGPRMAELSGSRLA
AQQQMEGLLAPHRPKEPAWFLATVGVSPDHQGKGLGSAVVLPGVEAAERAGVPAFLETS
APRNLPFYERLGFTVTADVECPKDRATWCMTRKPGA"
LTR 4984..5577
/note="long terminal repeat from Moloney murine leukemia
virus"
rep_origin complement(5949..6537)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(6715..7575)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(7576..7680)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
ORIGIN
1 ctgcagcctg aatatgggcc aaacaggata tctgtggtaa gcagttcctg ccccggctca
61 gggccaagaa cagatggaac agctgaatat gggccaaaca ggatatctgt ggtaagcagt
121 tcctgccccg gctcagggcc aagaacagat ggtccccaga tgcggtccag ccctcagcag
181 tttctagaga accatcagat gtttccaggg tgccccaagg acctgaaatg accctgtgcc
241 ttatttgaac taaccaatca gttcgcttct cgcttctgtt cgcgcgcttc tgctccccga
301 gctcaataaa agagcccaca acccctcact cggggcgcca gtcctccgat tgactgagtc
361 gcccgggtac ccgtgtatcc aataaaccct cttgcagttg catccgactt gtggtctcgc
421 tgttccttgg gagggtctcc tctgagtgat tgactacccg tcagcggggg tctttcattt
481 gggggctcgt ccgggatcgg gagacccctg cccagggacc accgacccac caccgggagg
541 taagctggcc agcaacttat ctgtgtctgt ccgattgtct agtgtctatg actgatttta
601 tgcgcctgcg tcggtactag ttagctaact agctctgtat ctggcggacc cgtggtggaa
661 ctgacgagtt ctgaacaccc ggccgcaacc ctgggagacg tcccagggac tttgggggcc
721 gtttttgtgg cccgacctga ggaagggagt cgatgtggaa tccgaccccg tcaggatatg
781 tggttctggt aggagacgag aacctaaaac agttcccgcc tccgtctgaa tttttgcttt
841 cggtttggaa ccgaagccgc gcgtcttgtc tgctgcagca tcgttctgtg ttgtctctgt
901 ctgactgtgt ttctgtattt gtctgaaaat tagggccaga ctgttaccac tcccttaagt
961 ttgaccttag atcactggaa agatgtcgag cggctcgctc acaaccagtc ggtagatgtc
1021 aagaagagac gttgggttac cttctgctct gcagaatggc caacctttaa cgtcggatgg
1081 ccgcgagacg gcacctttaa ccgagacctc atcacccagg ttaagatcaa ggtcttttca
1141 cctggcccgc atggacaccc agaccaggtc ccctacatcg tgacctggga agccttggct
1201 tttgaccccc ctccctgggt caagcccttt gtacacccta agcctccgcc tcctcttctt
1261 ccatccgcgc cgtctctccc ccttgaacct cctctttcga ccccgcctca atcctccctt
1321 tatccagccc tcactccttc tctaggcgcc ggccatcgag actaagctta ccatggccta
1381 cccctacgac gtgcccgact acgcctccct cggatccgcc accatggagg gcgccggcgg
1441 cgcgaacgac aagaaaaaga taagttctga acgtcgaaaa gaaaagtctc gagatgcagc
1501 cagatctcgg cgaagtaaag aatctgaagt tttttatgag cttgctcatc agttgccact
1561 tccacataat gtgagttcgc atcttgataa ggcctctgtg atgaggctta ccatcagcta
1621 tttgcgtgtg aggaaacttc tggatgctgg tgatttggat attgaagatg acatgaaagc
1681 acagatgaat tgcttttatt tgaaagcctt ggatggtttt gttatggttc tcacagatga
1741 tggtgacatg atttacattt ctgataatgt gaacaaatac atgggattaa ctcagtttga
1801 actaactgga cacagtgtgt ttgattttac tcatccatgt gaccatgagg aaatgagaga
1861 aatgcttaca cacagaaatg gccttgtgaa aaagggtaaa gaacaaaaca cacagcgaag
1921 cttttttctc agaatgaagt gtaccctaac tagccgagga agaactatga acataaagtc
1981 tgcaacatgg aaggtattgc actgcacagg ccacattcac gtatatgata ccaacagtaa
2041 ccaacctcag tgtgggtata agaaaccacc tatgacctgc ttggtgctga tttgtgaacc
2101 cattcctcac ccatcaaata ttgaaattcc tttagatagc aagactttcc tcagtcgaca
2161 cagcctggat atgaaatttt cttattgtga tgaaagaatt accgaattga tgggatatga
2221 gccagaagaa cttttaggcc gctcaattta tgaatattat catgctttgg actctgatca
2281 tctgaccaaa actcatcatg atatgtttac taaaggacaa gtcaccacag gacagtacag
2341 gatgcttgcc aaaagaggtg gatatgtctg ggttgaaact caagcaactg tcatatataa
2401 caccaagaat tctcaaccac agtgcattgt atgtgtgaat tacgttgtga gtggtattat
2461 tcagcacgac ttgattttct cccttcaaca aacagaatgt gtccttaaac cggttgaatc
2521 ttcagatatg aaaatgactc agctattcac caaagttgaa tcagaagata caagtagcct
2581 ctttgacaaa cttaagaagg aacctgatgc tttaactttg ctggccccag ccgctggaga
2641 cacaatcata tctttagatt ttggcagcaa cgacacagaa actgatgacc agcaacttga
2701 ggaagtacca ttatataatg atgtaatgct cccctcaccc aacgaaaaat tacagaatat
2761 aaatttggca atgtctccat tacccaccgc tgaaacgcca aagccacttc gaagtagtgc
2821 tgaccctgca ctcaatcaag aagttgcatt aaaattagaa ccaaatccag agtcactgga
2881 actttctttt accatgcccc agattcagga tcagacacct agtccttccg atggaagcac
2941 tagacaaagt tcacctgagc ctaatagtcc cagtgaatat tgtttttatg tggatagtga
3001 tatggtcaat gaattcaagt tggaattggt agaaaaactt tttgctgaag acacagaagc
3061 aaagaaccca ttttctactc aggacacaga tttagacttg gagatgttag ctccctatat
3121 cccaatggat gatgacttcc agttacgttc cttcgatcag ttgtcaccat tagaaagcag
3181 ttccgcaagc cctgaaagcg caagtcctca aagcacagtt acagtattcc agcagactca
3241 aatacaagaa cctactgcta atgccaccac taccactgcc accactgatg aattaaaaac
3301 agtgacaaaa gaccgtatgg aagacattaa aatattgatt gcatctccat ctcctaccca
3361 catacataaa gaaactacta gtgccacatc atcaccatat agagatactc aaagtcggac
3421 agcctcacca aacagagcag gaaaaggagt catagaacag acagaaaaat ctcatccaag
3481 aagccctaac gtgttatctg tcgctttgag tcaaagaact acagttcctg aggaagaact
3541 aaatccaaag atactagctt tgcagaatgc tcagagaaag cgaaaaatgg aacatgatgg
3601 ttcacttttt caagcagtag gaattggaac attattacag cagccagacg atcatgcagc
3661 tactacatca ctttcttgga aacgtgtaaa aggatgcaaa tctagtgaac agaatggaat
3721 ggagcaaaag acaattattt taataccctc tgatttagca tgtagactgc tggggcaatc
3781 aatggatgaa agtggattac cacagctgac cagttatgat tgtgaagtta atgctcctat
3841 acaaggcagc agaaacctac tgcagggtga agaattactc agagctttgg atcaagttaa
3901 ctgacaattc tgcagatatc catcacagtg gtcgaccctg tggaatgtgt gtcagttagg
3961 gtgtggaaag tccccaggct ccccagcagg cagaagtatg caaagcatgc atctcaatta
4021 gtcagcaacc aggtgtggaa agtccccagg ctccccagca ggcagaagta tgcaaagcat
4081 gcatctcaat tagtcagcaa ccatagtccc gcccctaact ccgcccatcc cgcccctaac
4141 tccgcccagt tccgcccatt ctccgcccca tggctgacta atttttttta tttatgcaga
4201 ggccgaggcc gcctcggcct ctgagctatt ccagaagtag tgaggaggct tttttggagg
4261 cctaggcttt tgcaaaaagc ttaccatgac cgagtacaag cccacggtgc gcctcgccac
4321 ccgcgacgac gtccccaggg ccgtacgcac cctcgccgcc gcgttcgccg actaccccgc
4381 cacgcgccac accgtcgatc cggaccgcca catcgagcgg gtcaccgagc tgcaagaact
4441 cttcctcacg cgcgtcgggc tcgacatcgg caaggtgtgg gtcgcggacg acggcgccgc
4501 ggtggcggtc tggaccacgc cggagagcgt cgaagcgggg gcggtgttcg ccgagatcgg
4561 cccgcgcatg gccgagttga gcggttcccg gctggccgcg cagcaacaga tggaaggcct
4621 cctggcgccg caccggccca aggagcccgc gtggttcctg gccaccgtcg gcgtctcgcc
4681 cgaccaccag ggcaagggtc tgggcagcgc cgtcgtgctc cccggagtgg aggcggccga
4741 gcgcgccggg gtgcccgcct tcctggagac ctccgcgccc cgcaacctcc ccttctacga
4801 gcggctcggc ttcaccgtca ccgccgacgt cgagtgcccg aaggaccgcg cgacctggtg
4861 catgacccgc aagcccggtg cctgacgccc gccccacgac ccgcagcgcc cgaccgaaag
4921 gagcgcacga ccccatgcat cgataaaata aaagatttta tttagtctcc agaaaaaggg
4981 gggaatgaaa gaccccacct gtaggtttgg caagctagct taagtaacgc cattttgcaa
5041 ggcatggaaa aatacataac tgagaataga gaagttcaga tcaaggtcag gaacagatgg
5101 aacagctgaa tatgggccaa acaggatatc tgtggtaagc agttcctgcc ccggctcagg
5161 gccaagaaca gatggaacag ctgaatatgg gccaaacagg atatctgtgg taagcagttc
5221 ctgccccggc tcagggccaa gaacagatgg tccccagatg cggtccagcc ctcagcagtt
5281 tctagagaac catcagatgt ttccagggtg ccccaaggac ctgaaatgac cctgtgcctt
5341 atttgaacta accaatcagt tcgcttctcg cttctgttcg cgcgcttctg ctccccgagc
5401 tcaataaaag agcccacaac ccctcactcg gggcgccagt cctccgattg actgagtcgc
5461 ccgggtaccc gtgtatccaa taaaccctct tgcagttgca tccgacttgt ggtctcgctg
5521 ttccttggga gggtctcctc tgagtgattg actacccgtc agcgggggtc tttcatttcc
5581 gacttgtggt ctcgctgcct tgggagggtc tcctctgagt gattgactac ccgtcagcgg
5641 gggtcttcac atgcagcatg tatcaaaatt aatttggttt tttttcttaa gtatttacat
5701 taaatggcca tagttgcatt aatgaatcgg ccaacgcgcg gggagaggcg gtttgcgtat
5761 tggcgctctt ccgcttcctc gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg gctgcggcga
5821 gcggtatcag ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg ggataacgca
5881 ggaaagaaca tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa ggccgcgttg
5941 ctggcgtttt tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg acgctcaagt
6001 cagaggtggc gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc tggaagctcc
6061 ctcgtgcgct ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc ctttctccct
6121 tcgggaagcg tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc ggtgtaggtc
6181 gttcgctcca agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg ctgcgcctta
6241 tccggtaact atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc actggcagca
6301 gccactggta acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga gttcttgaag
6361 tggtggccta actacggcta cactagaagg acagtatttg gtatctgcgc tctgctgaag
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6481 agcggtggtt tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg atctcaagaa
6541 gatcctttga tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc acgttaaggg
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6661 agtttgcggc cgcaaatcaa tctaaagtat atatgagtaa acttggtctg acagttacca
6721 atgcttaatc agtgaggcac ctatctcagc gatctgtcta tttcgttcat ccatagttgc
6781 ctgactcccc gtcgtgtaga taactacgat acgggagggc ttaccatctg gccccagtgc
6841 tgcaatgata ccgcgagacc cacgctcacc ggctccagat ttatcagcaa taaaccagcc
6901 agccggaagg gccgagcgca gaagtggtcc tgcaacttta tccgcctcca tccagtctat
6961 taattgttgc cgggaagcta gagtaagtag ttcgccagtt aatagtttgc gcaacgttgt
7021 tgccattgct acaggcatcg tggtgtcacg ctcgtcgttt ggtatggctt cattcagctc
7081 cggttcccaa cgatcaaggc gagttacatg atcccccatg ttgtgcaaaa aagcggttag
7141 ctccttcggt cctccgatcg ttgtcagaag taagttggcc gcagtgttat cactcatggt
7201 tatggcagca ctgcataatt ctcttactgt catgccatcc gtaagatgct tttctgtgac
7261 tggtgagtac tcaaccaagt cattctgaga atagtgtatg cggcgaccga gttgctcttg
7321 cccggcgtca acacgggata ataccgcgcc acatagcaga actttaaaag tgctcatcat
7381 tggaaaacgt tcttcggggc gaaaactctc aaggatctta ccgctgttga gatccagttc
7441 gatgtaaccc actcgtgcac ccaactgatc ttcagcatct tttactttca ccagcgtttc
7501 tgggtgagca aaaacaggaa ggcaaaatgc cgcaaaaaag ggaataaggg cgacacggaa
7561 atgttgaata ctcatactct tcctttttca atattattga agcatttatc agggttattg
7621 tctcatgagc ggatacatat ttgaatgtat ttagaaaaat aaacaaatag gggttccgcg
7681 cacatttccc cgaaaagtgc cac
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：HA-HIF1alpha-wt-pBabe-puro人源基因质粒
别称: Plasmid#19365;HIF1A;HIF-1-alphaHIF-1
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：Puro
克隆菌株: Stbl3
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Puro
荧光蛋白：
质粒简介
HA-HIF1alpha-wt-pBabe-puro是一个人源基因哺乳表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7703 bp ds-DNA circular SYN 28-SEP-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS HA-HIF1alpha-wt-pBabe-puro
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 7703)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Sep 28, 2017 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7703
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
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CDS 934..1350
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gene lacking the start codon"
CDS 1379..1405
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/label=HIF1alpha
promoter 3947..4276
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 4127..4262
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
CDS 4286..4885
/codon_start=1
/gene="pac from Streptomyces"
/product="puromycin N-acetyltransferase"
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/note="confers resistance to puromycin"
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VTELQELFLTRVGLDIGKVWVADDGAAVAVWTTPESVEAGAVFAEIGPRMAELSGSRLA
AQQQMEGLLAPHRPKEPAWFLATVGVSPDHQGKGLGSAVVLPGVEAAERAGVPAFLETS
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LTR 4984..5577
/note="long terminal repeat from Moloney murine leukemia
virus"
rep_origin complement(5949..6537)
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replication"
CDS complement(6715..7575)
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/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
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PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
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LIKHW"
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ORIGIN
1 ctgcagcctg aatatgggcc aaacaggata tctgtggtaa gcagttcctg ccccggctca
61 gggccaagaa cagatggaac agctgaatat gggccaaaca ggatatctgt ggtaagcagt
121 tcctgccccg gctcagggcc aagaacagat ggtccccaga tgcggtccag ccctcagcag
181 tttctagaga accatcagat gtttccaggg tgccccaagg acctgaaatg accctgtgcc
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301 gctcaataaa agagcccaca acccctcact cggggcgcca gtcctccgat tgactgagtc
361 gcccgggtac ccgtgtatcc aataaaccct cttgcagttg catccgactt gtggtctcgc
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481 gggggctcgt ccgggatcgg gagacccctg cccagggacc accgacccac caccgggagg
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781 tggttctggt aggagacgag aacctaaaac agttcccgcc tccgtctgaa tttttgcttt
841 cggtttggaa ccgaagccgc gcgtcttgtc tgctgcagca tcgttctgtg ttgtctctgt
901 ctgactgtgt ttctgtattt gtctgaaaat tagggccaga ctgttaccac tcccttaagt
961 ttgaccttag atcactggaa agatgtcgag cggctcgctc acaaccagtc ggtagatgtc
1021 aagaagagac gttgggttac cttctgctct gcagaatggc caacctttaa cgtcggatgg
1081 ccgcgagacg gcacctttaa ccgagacctc atcacccagg ttaagatcaa ggtcttttca
1141 cctggcccgc atggacaccc agaccaggtc ccctacatcg tgacctggga agccttggct
1201 tttgaccccc ctccctgggt caagcccttt gtacacccta agcctccgcc tcctcttctt
1261 ccatccgcgc cgtctctccc ccttgaacct cctctttcga ccccgcctca atcctccctt
1321 tatccagccc tcactccttc tctaggcgcc ggccatcgag actaagctta ccatggccta
1381 cccctacgac gtgcccgact acgcctccct cggatccgcc accatggagg gcgccggcgg
1441 cgcgaacgac aagaaaaaga taagttctga acgtcgaaaa gaaaagtctc gagatgcagc
1501 cagatctcgg cgaagtaaag aatctgaagt tttttatgag cttgctcatc agttgccact
1561 tccacataat gtgagttcgc atcttgataa ggcctctgtg atgaggctta ccatcagcta
1621 tttgcgtgtg aggaaacttc tggatgctgg tgatttggat attgaagatg acatgaaagc
1681 acagatgaat tgcttttatt tgaaagcctt ggatggtttt gttatggttc tcacagatga
1741 tggtgacatg atttacattt ctgataatgt gaacaaatac atgggattaa ctcagtttga
1801 actaactgga cacagtgtgt ttgattttac tcatccatgt gaccatgagg aaatgagaga
1861 aatgcttaca cacagaaatg gccttgtgaa aaagggtaaa gaacaaaaca cacagcgaag
1921 cttttttctc agaatgaagt gtaccctaac tagccgagga agaactatga acataaagtc
1981 tgcaacatgg aaggtattgc actgcacagg ccacattcac gtatatgata ccaacagtaa
2041 ccaacctcag tgtgggtata agaaaccacc tatgacctgc ttggtgctga tttgtgaacc
2101 cattcctcac ccatcaaata ttgaaattcc tttagatagc aagactttcc tcagtcgaca
2161 cagcctggat atgaaatttt cttattgtga tgaaagaatt accgaattga tgggatatga
2221 gccagaagaa cttttaggcc gctcaattta tgaatattat catgctttgg actctgatca
2281 tctgaccaaa actcatcatg atatgtttac taaaggacaa gtcaccacag gacagtacag
2341 gatgcttgcc aaaagaggtg gatatgtctg ggttgaaact caagcaactg tcatatataa
2401 caccaagaat tctcaaccac agtgcattgt atgtgtgaat tacgttgtga gtggtattat
2461 tcagcacgac ttgattttct cccttcaaca aacagaatgt gtccttaaac cggttgaatc
2521 ttcagatatg aaaatgactc agctattcac caaagttgaa tcagaagata caagtagcct
2581 ctttgacaaa cttaagaagg aacctgatgc tttaactttg ctggccccag ccgctggaga
2641 cacaatcata tctttagatt ttggcagcaa cgacacagaa actgatgacc agcaacttga
2701 ggaagtacca ttatataatg atgtaatgct cccctcaccc aacgaaaaat tacagaatat
2761 aaatttggca atgtctccat tacccaccgc tgaaacgcca aagccacttc gaagtagtgc
2821 tgaccctgca ctcaatcaag aagttgcatt aaaattagaa ccaaatccag agtcactgga
2881 actttctttt accatgcccc agattcagga tcagacacct agtccttccg atggaagcac
2941 tagacaaagt tcacctgagc ctaatagtcc cagtgaatat tgtttttatg tggatagtga
3001 tatggtcaat gaattcaagt tggaattggt agaaaaactt tttgctgaag acacagaagc
3061 aaagaaccca ttttctactc aggacacaga tttagacttg gagatgttag ctccctatat
3121 cccaatggat gatgacttcc agttacgttc cttcgatcag ttgtcaccat tagaaagcag
3181 ttccgcaagc cctgaaagcg caagtcctca aagcacagtt acagtattcc agcagactca
3241 aatacaagaa cctactgcta atgccaccac taccactgcc accactgatg aattaaaaac
3301 agtgacaaaa gaccgtatgg aagacattaa aatattgatt gcatctccat ctcctaccca
3361 catacataaa gaaactacta gtgccacatc atcaccatat agagatactc aaagtcggac
3421 agcctcacca aacagagcag gaaaaggagt catagaacag acagaaaaat ctcatccaag
3481 aagccctaac gtgttatctg tcgctttgag tcaaagaact acagttcctg aggaagaact
3541 aaatccaaag atactagctt tgcagaatgc tcagagaaag cgaaaaatgg aacatgatgg
3601 ttcacttttt caagcagtag gaattggaac attattacag cagccagacg atcatgcagc
3661 tactacatca ctttcttgga aacgtgtaaa aggatgcaaa tctagtgaac agaatggaat
3721 ggagcaaaag acaattattt taataccctc tgatttagca tgtagactgc tggggcaatc
3781 aatggatgaa agtggattac cacagctgac cagttatgat tgtgaagtta atgctcctat
3841 acaaggcagc agaaacctac tgcagggtga agaattactc agagctttgg atcaagttaa
3901 ctgacaattc tgcagatatc catcacagtg gtcgaccctg tggaatgtgt gtcagttagg
3961 gtgtggaaag tccccaggct ccccagcagg cagaagtatg caaagcatgc atctcaatta
4021 gtcagcaacc aggtgtggaa agtccccagg ctccccagca ggcagaagta tgcaaagcat
4081 gcatctcaat tagtcagcaa ccatagtccc gcccctaact ccgcccatcc cgcccctaac
4141 tccgcccagt tccgcccatt ctccgcccca tggctgacta atttttttta tttatgcaga
4201 ggccgaggcc gcctcggcct ctgagctatt ccagaagtag tgaggaggct tttttggagg
4261 cctaggcttt tgcaaaaagc ttaccatgac cgagtacaag cccacggtgc gcctcgccac
4321 ccgcgacgac gtccccaggg ccgtacgcac cctcgccgcc gcgttcgccg actaccccgc
4381 cacgcgccac accgtcgatc cggaccgcca catcgagcgg gtcaccgagc tgcaagaact
4441 cttcctcacg cgcgtcgggc tcgacatcgg caaggtgtgg gtcgcggacg acggcgccgc
4501 ggtggcggtc tggaccacgc cggagagcgt cgaagcgggg gcggtgttcg ccgagatcgg
4561 cccgcgcatg gccgagttga gcggttcccg gctggccgcg cagcaacaga tggaaggcct
4621 cctggcgccg caccggccca aggagcccgc gtggttcctg gccaccgtcg gcgtctcgcc
4681 cgaccaccag ggcaagggtc tgggcagcgc cgtcgtgctc cccggagtgg aggcggccga
4741 gcgcgccggg gtgcccgcct tcctggagac ctccgcgccc cgcaacctcc ccttctacga
4801 gcggctcggc ttcaccgtca ccgccgacgt cgagtgcccg aaggaccgcg cgacctggtg
4861 catgacccgc aagcccggtg cctgacgccc gccccacgac ccgcagcgcc cgaccgaaag
4921 gagcgcacga ccccatgcat cgataaaata aaagatttta tttagtctcc agaaaaaggg
4981 gggaatgaaa gaccccacct gtaggtttgg caagctagct taagtaacgc cattttgcaa
5041 ggcatggaaa aatacataac tgagaataga gaagttcaga tcaaggtcag gaacagatgg
5101 aacagctgaa tatgggccaa acaggatatc tgtggtaagc agttcctgcc ccggctcagg
5161 gccaagaaca gatggaacag ctgaatatgg gccaaacagg atatctgtgg taagcagttc
5221 ctgccccggc tcagggccaa gaacagatgg tccccagatg cggtccagcc ctcagcagtt
5281 tctagagaac catcagatgt ttccagggtg ccccaaggac ctgaaatgac cctgtgcctt
5341 atttgaacta accaatcagt tcgcttctcg cttctgttcg cgcgcttctg ctccccgagc
5401 tcaataaaag agcccacaac ccctcactcg gggcgccagt cctccgattg actgagtcgc
5461 ccgggtaccc gtgtatccaa taaaccctct tgcagttgca tccgacttgt ggtctcgctg
5521 ttccttggga gggtctcctc tgagtgattg actacccgtc agcgggggtc tttcatttcc
5581 gacttgtggt ctcgctgcct tgggagggtc tcctctgagt gattgactac ccgtcagcgg
5641 gggtcttcac atgcagcatg tatcaaaatt aatttggttt tttttcttaa gtatttacat
5701 taaatggcca tagttgcatt aatgaatcgg ccaacgcgcg gggagaggcg gtttgcgtat
5761 tggcgctctt ccgcttcctc gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg gctgcggcga
5821 gcggtatcag ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg ggataacgca
5881 ggaaagaaca tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa ggccgcgttg
5941 ctggcgtttt tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg acgctcaagt
6001 cagaggtggc gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc tggaagctcc
6061 ctcgtgcgct ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc ctttctccct
6121 tcgggaagcg tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc ggtgtaggtc
6181 gttcgctcca agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg ctgcgcctta
6241 tccggtaact atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc actggcagca
6301 gccactggta acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga gttcttgaag
6361 tggtggccta actacggcta cactagaagg acagtatttg gtatctgcgc tctgctgaag
6421 ccagttacct tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac caccgctggt
6481 agcggtggtt tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg atctcaagaa
6541 gatcctttga tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc acgttaaggg
6601 attttggtca tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa ttaaaaatga
6661 agtttgcggc cgcaaatcaa tctaaagtat atatgagtaa acttggtctg acagttacca
6721 atgcttaatc agtgaggcac ctatctcagc gatctgtcta tttcgttcat ccatagttgc
6781 ctgactcccc gtcgtgtaga taactacgat acgggagggc ttaccatctg gccccagtgc
6841 tgcaatgata ccgcgagacc cacgctcacc ggctccagat ttatcagcaa taaaccagcc
6901 agccggaagg gccgagcgca gaagtggtcc tgcaacttta tccgcctcca tccagtctat
6961 taattgttgc cgggaagcta gagtaagtag ttcgccagtt aatagtttgc gcaacgttgt
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7081 cggttcccaa cgatcaaggc gagttacatg atcccccatg ttgtgcaaaa aagcggttag
7141 ctccttcggt cctccgatcg ttgtcagaag taagttggcc gcagtgttat cactcatggt
7201 tatggcagca ctgcataatt ctcttactgt catgccatcc gtaagatgct tttctgtgac
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7381 tggaaaacgt tcttcggggc gaaaactctc aaggatctta ccgctgttga gatccagttc
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7501 tgggtgagca aaaacaggaa ggcaaaatgc cgcaaaaaag ggaataaggg cgacacggaa
7561 atgttgaata ctcatactct tcctttttca atattattga agcatttatc agggttattg
7621 tctcatgagc ggatacatat ttgaatgtat ttagaaaaat aaacaaatag gggttccgcg
7681 cacatttccc cgaaaagtgc cac
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P0929/pCMV6-ETV5-m小鼠基因质粒 |
| P4530/pCMV6-ETV5-m质粒菌种 |
| P0930/pCMV6-ETV5-K350A-m小鼠基因质粒 |
| P0558/pCX-cMyc小鼠基因质粒 |
| P0935/pCX-cMyc小鼠基因质粒 |
| P0936/pMXs-Sox2小鼠基因逆病毒质粒 |
| P0937/pMXs-Oct3/4小鼠基因逆病毒质粒 |
| P0938/pMXs-Klf4小鼠基因逆病毒质粒 |
| P0939/pMXs-c-Myc小鼠基因逆病毒质粒 |
| P0940/pCX-OKS-2A小鼠基因质粒 |
| P0765/pBRPyCAG-Mettl3-dsRed-IRES-puro小鼠基因质粒 |
| P0955/pCMV6-ETV5-K89A-m小鼠基因质粒 |
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文献和实验相关实验
puro 哺乳细胞质粒 pEF1alpha-myc/hisb 哺乳细胞质粒 pCAGGS-HA 哺乳细胞质粒 Amp pCI-NEO 哺乳细胞质粒
HA-HIF1alpha-wt-pBabe-puro人源基因质粒
￥100 - 1000
