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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid#89308
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：lentiMPH v2哺乳编辑质粒
别称: Plasmid#89308
质粒属性
质粒简介
lentiMPH v2是一个哺乳Cas9表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 11739 bp ds-DNA circular SYN 04-DEC-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..11739
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
misc_feature 488..613
/label=HIV-1 Psi
/note="packaging signal of human immunodeficiency virus
type 1"
LTR 660..840
/label=5' LTR (truncated)
/note="truncated 5' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"
promoter complement(858..1056)
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
enhancer 1058..1437
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 1703..1807
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
CDS 1808..2668
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin 2839..3427
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
polyA_signal 3878..3999
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
CDS complement(4129..4503)
/codon_start=1
/gene="Sh ble from Streptoalloteichus hindustanus"
/product="antibiotic-binding protein"
/label=Zeo
/note="confers resistance to bleomycin, phleomycin, and
Zeocin(TM)"
/translation="MAKLTSAVPVLTARDVAGAVEFWTDRLGFSRDFVEDDFAGVVRDD
VTLFISAVQDQVVPDNTLAWVWVRGLDELYAEWSEVVSTNFRDASGPAMTEIGEQPWGR
EFALRDPAGNCVHFVAEEQD"
promoter complement(4522..4569)
/label=EM7 promoter
/note="synthetic bacterial promoter "
promoter complement(4617..4946)
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 4631..4766
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
rep_origin complement(4960..5388)
/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
polyA_signal 5434..5658
/label=bGH poly(A) signal
/note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
LTR 5690..5870
/label=5' LTR (truncated)
/note="truncated 5' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"
promoter 6475..7653
/label=EF-1-alpha promoter
/note="strong constitutive promoter for human elongation
factor EF-1-alpha"
regulatory 7660..7669
/regulatory_class="other"
/note="vertebrate consensus sequence for strong initiation
of translation (Kozak, 1987)"
CDS 7669..8055
/codon_start=1
/product="bacteriophage MS2 coat protein"
/label=MS2-N55K
/note="binds with high affinity to a specific stem-loop
structure in the viral RNA (Lim et al., 1994)"
/translation="ASNFTQFVLVDNGGTGDVTVAPSNFANGVAEWISSNSRSQAYKVT
CSVRQSSAQKRKYTIKVEVPKVATQTVGGVELPVAAWRSYLNMELTIPIFATNSDCELI
VKAMQGLLKDGNPIPSAIAANSGIY"
CDS 8110..8130
/codon_start=1
/product="nuclear localization signal of SV40 (simian virus
40) large T antigen"
/label=SV40 NLS
/translation="PKKKRKV"
CDS 8146..8688
/codon_start=1
/product="C-terminal portion of the p65 subunit of mouse
NF-kappa-B"
/label=p65
/translation="PSGQISNQALALAPSSAPVLAQTMVPSSAMVPLAQPPAPAPVLTP
GPPQSLSAPVPKSTQAGEGTLSEALLHLQFDADEDLGALLGNSTDPGVFTDLASVDNSE
FQQLLNQGVSMSHSTAEPMLMEYPEAITRLVTGSQRPPDPAPTPLGTSGLPNGLSGDED
FSSIADMDFSALLSQISS"
CDS 8713..9084
/codon_start=1
/product="C-terminal activation domain from the human heat
shock transcription factor HSF1"
/label=HSF1
/translation="GFSVDTSALLDLFSPSVTVPDMSLPDLDSSLASIQELLSPQEPPR
PPEAENSSPDSGKQLVHYTAQPLFLLDPGSVDTGSNDLPVLFELGEGSYFSEGDGFAED
PTISLLTGSEPPKAKDPTVS"
CDS 9100..9153
/codon_start=1
/product="2A peptide from Thosea asigna virus capsid
protein"
/label=T2A
/note="Eukaryotic ribosomes fail to insert a peptide bond
between the Gly and Pro residues, yielding separate
polypeptides."
/translation="EGRGSLLTCGDVEENPGP"
CDS 9157..10176
/codon_start=1
/product="hygromycin B phosphotransferase"
/label=HygR
/note="confers resistance to hygromycin"
/translation="MKKPELTATSVEKFLIEKFDSVSDLMQLSEGEESRAFSFDVGGRG
YVLRVNSCADGFYKDRYVYRHFASAALPIPEVLDIGEFSESLTYCISRRAQGVTLQDLP
ETELPAVLQPVAEAM-DAIAAADLSQTSGFGPFGPQGIGQYTTWRDFICAIADPHVYHWQ
TVMDDTVSASVAQALDELMLWAEDCPEVRHLVHADFGSNNVLTDNGRITAVIDWSEAMF
GDSQYEVANIFFWRPWLACMEQQTRYFERRHPELAGSPRLRAYMLRIGLDQLYQSLVDG
NFDDAAWAQGRCDAIVRSGAGTVGRTQIARRSAAVWTDGCVEVLADSGNRRPSTRPRAK
"
misc_feature 10216..10804
/label=WPRE
/note="woodchuck hepatitis virus posttranscriptional
regulatory element"
misc_feature 10857..10974
/label=cPPT/CTS
/note="central polypurine tract and central termination
sequence of HIV-1"
misc_feature 11501..11734
/label=RRE
/note="The Rev response element (RRE) of HIV-1 allows for
Rev-dependent mRNA export from the nucleus to the
cytoplasm."
ORIGIN
1 cactgctctt ttttctctct gcaccactct tctctttgcc ttggtgggtg ctactcctaa
61 tggttcaatt tttactactt tatatttata taattcactt ctccaattgt ccctcatatc
121 tcctcctcca ggtctgaaga tcagcggccg cttgctgtgc ggtggtctta cttttgtttt
181 gctcttcctc tatcttgtct aaagcttcct tggtgtcttt tatctctatc ctttgatgca
241 cacaatagag ggttgctact gtattatata atgatctaag ttcttctgat cctgtctgaa
301 gggatggttg tagctgtccc agtatttgtc tacagccttc tgatgtttct aacaggccag
361 gattaactgc gaatcgttct agctccctgc ttgcccatac tatatgtttt aatttatatt
421 ttttctttcc ccctggcctt aaccgaattt tttcccatcg cgatctaatt ctcccccgct
481 taatactgac gctctcgcac ccatctctct ccttctagcc tccgctagtc aaaatttttg
541 gcgtactcac cagtcgccgc ccctcgcctc ttgccgtgcg cgcttcagca agccgagtcc
601 tgcgtcgaga gagctcctct ggtttccctt tcgctttcaa gtccctgttc gggcgccact
661 gctagagatt ttccacactg actaaaaggg tctgagggat ctctagttac cagagtcaca
721 caacagacgg gcacacacta cttgaagcac tcaaggcaag ctttattgag gcttaagcag
781 tgggttccct agttagccag agagctccca ggctcagatc tggtctaacc agagagaccc
841 agtacaggca aaacgcgctg cttatataga cctcccaccg tacacgccta ccgcccattt
901 gcgtcaatgg ggcggagttg ttacgacatt ttggaaagtc ccgttgattt tggtgccaaa
961 acaaactccc attgacgtca atggggtgga gacttggaaa tccccgtgag tcaaaccgct
1021 atccacgccc attgatgtac tgccaaaacc gcatcaccat ggtaatagcg atgactaata
1081 cgtagatgta ctgccaagta ggaaagtccc ataaggtcat gtactgggca taatgccagg
1141 cgggccattt accgtcattg acgtcaatag ggggcgtact tggcatatga tacacttgat
1201 gtactgccaa gtgggcagtt taccgtaaat actccaccca ttgacgtcaa tggaaagtcc
1261 ctattggcgt tactatggga acatacgtca ttattgacgt caatgggcgg gggtcgttgg
1321 gcggtcagcc aggcgggcca tttaccgtaa gttatgtaac gcggaactcc atatatgggc
1381 tatgaactaa tgaccccgta attgattact attaataact agtcaataat caatgtcaac
1441 gcgtatatct ggcccgtaca tcgcgaagca gcgcaaaacg cctaacccta agcagattct
1501 tcatgcaatt gtcggtcaag ccttgccttg ttgtagctta aattttgctc gcgcactact
1561 cagcgacctc caacacacaa gcagggagca gatactggct taactatgcg gcatcagagc
1621 agattgtact gagagtgcac cataggggat cgggagatct cccgatccgt cgacgtcagg
1681 tggcactttt cggggaaatg tgcgcggaac ccctatttgt ttatttttct aaatacattc
1741 aaatatgtat ccgctcatga gacaataacc ctgataaatg cttcaataat attgaaaaag
1801 gaagagtatg agtattcaac atttccgtgt cgcccttatt cccttttttg cggcattttg
1861 ccttcctgtt tttgctcacc cagaaacgct ggtgaaagta aaagatgctg aagatcagtt
1921 gggtgcacga gtgggttaca tcgaactgga tctcaacagc ggtaagatcc ttgagagttt
1981 tcgccccgaa gaacgttttc caatgatgag cacttttaaa gttctgctat gtggcgcggt
2041 attatcccgt attgacgccg ggcaagagca actcggtcgc cgcatacact attctcagaa
2101 tgacttggtt gagtactcac cagtcacaga aaagcatctt acggatggca tgacagtaag
2161 agaattatgc agtgctgcca taaccatgag tgataacact gcggccaact tacttctgac
2221 aacgatcgga ggaccgaagg agctaaccgc ttttttgcac aacatggggg atcatgtaac
2281 tcgccttgat cgttgggaac cggagctgaa tgaagccata ccaaacgacg agcgtgacac
2341 cacgatgcct gtagcaatgg caacaacgtt gcgcaaacta ttaactggcg aactacttac
2401 tctagcttcc cggcaacaat taatagactg gatggaggcg gataaagttg caggaccact
2461 tctgcgctcg gcccttccgg ctggctggtt tattgctgat aaatctggag ccggtgagcg
2521 tgggtctcgc ggtatcattg cagcactggg gccagatggt aagccctccc gtatcgtagt
2581 tatctacacg acggggagtc aggcaactat ggatgaacga aatagacaga tcgctgagat
2641 aggtgcctca ctgattaagc attggtaact gtcagaccaa gtttactcat atatacttta
2701 gattgattta aaacttcatt tttaatttaa aaggatctag gtgaagatcc tttttgataa
2761 tctcatgacc aaaatccctt aacgtgagtt ttcgttccac tgagcgtcag accccgtaga
2821 aaagatcaaa ggatcttctt gagatccttt ttttctgcgc gtaatctgct gcttgcaaac
2881 aaaaaaacca ccgctaccag cggtggtttg tttgccggat caagagctac caactctttt
2941 tccgaaggta actggcttca gcagagcgca gataccaaat actgttcttc tagtgtagcc
3001 gtagttaggc caccacttca agaactctgt agcaccgcct acatacctcg ctctgctaat
3061 cctgttacca gtggctgctg ccagtggcga taagtcgtgt cttaccgggt tggactcaag
3121 acgatagtta ccggataagg cgcagcggtc gggctgaacg gggggttcgt gcacacagcc
3181 cagcttggag cgaacgacct acaccgaact gagataccta cagcgtgagc tatgagaaag
3241 cgccacgctt cccgaaggga gaaaggcgga caggtatccg gtaagcggca gggtcggaac
3301 aggagagcgc acgagggagc ttccaggggg aaacgcctgg tatctttata gtcctgtcgg
3361 gtttcgccac ctctgacttg agcgtcgatt tttgtgatgc tcgtcagggg ggcggagcct
3421 atggaaaaac gccagcaacg cggccttttt acggttcctg gccttttgct ggccttttgc
3481 tcacatgttc tttcctgcgt tatcccctga ttctgtggat aaccgtatta ccgcctttga
3541 gtgagctgat accgctcgcc gcagccgaac gaccgagcgc agcgagtcag tgagcgagga
3601 agcggaagag cgcccaatac gcaaaccgcc tctccccgcg cgttggccga ttcattaatg
3661 cagctggcac gacaggtttc ccgactggaa agcgggcagt gagcgcaacg caattaatgt
3721 gagttagctc actcattagg caccccaggc tttacacttt atgcttccgg ctcgtatgtt
3781 gtgtggaatt gtgagcggat aacaatttca cacaggaaac agctatgacc atgattacgc
3841 caagctctag ctagaggtcg acggtataca gacatgataa gatacattga tgagtttgga
3901 caaaccacaa ctagaatgca gtgaaaaaaa tgctttattt gtgaaatttg tgatgctatt
3961 gctttatttg taaccattat aagctgcaat aaacaagttg gggtgggcga agaactccag
4021 catgagatcc ccgcgctgga ggatcatcca gccggcgtcc cggaaaacga ttccgaagcc
4081 caacctttca tagaaggcgg cggtggaatc gaaatctcgt agcacgtgtc agtcctgctc
4141 ctcggccacg aagtgcacgc agttgccggc cgggtcgcgc agggcgaact cccgccccca
4201 cggctgctcg ccgatctcgg tcatggccgg cccggaggcg tcccggaagt tcgtggacac
4261 gacctccgac cactcggcgt acagctcgtc caggccgcgc acccacaccc aggccagggt
4321 gttgtccggc accacctggt cctggaccgc gctgatgaac agggtcacgt cgtcccggac
4381 cacaccggcg aagtcgtcct ccacgaagtc ccgggagaac ccgagccggt cggtccagaa
4441 ctcgaccgct ccggcgacgt cgcgcgcggt gagcaccgga acggcactgg tcaacttggc
4501 catggtttag ttcctcacct tgtcgtatta tactatgccg atatactatg ccgatgatta
4561 attgtcaaca cgtgctgatc agatccgaaa atggatatac aagctcccgg gagctttttg
4621 caaaagccta ggcctccaaa aaagcctcct cactacttct ggaatagctc agaggcagag
4681 gcggcctcgg cctctgcata aataaaaaaa attagtcagc catggggcgg agaatgggcg
4741 gaactgggcg gagttagggg cgggatgggc ggagttaggg gcgggactat ggttgctgac
4801 taattgagat gcatgctttg catacttctg cctgctgggg agcctgggga ctttccacac
4861 ctggttgctg actaattgag atgcatgctt tgcatacttc tgcctgctgg ggagcctggg
4921 gactttccac accctaactg acacacattc cacagaatta attcgcgtta aatttttgtt
4981 aaatcagctc attttttaac caataggccg aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag
5041 aatagaccga gatagggttg agtgttgttc cagtttggaa caagagtcca ctattaaaga
5101 acgtggactc caacgtcaaa gggcgaaaaa ccgtctatca gggcgatggc ccactacgtg
5161 aaccatcacc ctaatcaagt tttttggggt cgaggtgccg taaagcacta aatcggaacc
5221 ctaaagggag cccccgattt agagcttgac ggggaaagcc ggcgaacgtg gcgagaaagg
5281 aagggaagaa agcgaaagga gcgggcgcta gggcgctggc aagtgtagcg gtcacgctgc
5341 gcgtaaccac cacacccgcc gcgcttaatg cgccgctaca gggcgcgtgg ggataccccc
5401 tagagcccca gctggttctt tccgcctcag aagccataga gcccaccgca tccccagcat
5461 gcctgctatt gtcttcccaa tcctccccct tgctgtcctg ccccacccca ccccccagaa
5521 tagaatgaca cctactcaga caatgcgatg caatttcctc attttattag gaaaggacag
5581 tgggagtggc accttccagg gtcaaggaag gcacggggga ggggcaaaca acagatggct
5641 ggcaactaga aggcacagtc gaggctgatc agcgggttta aacgggccct gctagagatt
5701 ttccacactg actaaaaggg tctgagggat ctctagttac cagagtcaca caacagacgg
5761 gcacacacta cttgaagcac tcaaggcaag ctttattgag gcttaagcag tgggttccct
5821 agttagccag agagctccca ggctcagatc tggtctaacc agagagaccc agtacagtcc
5881 ggatgcagct ctcgggccat gtgatgaaat gctaggcggc tgtcaaacct ccactctaat
5941 acttctctct ccgggtcatc catcccatgc aggctcacag ggtgtaacaa gcgggtgttc
6001 tctccttcat tggcttcttc taccttctct tgctcaactg gtactagctt gtagcaccat
6061 ccaaaggtca gtggatatct gatccctggc cctggtgtgt agttctgcca atcagggaag
6121 tagccttgtg tgtggtagat ccacagatca aggatatctt gtcttcgttg ggagtgaatt
6181 agcccttcca gtcccccctt ttcttttaaa aagtggctaa gatctacagc tgccttgtaa
6241 gtcattggtc ttaaaggtac ctgaggtgtg actggaaaac ccacctcctc ctcctcttgt
6301 gcttctagcc aggcacaatc agcattggta gctgctgtat tgctacttgt gattgctcca
6361 tgtttttcta ggtctcgagg tcgacggtat cgattgcaaa gatggataaa gttttaaaca
6421 gagaggaatc tttgcagcta atggaccttc taggtcttga aaggagtggg aattggctcc
6481 ggtgcccgtc agtgggcaga gcgcacatcg cccacagtcc ccgagaagtt ggggggaggg
6541 gtcggcaatt gaaccggtgc ctagagaagg tggcgcgggg taaactggga aagtgatgtc
6601 gtgtactggc tccgcctttt tcccgagggt gggggagaac cgtatataag tgcagtagtc
6661 gccgtgaacg ttctttttcg caacgggttt gccgccagaa cacaggtaag tgccgtgtgt
6721 ggttcccgcg ggcctggcct ctttacgggt tatggccctt gcgtgccttg aattacttcc
6781 acctggctgc agtacgtgat tcttgatccc gagcttcggg ttggaagtgg gtgggagagt
6841 tcgaggcctt gcgcttaagg agccccttcg cctcgtgctt gagttgaggc ctggcctggg
6901 cgctggggcc gccgcgtgcg aatctggtgg caccttcgcg cctgtctcgc tgctttcgat
6961 aagtctctag ccatttaaaa tttttgatga cctgctgcga cgcttttttt ctggcaagat
7021 agtcttgtaa atgcgggcca agatctgcac actggtattt cggtttttgg ggccgcgggc
7081 ggcgacgggg cccgtgcgtc ccagcgcaca tgttcggcga ggcggggcct gcgagcgcgg
7141 ccaccgagaa tcggacgggg gtagtctcaa gctggccggc ctgctctggt gcctggcctc
7201 gcgccgccgt gtatcgcccc gccctgggcg gcaaggctgg cccggtcggc accagttgcg
7261 tgagcggaaa gatggccgct tcccggccct gctgcaggga gctcaaaatg aaggacgcgg
7321 cgctcgggag agcgggcggg tgagtcaccc acacaaagga aaagggcctt tccgtcctca
7381 gccgtcgctt catgtgactc cacggagtac cgggcgccgt ccaggcacct cgattagttc
7441 tcgagctttt ggagtacgtc gtctttaggt tggggggagg ggttttatgc gatggagttt
7501 ccccacactg agtgggtgga gactgaagtt aggccagctt ggcacttgat gtaattctcc
7561 ttggaatttg ccctttttga gtttggatct tggttcattc tcaagcctca gacagtggtt
7621 caaagttttt ttcttccatt tcaggtgtcg tgacgtacgg ccaccatggc ttcaaacttt
7681 actcagttcg tgctcgtgga caatggtggg acaggggatg tgacagtggc tccttctaat
7741 ttcgctaatg gggtggcaga gtggatcagc tccaactcac ggagccaggc ctacaaggtg
7801 acatgcagcg tcaggcagtc tagtgcccag aagagaaagt ataccatcaa ggtggaggtc
7861 cccaaagtgg ctacccagac agtgggcgga gtcgaactgc ctgtcgccgc ttggaggtcc
7921 tacctgaaca tggagctcac tatcccaatt ttcgctacca attctgactg tgaactcatc
7981 gtgaaggcaa tgcaggggct cctcaaagac ggtaatccta tcccttccgc catcgccgct
8041 aactcaggta tctacagcgc tggaggaggt ggaagcggag gaggaggaag cggaggagga
8101 ggtagcggac ctaagaaaaa gaggaaggtg gcggccgctg gatccccttc agggcagatc
8161 agcaaccagg ccctggctct ggcccctagc tccgctccag tgctggccca gactatggtg
8221 ccctctagtg ctatggtgcc tctggcccag ccacctgctc cagcccctgt gctgacccca
8281 ggaccacccc agtcactgag cgctccagtg cccaagtcta cacaggccgg cgaggggact
8341 ctgagtgaag ctctgctgca cctgcagttc gacgctgatg aggacctggg agctctgctg
8401 gggaacagca ccgatcccgg agtgttcaca gatctggcct ccgtggacaa ctctgagttt
8461 cagcagctgc tgaatcaggg cgtgtccatg tctcatagta cagccgaacc aatgctgatg
8521 gagtaccccg aagccattac ccggctggtg accggcagcc agcggccccc cgaccccgct
8581 ccaactcccc tgggaaccag cggcctgcct aatgggctgt ccggagatga agacttctca
8641 agcatcgctg atatggactt tagtgccctg ctgtcacaga tttcctctag tgggcaggga
8701 ggaggtggaa gcggcttcag cgtggacacc agtgccctgc tggacctgtt cagcccctcg
8761 gtgaccgtgc ccgacatgag cctgcctgac cttgacagca gcctggccag tatccaagag
8821 ctcctgtctc cccaggagcc ccccaggcct cccgaggcag agaacagcag cccggattca
8881 gggaagcagc tggtgcacta cacagcgcag ccgctgttcc tgctggaccc cggctccgtg
8941 gacaccggga gcaacgacct gccggtgctg tttgagctgg gagagggctc ctacttctcc
9001 gaaggggacg gcttcgccga ggaccccacc atctccctgc tgacaggctc ggagcctccc
9061 aaagccaagg accccactgt ctcctgtaca ggcagtggag agggcagagg aagtctgcta
9121 acatgcggtg acgtcgagga gaatcctggc ccaaccatga aaaagcctga actcaccgct
9181 acctctgtcg agaagtttct gatcgaaaag ttcgacagcg tctccgacct gatgcagctc
9241 tccgagggcg aagaatctcg ggctttcagc ttcgatgtgg gagggcgtgg atatgtcctg
9301 cgggtgaata gctgcgccga tggtttctac aaagatcgct atgtttatcg gcactttgca
9361 tccgccgctc tccctattcc cgaagtgctt gacattgggg agttcagcga gagcctgacc
9421 tattgcatct cccgccgtgc acagggtgtc accttgcaag acctgcctga aaccgaactg
9481 cccgctgttc tccagcccgt cgccgaggcc atggatgcca tcgctgccgc cgatcttagc
9541 cagaccagcg ggttcggccc attcggacct caaggaatcg gtcaatacac tacatggcgc
9601 gatttcatct gcgctattgc tgatccccat gtgtatcact ggcaaactgt gatggacgac
9661 accgtcagtg cctccgtcgc ccaggctctc gatgagctga tgctttgggc cgaggactgc
9721 cccgaagtcc ggcacctcgt gcacgccgat ttcggctcca acaatgtcct gaccgacaat
9781 ggccgcataa cagccgtcat tgactggagc gaggccatgt tcggggattc ccaatacgag
9841 gtcgccaaca tcttcttctg gaggccctgg ttggcttgta tggagcagca gacccgctac
9901 ttcgagcgga ggcatcccga gcttgcagga tctcctcggc tccgggctta tatgctccgc
9961 attggtcttg accaactcta tcagagcttg gttgacggca atttcgatga tgcagcttgg
10021 gctcagggtc gctgcgacgc aatcgtccgg tccggagccg ggactgtcgg gcgtacacaa
10081 atcgcccgca gaagcgctgc cgtctggacc gatggctgtg tggaagtgct cgccgatagt
10141 ggaaacagac gccccagcac tcgtcctagg gcaaaggatc tgcagtaatg agaattcgat
10201 atcaagctta tcggtaatca acctctggat tacaaaattt gtgaaagatt gactggtatt
10261 cttaactatg ttgctccttt tacgctatgt ggatacgctg ctttaatgcc tttgtatcat
10321 gctattgctt cccgtatggc tttcattttc tcctccttgt ataaatcctg gttgctgtct
10381 ctttatgagg agttgtggcc cgttgtcagg caacgtggcg tggtgtgcac tgtgtttgct
10441 gacgcaaccc ccactggttg gggcattgcc accacctgtc agctcctttc cgggactttc
10501 gctttccccc tccctattgc cacggcggaa ctcatcgccg cctgccttgc ccgctgctgg
10561 acaggggctc ggctgttggg cactgacaat tccgtggtgt tgtcggggaa atcatcgtcc
10621 tttccttggc tgctcgcctg tgttgccacc tggattctgc gcgggacgtc cttctgctac
10681 gtcccttcgg ccctcaatcc agcggacctt ccttcccgcg gcctgctgcc ggctctgcgg
10741 cctcttccgc gtcttcgcct tcgccctcag acgagtcgga tctccctttg ggccgcctcc
10801 ccgcatcgct agctaattaa ccaaactgga tctctgctgt ccctgtaata aacccgaaaa
10861 ttttgaattt ttgtaatttg tttttgtaat tctttagttt gtatgtctgt tgctattatg
10921 tctactattc tttcccctgc actgtacccc ccaatccccc cttttctttt aaaattgtgg
10981 atgaatactg ccatttgtct gcagaattgg cgcacgcagt gccgatccgt tcactaatcg
11041 aatggatctg tctctgtctc tctctccacc ttcttcttct attccttcgg gcctgtcggg
11101 tcccctcggg gttgggaggt gggtctgaaa cgataatggt gaatatccct gcctaactct
11161 attcactata gaaagtacag caaaaactat tcttaaacct accaagcctc ctactatcat
11221 tatgaataat tttatatacc acagccaatt tgttatgtta aaccaattcc acaaacttgc
11281 ccatttatct aattccaata attcttgttc attcttttct tgctggtttt gcgattcttc
11341 aattaaggag tgtattaagc ttgtgtaatt gttaatttct ctgtcccact ccatccaggt
11401 cgtgtgattc caaatctgtt ccagagattt attactccaa ctagcattcc aaggcacagc
11461 agtggtgcaa atgagttttc cagagcaacc ccaaatcccc aggagctgtt gatcctttag
11521 gtatctttcc acagccagga ttcttgcctg gagctgcttg atgccccaga ctgtgagttg
11581 caacagatgc tgttgcgcct caatagccct cagcaaattg ttctgctgct gcactatacc
11641 agacaataat tgtctggcct gtaccgtcag cgtcattgac gctgcgccca tagtgcttcc
11701 tgctgctccc aagaacccaa ggaacaaagc tcctattcc
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：lentiMPH v2哺乳编辑质粒
别称: Plasmid#89308
| 复制子: | pUC |
|---|---|
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | Hyg,Zeo |
| 克隆菌株: | Stbl3 |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞,慢病毒 |
|---|---|
| 载体用途： | 基因敲除 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | Hyg,Zeo |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
lentiMPH v2是一个哺乳Cas9表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 11739 bp ds-DNA circular SYN 04-DEC-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..11739
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
misc_feature 488..613
/label=HIV-1 Psi
/note="packaging signal of human immunodeficiency virus
type 1"
LTR 660..840
/label=5' LTR (truncated)
/note="truncated 5' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"
promoter complement(858..1056)
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
enhancer 1058..1437
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 1703..1807
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
CDS 1808..2668
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin 2839..3427
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
polyA_signal 3878..3999
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
CDS complement(4129..4503)
/codon_start=1
/gene="Sh ble from Streptoalloteichus hindustanus"
/product="antibiotic-binding protein"
/label=Zeo
/note="confers resistance to bleomycin, phleomycin, and
Zeocin(TM)"
/translation="MAKLTSAVPVLTARDVAGAVEFWTDRLGFSRDFVEDDFAGVVRDD
VTLFISAVQDQVVPDNTLAWVWVRGLDELYAEWSEVVSTNFRDASGPAMTEIGEQPWGR
EFALRDPAGNCVHFVAEEQD"
promoter complement(4522..4569)
/label=EM7 promoter
/note="synthetic bacterial promoter "
promoter complement(4617..4946)
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 4631..4766
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
rep_origin complement(4960..5388)
/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
polyA_signal 5434..5658
/label=bGH poly(A) signal
/note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
LTR 5690..5870
/label=5' LTR (truncated)
/note="truncated 5' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"
promoter 6475..7653
/label=EF-1-alpha promoter
/note="strong constitutive promoter for human elongation
factor EF-1-alpha"
regulatory 7660..7669
/regulatory_class="other"
/note="vertebrate consensus sequence for strong initiation
of translation (Kozak, 1987)"
CDS 7669..8055
/codon_start=1
/product="bacteriophage MS2 coat protein"
/label=MS2-N55K
/note="binds with high affinity to a specific stem-loop
structure in the viral RNA (Lim et al., 1994)"
/translation="ASNFTQFVLVDNGGTGDVTVAPSNFANGVAEWISSNSRSQAYKVT
CSVRQSSAQKRKYTIKVEVPKVATQTVGGVELPVAAWRSYLNMELTIPIFATNSDCELI
VKAMQGLLKDGNPIPSAIAANSGIY"
CDS 8110..8130
/codon_start=1
/product="nuclear localization signal of SV40 (simian virus
40) large T antigen"
/label=SV40 NLS
/translation="PKKKRKV"
CDS 8146..8688
/codon_start=1
/product="C-terminal portion of the p65 subunit of mouse
NF-kappa-B"
/label=p65
/translation="PSGQISNQALALAPSSAPVLAQTMVPSSAMVPLAQPPAPAPVLTP
GPPQSLSAPVPKSTQAGEGTLSEALLHLQFDADEDLGALLGNSTDPGVFTDLASVDNSE
FQQLLNQGVSMSHSTAEPMLMEYPEAITRLVTGSQRPPDPAPTPLGTSGLPNGLSGDED
FSSIADMDFSALLSQISS"
CDS 8713..9084
/codon_start=1
/product="C-terminal activation domain from the human heat
shock transcription factor HSF1"
/label=HSF1
/translation="GFSVDTSALLDLFSPSVTVPDMSLPDLDSSLASIQELLSPQEPPR
PPEAENSSPDSGKQLVHYTAQPLFLLDPGSVDTGSNDLPVLFELGEGSYFSEGDGFAED
PTISLLTGSEPPKAKDPTVS"
CDS 9100..9153
/codon_start=1
/product="2A peptide from Thosea asigna virus capsid
protein"
/label=T2A
/note="Eukaryotic ribosomes fail to insert a peptide bond
between the Gly and Pro residues, yielding separate
polypeptides."
/translation="EGRGSLLTCGDVEENPGP"
CDS 9157..10176
/codon_start=1
/product="hygromycin B phosphotransferase"
/label=HygR
/note="confers resistance to hygromycin"
/translation="MKKPELTATSVEKFLIEKFDSVSDLMQLSEGEESRAFSFDVGGRG
YVLRVNSCADGFYKDRYVYRHFASAALPIPEVLDIGEFSESLTYCISRRAQGVTLQDLP
ETELPAVLQPVAEAM-DAIAAADLSQTSGFGPFGPQGIGQYTTWRDFICAIADPHVYHWQ
TVMDDTVSASVAQALDELMLWAEDCPEVRHLVHADFGSNNVLTDNGRITAVIDWSEAMF
GDSQYEVANIFFWRPWLACMEQQTRYFERRHPELAGSPRLRAYMLRIGLDQLYQSLVDG
NFDDAAWAQGRCDAIVRSGAGTVGRTQIARRSAAVWTDGCVEVLADSGNRRPSTRPRAK
"
misc_feature 10216..10804
/label=WPRE
/note="woodchuck hepatitis virus posttranscriptional
regulatory element"
misc_feature 10857..10974
/label=cPPT/CTS
/note="central polypurine tract and central termination
sequence of HIV-1"
misc_feature 11501..11734
/label=RRE
/note="The Rev response element (RRE) of HIV-1 allows for
Rev-dependent mRNA export from the nucleus to the
cytoplasm."
ORIGIN
1 cactgctctt ttttctctct gcaccactct tctctttgcc ttggtgggtg ctactcctaa
61 tggttcaatt tttactactt tatatttata taattcactt ctccaattgt ccctcatatc
121 tcctcctcca ggtctgaaga tcagcggccg cttgctgtgc ggtggtctta cttttgtttt
181 gctcttcctc tatcttgtct aaagcttcct tggtgtcttt tatctctatc ctttgatgca
241 cacaatagag ggttgctact gtattatata atgatctaag ttcttctgat cctgtctgaa
301 gggatggttg tagctgtccc agtatttgtc tacagccttc tgatgtttct aacaggccag
361 gattaactgc gaatcgttct agctccctgc ttgcccatac tatatgtttt aatttatatt
421 ttttctttcc ccctggcctt aaccgaattt tttcccatcg cgatctaatt ctcccccgct
481 taatactgac gctctcgcac ccatctctct ccttctagcc tccgctagtc aaaatttttg
541 gcgtactcac cagtcgccgc ccctcgcctc ttgccgtgcg cgcttcagca agccgagtcc
601 tgcgtcgaga gagctcctct ggtttccctt tcgctttcaa gtccctgttc gggcgccact
661 gctagagatt ttccacactg actaaaaggg tctgagggat ctctagttac cagagtcaca
721 caacagacgg gcacacacta cttgaagcac tcaaggcaag ctttattgag gcttaagcag
781 tgggttccct agttagccag agagctccca ggctcagatc tggtctaacc agagagaccc
841 agtacaggca aaacgcgctg cttatataga cctcccaccg tacacgccta ccgcccattt
901 gcgtcaatgg ggcggagttg ttacgacatt ttggaaagtc ccgttgattt tggtgccaaa
961 acaaactccc attgacgtca atggggtgga gacttggaaa tccccgtgag tcaaaccgct
1021 atccacgccc attgatgtac tgccaaaacc gcatcaccat ggtaatagcg atgactaata
1081 cgtagatgta ctgccaagta ggaaagtccc ataaggtcat gtactgggca taatgccagg
1141 cgggccattt accgtcattg acgtcaatag ggggcgtact tggcatatga tacacttgat
1201 gtactgccaa gtgggcagtt taccgtaaat actccaccca ttgacgtcaa tggaaagtcc
1261 ctattggcgt tactatggga acatacgtca ttattgacgt caatgggcgg gggtcgttgg
1321 gcggtcagcc aggcgggcca tttaccgtaa gttatgtaac gcggaactcc atatatgggc
1381 tatgaactaa tgaccccgta attgattact attaataact agtcaataat caatgtcaac
1441 gcgtatatct ggcccgtaca tcgcgaagca gcgcaaaacg cctaacccta agcagattct
1501 tcatgcaatt gtcggtcaag ccttgccttg ttgtagctta aattttgctc gcgcactact
1561 cagcgacctc caacacacaa gcagggagca gatactggct taactatgcg gcatcagagc
1621 agattgtact gagagtgcac cataggggat cgggagatct cccgatccgt cgacgtcagg
1681 tggcactttt cggggaaatg tgcgcggaac ccctatttgt ttatttttct aaatacattc
1741 aaatatgtat ccgctcatga gacaataacc ctgataaatg cttcaataat attgaaaaag
1801 gaagagtatg agtattcaac atttccgtgt cgcccttatt cccttttttg cggcattttg
1861 ccttcctgtt tttgctcacc cagaaacgct ggtgaaagta aaagatgctg aagatcagtt
1921 gggtgcacga gtgggttaca tcgaactgga tctcaacagc ggtaagatcc ttgagagttt
1981 tcgccccgaa gaacgttttc caatgatgag cacttttaaa gttctgctat gtggcgcggt
2041 attatcccgt attgacgccg ggcaagagca actcggtcgc cgcatacact attctcagaa
2101 tgacttggtt gagtactcac cagtcacaga aaagcatctt acggatggca tgacagtaag
2161 agaattatgc agtgctgcca taaccatgag tgataacact gcggccaact tacttctgac
2221 aacgatcgga ggaccgaagg agctaaccgc ttttttgcac aacatggggg atcatgtaac
2281 tcgccttgat cgttgggaac cggagctgaa tgaagccata ccaaacgacg agcgtgacac
2341 cacgatgcct gtagcaatgg caacaacgtt gcgcaaacta ttaactggcg aactacttac
2401 tctagcttcc cggcaacaat taatagactg gatggaggcg gataaagttg caggaccact
2461 tctgcgctcg gcccttccgg ctggctggtt tattgctgat aaatctggag ccggtgagcg
2521 tgggtctcgc ggtatcattg cagcactggg gccagatggt aagccctccc gtatcgtagt
2581 tatctacacg acggggagtc aggcaactat ggatgaacga aatagacaga tcgctgagat
2641 aggtgcctca ctgattaagc attggtaact gtcagaccaa gtttactcat atatacttta
2701 gattgattta aaacttcatt tttaatttaa aaggatctag gtgaagatcc tttttgataa
2761 tctcatgacc aaaatccctt aacgtgagtt ttcgttccac tgagcgtcag accccgtaga
2821 aaagatcaaa ggatcttctt gagatccttt ttttctgcgc gtaatctgct gcttgcaaac
2881 aaaaaaacca ccgctaccag cggtggtttg tttgccggat caagagctac caactctttt
2941 tccgaaggta actggcttca gcagagcgca gataccaaat actgttcttc tagtgtagcc
3001 gtagttaggc caccacttca agaactctgt agcaccgcct acatacctcg ctctgctaat
3061 cctgttacca gtggctgctg ccagtggcga taagtcgtgt cttaccgggt tggactcaag
3121 acgatagtta ccggataagg cgcagcggtc gggctgaacg gggggttcgt gcacacagcc
3181 cagcttggag cgaacgacct acaccgaact gagataccta cagcgtgagc tatgagaaag
3241 cgccacgctt cccgaaggga gaaaggcgga caggtatccg gtaagcggca gggtcggaac
3301 aggagagcgc acgagggagc ttccaggggg aaacgcctgg tatctttata gtcctgtcgg
3361 gtttcgccac ctctgacttg agcgtcgatt tttgtgatgc tcgtcagggg ggcggagcct
3421 atggaaaaac gccagcaacg cggccttttt acggttcctg gccttttgct ggccttttgc
3481 tcacatgttc tttcctgcgt tatcccctga ttctgtggat aaccgtatta ccgcctttga
3541 gtgagctgat accgctcgcc gcagccgaac gaccgagcgc agcgagtcag tgagcgagga
3601 agcggaagag cgcccaatac gcaaaccgcc tctccccgcg cgttggccga ttcattaatg
3661 cagctggcac gacaggtttc ccgactggaa agcgggcagt gagcgcaacg caattaatgt
3721 gagttagctc actcattagg caccccaggc tttacacttt atgcttccgg ctcgtatgtt
3781 gtgtggaatt gtgagcggat aacaatttca cacaggaaac agctatgacc atgattacgc
3841 caagctctag ctagaggtcg acggtataca gacatgataa gatacattga tgagtttgga
3901 caaaccacaa ctagaatgca gtgaaaaaaa tgctttattt gtgaaatttg tgatgctatt
3961 gctttatttg taaccattat aagctgcaat aaacaagttg gggtgggcga agaactccag
4021 catgagatcc ccgcgctgga ggatcatcca gccggcgtcc cggaaaacga ttccgaagcc
4081 caacctttca tagaaggcgg cggtggaatc gaaatctcgt agcacgtgtc agtcctgctc
4141 ctcggccacg aagtgcacgc agttgccggc cgggtcgcgc agggcgaact cccgccccca
4201 cggctgctcg ccgatctcgg tcatggccgg cccggaggcg tcccggaagt tcgtggacac
4261 gacctccgac cactcggcgt acagctcgtc caggccgcgc acccacaccc aggccagggt
4321 gttgtccggc accacctggt cctggaccgc gctgatgaac agggtcacgt cgtcccggac
4381 cacaccggcg aagtcgtcct ccacgaagtc ccgggagaac ccgagccggt cggtccagaa
4441 ctcgaccgct ccggcgacgt cgcgcgcggt gagcaccgga acggcactgg tcaacttggc
4501 catggtttag ttcctcacct tgtcgtatta tactatgccg atatactatg ccgatgatta
4561 attgtcaaca cgtgctgatc agatccgaaa atggatatac aagctcccgg gagctttttg
4621 caaaagccta ggcctccaaa aaagcctcct cactacttct ggaatagctc agaggcagag
4681 gcggcctcgg cctctgcata aataaaaaaa attagtcagc catggggcgg agaatgggcg
4741 gaactgggcg gagttagggg cgggatgggc ggagttaggg gcgggactat ggttgctgac
4801 taattgagat gcatgctttg catacttctg cctgctgggg agcctgggga ctttccacac
4861 ctggttgctg actaattgag atgcatgctt tgcatacttc tgcctgctgg ggagcctggg
4921 gactttccac accctaactg acacacattc cacagaatta attcgcgtta aatttttgtt
4981 aaatcagctc attttttaac caataggccg aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag
5041 aatagaccga gatagggttg agtgttgttc cagtttggaa caagagtcca ctattaaaga
5101 acgtggactc caacgtcaaa gggcgaaaaa ccgtctatca gggcgatggc ccactacgtg
5161 aaccatcacc ctaatcaagt tttttggggt cgaggtgccg taaagcacta aatcggaacc
5221 ctaaagggag cccccgattt agagcttgac ggggaaagcc ggcgaacgtg gcgagaaagg
5281 aagggaagaa agcgaaagga gcgggcgcta gggcgctggc aagtgtagcg gtcacgctgc
5341 gcgtaaccac cacacccgcc gcgcttaatg cgccgctaca gggcgcgtgg ggataccccc
5401 tagagcccca gctggttctt tccgcctcag aagccataga gcccaccgca tccccagcat
5461 gcctgctatt gtcttcccaa tcctccccct tgctgtcctg ccccacccca ccccccagaa
5521 tagaatgaca cctactcaga caatgcgatg caatttcctc attttattag gaaaggacag
5581 tgggagtggc accttccagg gtcaaggaag gcacggggga ggggcaaaca acagatggct
5641 ggcaactaga aggcacagtc gaggctgatc agcgggttta aacgggccct gctagagatt
5701 ttccacactg actaaaaggg tctgagggat ctctagttac cagagtcaca caacagacgg
5761 gcacacacta cttgaagcac tcaaggcaag ctttattgag gcttaagcag tgggttccct
5821 agttagccag agagctccca ggctcagatc tggtctaacc agagagaccc agtacagtcc
5881 ggatgcagct ctcgggccat gtgatgaaat gctaggcggc tgtcaaacct ccactctaat
5941 acttctctct ccgggtcatc catcccatgc aggctcacag ggtgtaacaa gcgggtgttc
6001 tctccttcat tggcttcttc taccttctct tgctcaactg gtactagctt gtagcaccat
6061 ccaaaggtca gtggatatct gatccctggc cctggtgtgt agttctgcca atcagggaag
6121 tagccttgtg tgtggtagat ccacagatca aggatatctt gtcttcgttg ggagtgaatt
6181 agcccttcca gtcccccctt ttcttttaaa aagtggctaa gatctacagc tgccttgtaa
6241 gtcattggtc ttaaaggtac ctgaggtgtg actggaaaac ccacctcctc ctcctcttgt
6301 gcttctagcc aggcacaatc agcattggta gctgctgtat tgctacttgt gattgctcca
6361 tgtttttcta ggtctcgagg tcgacggtat cgattgcaaa gatggataaa gttttaaaca
6421 gagaggaatc tttgcagcta atggaccttc taggtcttga aaggagtggg aattggctcc
6481 ggtgcccgtc agtgggcaga gcgcacatcg cccacagtcc ccgagaagtt ggggggaggg
6541 gtcggcaatt gaaccggtgc ctagagaagg tggcgcgggg taaactggga aagtgatgtc
6601 gtgtactggc tccgcctttt tcccgagggt gggggagaac cgtatataag tgcagtagtc
6661 gccgtgaacg ttctttttcg caacgggttt gccgccagaa cacaggtaag tgccgtgtgt
6721 ggttcccgcg ggcctggcct ctttacgggt tatggccctt gcgtgccttg aattacttcc
6781 acctggctgc agtacgtgat tcttgatccc gagcttcggg ttggaagtgg gtgggagagt
6841 tcgaggcctt gcgcttaagg agccccttcg cctcgtgctt gagttgaggc ctggcctggg
6901 cgctggggcc gccgcgtgcg aatctggtgg caccttcgcg cctgtctcgc tgctttcgat
6961 aagtctctag ccatttaaaa tttttgatga cctgctgcga cgcttttttt ctggcaagat
7021 agtcttgtaa atgcgggcca agatctgcac actggtattt cggtttttgg ggccgcgggc
7081 ggcgacgggg cccgtgcgtc ccagcgcaca tgttcggcga ggcggggcct gcgagcgcgg
7141 ccaccgagaa tcggacgggg gtagtctcaa gctggccggc ctgctctggt gcctggcctc
7201 gcgccgccgt gtatcgcccc gccctgggcg gcaaggctgg cccggtcggc accagttgcg
7261 tgagcggaaa gatggccgct tcccggccct gctgcaggga gctcaaaatg aaggacgcgg
7321 cgctcgggag agcgggcggg tgagtcaccc acacaaagga aaagggcctt tccgtcctca
7381 gccgtcgctt catgtgactc cacggagtac cgggcgccgt ccaggcacct cgattagttc
7441 tcgagctttt ggagtacgtc gtctttaggt tggggggagg ggttttatgc gatggagttt
7501 ccccacactg agtgggtgga gactgaagtt aggccagctt ggcacttgat gtaattctcc
7561 ttggaatttg ccctttttga gtttggatct tggttcattc tcaagcctca gacagtggtt
7621 caaagttttt ttcttccatt tcaggtgtcg tgacgtacgg ccaccatggc ttcaaacttt
7681 actcagttcg tgctcgtgga caatggtggg acaggggatg tgacagtggc tccttctaat
7741 ttcgctaatg gggtggcaga gtggatcagc tccaactcac ggagccaggc ctacaaggtg
7801 acatgcagcg tcaggcagtc tagtgcccag aagagaaagt ataccatcaa ggtggaggtc
7861 cccaaagtgg ctacccagac agtgggcgga gtcgaactgc ctgtcgccgc ttggaggtcc
7921 tacctgaaca tggagctcac tatcccaatt ttcgctacca attctgactg tgaactcatc
7981 gtgaaggcaa tgcaggggct cctcaaagac ggtaatccta tcccttccgc catcgccgct
8041 aactcaggta tctacagcgc tggaggaggt ggaagcggag gaggaggaag cggaggagga
8101 ggtagcggac ctaagaaaaa gaggaaggtg gcggccgctg gatccccttc agggcagatc
8161 agcaaccagg ccctggctct ggcccctagc tccgctccag tgctggccca gactatggtg
8221 ccctctagtg ctatggtgcc tctggcccag ccacctgctc cagcccctgt gctgacccca
8281 ggaccacccc agtcactgag cgctccagtg cccaagtcta cacaggccgg cgaggggact
8341 ctgagtgaag ctctgctgca cctgcagttc gacgctgatg aggacctggg agctctgctg
8401 gggaacagca ccgatcccgg agtgttcaca gatctggcct ccgtggacaa ctctgagttt
8461 cagcagctgc tgaatcaggg cgtgtccatg tctcatagta cagccgaacc aatgctgatg
8521 gagtaccccg aagccattac ccggctggtg accggcagcc agcggccccc cgaccccgct
8581 ccaactcccc tgggaaccag cggcctgcct aatgggctgt ccggagatga agacttctca
8641 agcatcgctg atatggactt tagtgccctg ctgtcacaga tttcctctag tgggcaggga
8701 ggaggtggaa gcggcttcag cgtggacacc agtgccctgc tggacctgtt cagcccctcg
8761 gtgaccgtgc ccgacatgag cctgcctgac cttgacagca gcctggccag tatccaagag
8821 ctcctgtctc cccaggagcc ccccaggcct cccgaggcag agaacagcag cccggattca
8881 gggaagcagc tggtgcacta cacagcgcag ccgctgttcc tgctggaccc cggctccgtg
8941 gacaccggga gcaacgacct gccggtgctg tttgagctgg gagagggctc ctacttctcc
9001 gaaggggacg gcttcgccga ggaccccacc atctccctgc tgacaggctc ggagcctccc
9061 aaagccaagg accccactgt ctcctgtaca ggcagtggag agggcagagg aagtctgcta
9121 acatgcggtg acgtcgagga gaatcctggc ccaaccatga aaaagcctga actcaccgct
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9241 tccgagggcg aagaatctcg ggctttcagc ttcgatgtgg gagggcgtgg atatgtcctg
9301 cgggtgaata gctgcgccga tggtttctac aaagatcgct atgtttatcg gcactttgca
9361 tccgccgctc tccctattcc cgaagtgctt gacattgggg agttcagcga gagcctgacc
9421 tattgcatct cccgccgtgc acagggtgtc accttgcaag acctgcctga aaccgaactg
9481 cccgctgttc tccagcccgt cgccgaggcc atggatgcca tcgctgccgc cgatcttagc
9541 cagaccagcg ggttcggccc attcggacct caaggaatcg gtcaatacac tacatggcgc
9601 gatttcatct gcgctattgc tgatccccat gtgtatcact ggcaaactgt gatggacgac
9661 accgtcagtg cctccgtcgc ccaggctctc gatgagctga tgctttgggc cgaggactgc
9721 cccgaagtcc ggcacctcgt gcacgccgat ttcggctcca acaatgtcct gaccgacaat
9781 ggccgcataa cagccgtcat tgactggagc gaggccatgt tcggggattc ccaatacgag
9841 gtcgccaaca tcttcttctg gaggccctgg ttggcttgta tggagcagca gacccgctac
9901 ttcgagcgga ggcatcccga gcttgcagga tctcctcggc tccgggctta tatgctccgc
9961 attggtcttg accaactcta tcagagcttg gttgacggca atttcgatga tgcagcttgg
10021 gctcagggtc gctgcgacgc aatcgtccgg tccggagccg ggactgtcgg gcgtacacaa
10081 atcgcccgca gaagcgctgc cgtctggacc gatggctgtg tggaagtgct cgccgatagt
10141 ggaaacagac gccccagcac tcgtcctagg gcaaaggatc tgcagtaatg agaattcgat
10201 atcaagctta tcggtaatca acctctggat tacaaaattt gtgaaagatt gactggtatt
10261 cttaactatg ttgctccttt tacgctatgt ggatacgctg ctttaatgcc tttgtatcat
10321 gctattgctt cccgtatggc tttcattttc tcctccttgt ataaatcctg gttgctgtct
10381 ctttatgagg agttgtggcc cgttgtcagg caacgtggcg tggtgtgcac tgtgtttgct
10441 gacgcaaccc ccactggttg gggcattgcc accacctgtc agctcctttc cgggactttc
10501 gctttccccc tccctattgc cacggcggaa ctcatcgccg cctgccttgc ccgctgctgg
10561 acaggggctc ggctgttggg cactgacaat tccgtggtgt tgtcggggaa atcatcgtcc
10621 tttccttggc tgctcgcctg tgttgccacc tggattctgc gcgggacgtc cttctgctac
10681 gtcccttcgg ccctcaatcc agcggacctt ccttcccgcg gcctgctgcc ggctctgcgg
10741 cctcttccgc gtcttcgcct tcgccctcag acgagtcgga tctccctttg ggccgcctcc
10801 ccgcatcgct agctaattaa ccaaactgga tctctgctgt ccctgtaata aacccgaaaa
10861 ttttgaattt ttgtaatttg tttttgtaat tctttagttt gtatgtctgt tgctattatg
10921 tctactattc tttcccctgc actgtacccc ccaatccccc cttttctttt aaaattgtgg
10981 atgaatactg ccatttgtct gcagaattgg cgcacgcagt gccgatccgt tcactaatcg
11041 aatggatctg tctctgtctc tctctccacc ttcttcttct attccttcgg gcctgtcggg
11101 tcccctcggg gttgggaggt gggtctgaaa cgataatggt gaatatccct gcctaactct
11161 attcactata gaaagtacag caaaaactat tcttaaacct accaagcctc ctactatcat
11221 tatgaataat tttatatacc acagccaatt tgttatgtta aaccaattcc acaaacttgc
11281 ccatttatct aattccaata attcttgttc attcttttct tgctggtttt gcgattcttc
11341 aattaaggag tgtattaagc ttgtgtaatt gttaatttct ctgtcccact ccatccaggt
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11641 agacaataat tgtctggcct gtaccgtcag cgtcattgac gctgcgccca tagtgcttcc
11701 tgctgctccc aagaacccaa ggaacaaagc tcctattcc
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P1214/pBAD18大肠表达质粒 |
| P0082/pBAD24大肠表达质粒 |
| P0390/pBAD30大肠表达质粒 |
| P0999/pBAD33大肠表达质粒 |
| P1253/pBAD43大肠表达质粒 |
| P0866/pBAD/gIIIA大肠表达质粒 |
| P0389/pTrc99a大肠表达质粒 |
| P0813/pTrcHisA大肠表达质粒 |
| P1592/pTrcHis2A大肠表达质粒 |
| P1179/pMCSG7大肠表达质粒 |
| P0083/pMCSG9大肠表达质粒 |
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文献和实验相关实验
基因编辑技术的飞速发展, 特别是近年来 CRISPR 技术的广泛应用，使得人类拥有了前所未有的改变和修饰基因组的能力。CRISPR 技术来源于细菌本身对抗噬菌体的「免疫系统」，这项技术利用单链引导 RNA(sgRNA) 和 Cas9 蛋白，可以在体内和体外简单、迅速、低成本实现基因编辑。利用 CRISPR 技术不仅可以对编码基因进行有效编辑和基因组的大规模筛选，而且还可以结合 NGS 对非编码 RNA（ncRNA）进行功能研究。CRISPR 技术已经广泛应用于全球各个实验室，几乎可以对所有细胞
基因编辑再次升级！领域大牛刘如谦 Cell 发文开发新工具，可安全高效进行体内基因编辑
293T 细胞。 图片来源：Cell VLP 的持续改善以优化其递送性能 虽然上述实验证明了 v1 BE-VLPs 可以在体外细胞系中实现高效递送和精准编辑，但这些常用的测试细胞系尤其容易被基因编辑，并且缺乏治疗相关性。考虑到只有在病毒颗粒成熟后才会发挥切割功能并释放出 ABE8e-RNP。所以他们认为切割效率可能会成为 BE-VLP 编辑的瓶颈。 在第二代工程编辑的 BE-eVLPs（v2 BE-eVLPs）中，他们对连接肽体系进行了优化。研究人员筛选了 4 个已知被 MMLV 蛋白酶以不同效率切割
GENETICS：用于检测哺乳动物细胞中 DNA-蛋白质交联质粒修复的简单、快速的定量分析
该方法的目的是提供灵活，快速和定量的技术来检测哺乳动物细胞系中DNA-蛋白质交联（DPC）修复的动力学。该测定不是全局测定异种生物诱导的或自发的染色体DPC去除的去除，而是检查在质粒DNA底物内的一个位点处特异性引入的均匀的，化学定义的损伤的修复。这种方法避免了放射性物质的使用，并且不依赖昂贵的或高度专业化的技术。相反，它依赖于标准的重组DNA程序和广泛可用的实时定量聚合酶链式反应（qPCR）仪器。考虑到所用策略的固有灵活性，可以改变交联蛋白的大小以及化学连接的性质和连接位点的精确 DNA
lentiMPH v2哺乳编辑质粒
￥100 - 1000
