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- Xybio
- 上海
- P1256
- 2025年07月12日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pSilencer 4.1-CMV-Neo
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pSilencer4.1-CMV-Neo哺乳干扰质粒
别称: pSilencer 4.1-CMV-Neo
| 启动子: | CMV |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | G418 |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 干扰沉默 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | shRNA |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | Neo/G418 |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pSilencer4.1-CMV-Neo质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4625/pCMV-SPORT6-MAD2L2人源基因质粒 |
| P4626/pCMV-SPORT6-PLEK（1点突变）人源基因质粒 |
| P4627/pCMV-SPORT6-CD84人源基因质粒 |
| P4628/pCMV-SPORT6-LRRFIP2人源基因质粒 |
| P4629/pCMV-SPORT6-SECTM1（1点突变1同义突变）人源基因质粒 |
| P4630/pCMV-SPORT6-LCK人源基因质粒 |
| P4631/pCMV-SPORT6-MID2（34-2118bp）人源基因质粒 |
| P4632/pCMV-SPORT6-IFI27L1人源基因质粒 |
| P4633/pCMV-SPORT6-CCDC134人源基因质粒 |
| P4634/pCMV-SPORT6-MAGEA2B(1同义突变1点突变）人源基因质粒 |
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文献和实验2)、哺乳动物/真核表达载体 pcDNA3.1+ 不含任何标签的真核表达载体 amp/neo 5.4kb E. coli/mammals pcDNA3.1- 不含任何标签的真核表达载体 amp/neo 5.4kb E. coli/mammals pcDNA4/V5-His A, amp 含His标签的真核表达载体 amp/neo pcDNA 3.1(-) myc-hisA 含His标签的真核表达载体 amp/neo pcDNA 3.1(-) myc-hisB 含His标签
pCF-T M13F M13R pCI T7（17Base） 此载体无反向引物 pCI-neo T7（17Base） T3 pCMS-EGFP T7 T3 pCMV-3Tag-4A T3 /PFLAG-CMV-F T7 pCMV5 pCMV5F pCMV5R pCMV5-Flag pCMV5F pCMV5R pCMV-MYC/HA pCMV-F pCMV-R pCMV-Sport M13F/T7 SP6/M13R pCMV-Tag(KAN+) T3 T7 pCR2.1-TOPO
动物功物细胞．还必须加入遗传选择标记。常用的标记基因有胸腺激酶(tk)基因、二氢叶酸还原酶(dh]r)基因、新霉素(neo)抗性基因、氯霉素乙酰基转移酶(cat)基因等dhfr还可作为共扩增基因使外源基因的表达产物增加。当培养基中逐新增加氨甲蝶呤(MTX)的浓度时，随着细胞对MTX抗体的增加。dhfr基因与外源基因均明显扩增。据文献报道，在不断提高的选择压力下，dhfr及侧翼序列能扩增至上千个拷贝，大大增加目的基因的表达水平。 1．2 表达载体的结构元件 哺乳动物细胞表达载体的必要元件包括
