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- Xybio
- 上海
- P0371
- 2025年07月11日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pSilencer2.1-U6 neo
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pSilencer 2.1-U6-Neo哺乳干扰质粒
别称: pSilencer2.1-U6 neo
| 启动子: | U6 |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 终止子: | SV40 poly(A) signal |
| 质粒分类: | 哺乳细胞，信号通路报告载体 |
| 质粒大小: | 4521bp |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | G418 |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 哺乳细胞 |
| 诱导方式: | 无须诱导，瞬时表达 |
| 5'测序引物: | U6:ATGGACTATCATATGCTTACCGTA |
| 3'测序引物: | 根据序列设计引物 |
质粒属性
| 质粒宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 质粒用途： | 基因沉默 |
| 片段类型： | shRNA |
| 片段物种： | |
| 原核抗性： | Amp |
| 筛选标记： | G418 |
质粒简介
This Ambion vector is for the expression of siRNA. It has an antibiotic resistance gene (neomycin) to enable selection of transfected cells and features the human RNA polymerase III promoter (U6). Sufficient reagents are provided for 20 reactions.
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4589/pCMV-SPORT6-SLC20A1（1同义突变）人源基因质粒 |
| P4590/pCMV-SPORT6-C8orf44-SGK3人源基因质粒 |
| P4591/pCMV-SPORT6-TCEANC人源基因质粒 |
| P4592/pCMV-SPORT6-SLC25A38(1同义突变）人源基因质粒 |
| P4593/pCMV-SPORT6-RXYLT1人源基因质粒 |
| P4594/pCMV-SPORT6-NRF1人源基因质粒 |
| P4595/pCMV-SPORT6-NELL2人源基因质粒 |
| P4596/pCMV-SPORT6-RECQL5人源基因质粒 |
| P4597/pCMV-SPORT6-SEMA4F人源基因质粒 |
| P4598/pCMV-SPORT6-TAF1A(1同义突变）人源基因质粒 |
| P4599/pCMV-SPORT6-LRRC42人源基因质粒 |
| P4600/pCMV-SPORT6-BMX人源基因质粒 |
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文献和实验U6 vector, nucleotide overhangs to the EcoR I and Apa I restriction sites are added to the 5' and 3' end of the DNA oligonucleotides, respectively (Figure 2). In contrast, for cloning into the pSilencer 2.0-U6, 2.1-U6, 3.0-H1, or 3.1-H1 vectors
RNAi分析 ·更清晰的结果―避免非特异应激反应·更高的特异性―仅仅靶定目的基因·更大的稳定性―在血清中不会快速降解 BLOCK-iT™ U6 RNAi Entry Vector 在大部分哺乳动物细胞中瞬时siRNA表达 ·简单、快速地克隆shRNA序列－方便地筛选多个基因或者序列·成本低廉－使用两个ssDNA oligo·很容易转移U6框到其它载体－att
，以及用于表达真核细胞抗性筛选标志的新霉素基因转录元件，包括SV40早期启动子SV40epromoter和新霉素抗性基因Neo。 PS：等高手解释！ pl198242 非常感谢,我看到很多人用到genscript公司的PRNT2.1-U6 neo这种RNAi载体，但是图谱上一般都只标出PUC ori，却不见真核复制起始点，不知道是不是省略了没标出来? Fasta921 pl198242
