pCMV-FLAG-C哺乳表达质粒

基本信息
名称：pCMV-FLAG-C哺乳表达质粒
别称: pCMV-FLAG-C

启动子:	CMV
复制子:	pUC
质粒大小:	3766bp
质粒标签:	C-FLAG
原核抗性:	Amp
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	37度

质粒属性

载体宿主：	哺乳细胞
载体用途：	蛋白表达
基因种属：	空载体
基因类型：	ORF
原核抗性：	Amp
真核抗性：
荧光蛋白：

质粒简介
 pCMV-FLAG-C是一个哺乳细胞过表达质粒，C端有FLAG标签。

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                3766 bp ds-DNA     circular SYN 11-OCT-2017
DEFINITION  synthetic circular DNA
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 3766)
  TITLE     Direct Submission
            http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..3766
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     enhancer        27..330
                     /label=CMV enhancer
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     promoter        331..534
                     /label=CMV promoter
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     intron          672..768
                     /label=SV40 intron
                     /note="modified SV40 intron with splice donor and acceptor 
                     sites"
     misc_feature    832..863
                     /label=MCS
     CDS             867..890
                     /codon_start=1
                     /product="FLAG(R) epitope tag, followed by an enterokinase 
                     cleavage site"
                     /label=FLAG
                     /translation="DYKDDDDK"
     polyA_signal    905..1039
                     /label=SV40 poly(A) signal
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     protein_bind    1174..1190
                     /label=lac operator
                     /bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to 
                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be 
                     relieved by adding lactose or 
                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
     promoter        complement(1198..1228)
                     /label=lac promoter
                     /note="promoter for the E. coli lac operon"
     protein_bind    1243..1264
                     /label=CAP binding site
                     /bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
                     /note="CAP binding activates transcription in the presence 
                     of cAMP."
     rep_origin      complement(1552..2140)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(2311..3171)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /label=AmpR
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(3172..3276)
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
ORIGIN
        1 gagttcgagc ttgcatgcct gcaggtcgtt acataactta cggtaaatgg cccgcctggc
       61 tgaccgccca acgacccccg cccattgacg tcaataatga cgtatgttcc catagtaacg
      121 ccaataggga ctttccattg acgtcaatgg gtggagtatt tacggtaaac tgcccacttg
      181 gcagtacatc aagtgtatca tatgccaagt acgcccccta ttgacgtcaa tgacggtaaa
      241 tggcccgcct ggcattatgc ccagtacatg accttatggg actttcctac ttggcagtac
      301 atctacgtat tagtcatcgc tattaccatg gtgatgcggt tttggcagta catcaatggg
      361 cgtggatagc ggtttgactc acggggattt ccaagtctcc accccattga cgtcaatggg
      421 agtttgtttt ggcaccaaaa tcaacgggac tttccaaaat gtcgtaacaa ctccgcccca
      481 ttgacgcaaa tgggcggtag gcgtgtacgg tgggaggtct atataagcag agctcgttta
      541 gtgaaccgtc agatcgcctg gagacgccat ccacgctgtt ttgacctcca tagaagacac
      601 cgggaccgat ccagcctccg gactctagag gatccggtac tagaggaact gaaaaaccag
      661 aaagttaact ggtaagttta gtctttttgt cttttatttc aggtcccgga tccggtggtg
      721 gtgcaaatca aagaactgct cctcagtgga tgttgccttt acttctaggc ctgtacggaa
      781 gtgttacttc tgctctaaaa gctgcggaat tgtacccgcg ggcccaggcc cgaattcggt
      841 cgaccgagat ctctcgaggt accggcgact acaaggacga cgatgacaag taagcggccg
      901 cggggatcca gacatgataa gatacattga tgagtttgga caaaccacaa ctagaatgca
      961 gtgaaaaaaa tgctttattt gtgaaatttg tgatgctatt gctttatttg taaccattat
     1021 aagctgcaat aaacaagtta acaacaacaa ttgcattcat tttatgtttc aggttcaggg
     1081 ggaggtgtgg gaggtttttt cggatcctct agagtcgatc tgcaggcatg ctagcttggc
     1141 gtaatcatgg tcatagctgt ttcctgtgtg aaattgttat ccgctcacaa ttccacacaa
     1201 catacgagcc ggaagcataa agtgtaaagc ctggggtgcc taatgagtga gctaactcac
     1261 attaattgcg ttgcgctcac tgcccgcttt ccagtcggga aacctgtcgt gccagctgca
     1321 ttaatgaatc ggccaacgcg cggggagagg cggtttgcgt attgggcgct cttccgcttc
     1381 ctcgctcact gactcgctgc gctcggtcgt tcggctgcgg cgagcggtat cagctcactc
     1441 aaaggcggta atacggttat ccacagaatc aggggataac gcaggaaaga acatgtgagc
     1501 aaaaggccag caaaaggcca ggaaccgtaa aaaggccgcg ttgctggcgt ttttccatag
     1561 gctccgcccc cctgacgagc atcacaaaaa tcgacgctca agtcagaggt ggcgaaaccc
     1621 gacaggacta taaagatacc aggcgtttcc ccctggaagc tccctcgtgc gctctcctgt
     1681 tccgaccctg ccgcttaccg gatacctgtc cgcctttctc ccttcgggaa gcgtggcgct
     1741 ttctcatagc tcacgctgta ggtatctcag ttcggtgtag gtcgttcgct ccaagctggg
     1801 ctgtgtgcac gaaccccccg ttcagcccga ccgctgcgcc ttatccggta actatcgtct
     1861 tgagtccaac ccggtaagac acgacttatc gccactggca gcagccactg gtaacaggat
     1921 tagcagagcg aggtatgtag gcggtgctac agagttcttg aagtggtggc ctaactacgg
     1981 ctacactaga aggacagtat ttggtatctg cgctctgctg aagccagtta ccttcggaaa
     2041 aagagttggt agctcttgat ccggcaaaca aaccaccgct ggtagcggtg gtttttttgt
     2101 ttgcaagcag cagattacgc gcagaaaaaa aggatctcaa gaagatcctt tgatcttttc
     2161 tacggggtct gacgctcagt ggaacgaaaa ctcacgttaa gggattttgg tcatgagatt
     2221 atcaaaaagg atcttcacct agatcctttt aaattaaaaa tgaagtttta aatcaatcta
     2281 aagtatatat gagtaaactt ggtctgacag ttaccaatgc ttaatcagtg aggcacctat
     2341 ctcagcgatc tgtctatttc gttcatccat agttgcctga ctccccgtcg tgtagataac
     2401 tacgatacgg gagggcttac catctggccc cagtgctgca atgataccgc gagacccacg
     2461 ctcaccggct ccagatttat cagcaataaa ccagccagcc ggaagggccg agcgcagaag
     2521 tggtcctgca actttatccg cctccatcca gtctattaat tgttgccggg aagctagagt
     2581 aagtagttcg ccagttaata gtttgcgcaa cgttgttgcc attgctacag gcatcgtggt
     2641 gtcacgctcg tcgtttggta tggcttcatt cagctccggt tcccaacgat caaggcgagt
     2701 tacatgatcc cccatgttgt gcaaaaaagc ggttagctcc ttcggtcctc cgatcgttgt
     2761 cagaagtaag ttggccgcag tgttatcact catggttatg gcagcactgc ataattctct
     2821 tactgtcatg ccatccgtaa gatgcttttc tgtgactggt gagtactcaa ccaagtcatt
     2881 ctgagaatag tgtatgcggc gaccgagttg ctcttgcccg gcgtcaatac gggataatac
     2941 cgcgccacat agcagaactt taaaagtgct catcattgga aaacgttctt cggggcgaaa
     3001 actctcaagg atcttaccgc tgttgagatc cagttcgatg taacccactc gtgcacccaa
     3061 ctgatcttca gcatctttta ctttcaccag cgtttctggg tgagcaaaaa caggaaggca
     3121 aaatgccgca aaaaagggaa taagggcgac acggaaatgt tgaatactca tactcttcct
     3181 ttttcaatat tattgaagca tttatcaggg ttattgtctc atgagcggat acatatttga
     3241 atgtatttag aaaaataaac aaataggggt tccgcgcaca tttccccgaa aagtgccacc
     3301 tgacgtctaa gaaaccatta ttatcatgac attaacctat aaaaataggc gtatcacgag
     3361 gccctttcgt ctcgcgcgtt tcggtgatga cggtgaaaac ctctgacaca tgcagctccc
     3421 ggagacggtc acagcttgtc tgtaagcgga tgccgggagc agacaagccc gtcagggcgc
     3481 gtcagcgggt gttggcgggt gtcggggctg gcttaactat gcggcatcag agcagattgt
     3541 actgagagtg caccatatgc ggtgtgaaat accgcacaga tgcgtaagga gaaaataccg
     3601 catcaggcgc cattcgccat tcaggctgcg caactgttgg gaagggcgat cggtgcgggc
     3661 ctcttcgcta ttacgccagc tggcgaaagg gggatgtgct gcaaggcgat taagttgggt
     3721 aacgccaggg ttttcccagt cacgacgttg taaaacgacg gccagt
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P2599/pENTR223-ASF1B人源基因质粒

P2600/pENTR223-DNAJC12-T19C人源基因质粒

P2601/pENTR223-CAV1人源基因质粒

P2602/pENTR223-PPM1B人源基因质粒

P2603/pENTR223-SRSF10人源基因质粒

P2604/pENTR223-LEPROTL1人源基因质粒

P2605/pENTR223-CRB3人源基因质粒

P2606/pENTR223-TPPP3人源基因质粒

P2607/pENTR223-FAM241B人源基因质粒

P2608/pENTR223-IFT27人源基因质粒

P2609/pENTR223-LINC00260人源基因质粒