噬菌体展示文库构建｜文库筛选技术服务

    噬菌体展示技术为全人源治疗性抗体的研发提供了基础，拓展了定向进化技术在抗体多肽改造筛选方面的应用，对抗体药物的研制具有重要意义。卡梅德生物（KMD Bioscience）在抗体领域研究多年，我们构建的噬菌体展示技术服务涵盖了多种文库类型，能为客户提供基于自有噬菌体抗体文库平台技术制备的多物种单克隆抗体制备服务，如人，鼠，兔，鸡，羊，鹅，猪，牛，马，驴，骆驼，羊驼，鲨鱼等物种来源的单克隆抗体，可根据客户的需求提供定制服务，并提供灵活有效的筛选服务。

    此外，卡梅德生物拥有丰富的抗体工程构造经验，能够进行立体化的抗体上下游服务，包括抗体人源化服务、人源scFV抗体库构建服务、人源Fab抗体文库构建服务、人源抗体噬菌体文库制备服务以及磷酸化抗体定制服务、抗体亲和力成熟服务等，满足不同客户的科研要求。


噬菌体展示技术是一种强大的分子工具，自20世纪80年代末以来，它在生物技术和医学研究中发挥了重要作用。该技术利用噬菌体，一种侵染细菌的病毒，来展示多样的肽或蛋白质。噬菌体展示技术的应用范围广泛，从药物开发到疫苗设计，再到诊断工具的开发。噬菌体展示技术的起源可以追溯到1985年，当时George P. Smith首次展示了可以通过噬菌体表面展示外源肽段。这项技术迅速在分子生物学和蛋白质工程领域获得广泛应用，成为了研究蛋白质-蛋白质相互作用、抗原表位映射和抗体工程的强大工具。
 
图1 噬菌体展示系统的分类

   噬菌体展示技术中，不同类型的噬菌体系统各具特点，主要包括M13噬菌体，T7和T4噬菌体系统。这些系统在蛋白质展示的多样性、稳定性和效率方面有所不同，适用于不同的研究和应用需求。本文将重点探讨M13, T7 和T4噬菌体系统的异同点：

M13噬菌体展示系统：
   M13噬菌体中主要使用pIII和pVIII衣壳蛋白来构建其展示系统。pIII分布在噬菌体颗粒的一端，可在N端的柔性连接区插入分子量较大的外源多肽/蛋白，因此可用来展示分子量较大的蛋白；pVIII主要分布在噬菌体颗粒的两侧，分子量较小，拷贝数较多，所以只适用于展示外源短肽，目前主要应用于筛选低亲和力的配体。

T4噬菌体展示系统：
   T4噬菌体常常用于研究不能被E. Coli分泌的复杂蛋白质，因为其病毒颗粒的组装是在宿主细胞内进行的，故而无需通过分泌途径就可以展示多种多肽或蛋白质。除此之外，T4噬菌体的衣壳蛋白上有两个结合位点，分别是SOC位点和HOC位点，因此该噬菌体具有能将两种不同性质的外源多肽/蛋白相融合并且同时展示在其表面的能力，展示的拷贝数也较多。

T7噬菌体展示系统：
   T7噬菌体常用来构建噬菌体展示系统的衣壳蛋白是10B，与M13相比，其无需经过分泌，可直接使宿主菌进行裂解。因此可用于展示无法在M13系统展示的对分泌过程有抑制作用的多肽/蛋白，此外，T7噬菌体的生产十分迅速，可节省大量时间，便于研究。

下表中根据三种不同的噬菌体展示系统的特点，多样性，稳定性，组装效率方面，进行了对比和阐述：

表1 几种不同的噬菌体展示系统比较：

服务优势

• 可溶抗原的快速制备能力：结合公司现有的重组蛋白表达体系，能够在短时间内制备出高纯度、高生物学活性的可溶抗原蛋白，用以支持噬菌体抗体的免疫及筛选工作；
• 成熟稳定的免疫文库构建技术：目前我们获得的噬菌体一级免疫文库的库容可达108-109，其序列丰度>99%，保证直接筛选获得的抗体亲和力达到nM甚至pM级别；
• 快速可靠的候选抗体筛选及初步鉴定技术：根据不同的抗体药功能需求，开发了多种筛选体系，包括直接筛选法、竞争法、负筛选发、细胞筛选法等。

推荐服务

通过高效的噬菌体展示技术，卡梅德科技能够在短时间内构建出包含百万到亿级别不同抗体分子的文库，确保文库的多样性和覆盖度。公司还结合客户的研究需求，可以设计针对特定抗原、病原体或肿瘤相关抗原的专用文库。卡梅德科技的抗体文库构建不仅包括单克隆抗体的筛选，还能够进行抗体片段的优化，改进亲和力、稳定性和特异性等性能。

卡梅德科技擅长噬菌体展示与筛选技术的开发，利用完善的生物筛选策略和先进的实验室设备，为全球客户提供最佳的噬菌体筛选服务。我们擅长为客户定制个性化方案，以筛选出令客户满意的的Fab抗体。我们擅长筛选大型噬菌体Fab抗体库。在M13噬菌体展示方面，我们将Fab片段与丝状噬菌体表面g3p外壳蛋白融合，从而筛选出能与抗原有较强亲和力的Fab抗体。我们利用基于ELISA的方法，将抗原固定，通过生物筛选，保留与抗原结合的重组噬菌体，洗去结合力弱的噬菌体。将剩余的具有结合能力的重组噬菌体通过酸处理与抗原分离，并侵染大肠杆菌。用辅助噬菌体感染表达噬菌体的大肠杆菌克隆，收集能与抗原结合的Fab噬菌体抗体。通过反复的噬菌体筛选与繁殖，富集出具有抗原结合能力的抗体。在筛选过程中，噬菌体ELISA是我们确认阳性克隆的主要检测方法。