pJYS3_ΔcrtYf大肠敲除质粒

基本信息
名称：pJYS3_ΔcrtYf大肠敲除质粒
别称: Plasmid#85542

原核抗性:	Kan
克隆菌株:	Stbl3
培养条件:	37度

质粒属性

载体宿主：	大肠杆菌
载体用途：	基因敲除
基因种属：
基因类型：
原核抗性：	Kan
真核抗性：
荧光蛋白：

质粒简介
 pJYS3_ΔcrtYf质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported               11982 bp ds-DNA     circular SYN 21-JAN-2018
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..11982
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     rep_origin      2672..2894
                     /label=pSC101 ori
                     /note="low-copy replication origin that requires the Rep101
                     protein"
     CDS             2942..3892
                     /codon_start=1
                     /gene="rep101"
                     /product="RepA protein needed for replication with the 
                     pSC101 origin"
                     /label=Rep101
                     /translation="MSELVVFKANELAISRYDLTEHETKLILCCVALLNPTIENPTRKE
                     RTVSFTYNQYAQMMNISRENAYGVLAKATRELMTRTVEIRNPLVKGFEIFQWTNYAKFS
                     SEKLELVFSEEILPYLFQLKKFIKYNLEHVKSFENKYSMRIYEWLLKELTQKKTHKANI
                     EISLDEFKFMLMLENNYHEFKRLNQWVLKPISKDLNTYSNMKLVVDKRGRPTDTLIFQV
                     ELDRQMDLVTELENNQIKMNGDKIPTTITSDSYLHNGLRKTLHDALTAKIQLTSFEAKF
                     LS-DMQSKHDLNGSFSWLTQKQRTTLENILAKYGRI"
     terminator      6149..6234
                     /gene="Escherichia coli rrnB"
                     /label=rrnB T1 terminator
                     /note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB 
                     gene"
     terminator      6326..6353
                     /label=rrnB T2 terminator
                     /note="transcription terminator T2 from the E. coli rrnB 
                     gene"
     CDS             complement(6397..10299)
                     /codon_start=1
                     /label=Cpf1
                     /translation="MSIYQEFVNKYSLSKTLRFELIPQGKTLENIKARGLILDDEKRAK
                     DYKKAKQIIDKYHQFFIEEILSSVCISEDLLQNYSDVYFKLKKSDDDNLQKDFKSAKDT
                     IKKQISEYIKDSEKFKNLFNQNLIDAKKGQESDLILWLKQSKDNGIELFKANSDITDID
                     EALEIIKSFKGWTTYFKGFHENRKNVYSSNDIPTSIIYRIVDDNLPKFLENKAKYESLK
                     DKAPEAINYEQIKKDLAEELTFDIDYKTSEVNQRVFSLDEVFEIANFNNYLNQSGITKF
                     NTIIGGKFVNGENTKRKGINEYINLYSQQINDKTLKKYKMSVLFKQIL-SDTESKSFVID
                     KLEDDSDVVTTMQSFYEQIAAFKTVEEKSIKETLSLLFDDLKAQKLDLSKIYFKNDKSL
                     TDLSQQVFDDYSVIGTAVLEYITQQIAPKNLDNPSKKEQELIAKKTEKAKYLSLETIKL
                     ALEEFNKHRDIDKQCRFEEILANFAAIPMIFDEIAQNKDNLAQISIKYQNQGKKDLLQA
                     SAEDDVKAIKDLLDQTNNLLHKLKIFHISQSEDKANILDKDEHFYLVFEECYFELANIV
                     PLYNKIRNYITQKPYSDEKFKLNFENSTLANGWDKNKEPDNTAILFIKDDKYYLGVMNK
                     KNNKIFDDKAIKENKGEGYKKIVYKLLPGANKMLPKVFFSAKSIKFYNPSEDILRIRNH
                     STHTKNGSPQKGYEKFEFNIEDCRKFIDFYKQSISKHPEWKDFGFRFSDTQRYNSIDEF
                     YREVENQGYKLTFENISESYIDSVVNQGKLYLFQIYNKDFSAYSKGRPNLHTLYWKALF
                     DERNLQDVVYKLNGEAELFYRKQSIPKKITHPAKEAIANKNKDNPKKESVFEYDLIKDK
                     RFTEDKFFFHCPITINFKSSGANKFNDEINLLLKEKANDVHILSIDRGERHLAYYTLVD
                     GKGNIIKQDTFNIIGNDRMKTNYHDKLAAIEKDRDSARKDWKKINNIKEMKEGYLSQVV
                     HEIAKLVIEYNAIVVFEDLNFGFKRGRFKVEKQVYQKLEKMLIEKLNYLVFKDNEFDKT
                     GGVLRAYQLTAPFETFKKMGKQTGIIYYVPAGFTSKICPVTGFVNQLYPKYESVSKSQE
                     FFSKFDKICYNLDKGYFEFSFDYKNFGDKAAKGKWTIASFGSRLINFRNSDKNHNWDTR
                     EVYPTKELEKLLKDYSIEYGHGECIKAAICGESDKKFFAKLTSVLNTILQMRNSKTGTE
                     LDYLISPVADVNGNFFDSRQAPKNMPQDADANGAYHIGLKGLMLLGRIKNNQEGKKLNL
                     VIKNEEYFEFVQNRNN"
     CDS             complement(10392..11186)
                     /codon_start=1
                     /gene="aph(3')-II (or nptII)"
                     /product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
                     /label=Kan
                     /note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418 
                     (Geneticin(R))"
                     /translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
                     VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
                     SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
                     GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
                     LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
ORIGIN
        1 tcctcacgta gtgccaaagg aacgcgtgcg gtgaccacga cgggcttagc ctttgcctgc
       61 gcttctagtg cttcgatggt ggcttgtgcc tgcgcttgct gcgcctgtag tgcctgttga
      121 gcttcttgta gttgctgttc tagctgtgcc ttggttgcca tgctttaaga ctctagtagc
      181 tttcctgcga tatgtcatgc gcatgcgtag caaacattgt cctgcaactc attcattatg
      241 tgcagtgctc ctgttactag tcgtacatac tcatatttac ctagtctgca tgcagtgcat
      301 gcacatgcag tcatgtcgtg ctaatgtgta aaacatgtac atgcagattg ctgggggtgc
      361 agggggcgga gccaccctgt ccatgcgggg tgtggggctt gccccgccgg tacagacagt
      421 gagcaccggg gcacctagtc gcggataccc cccctaggta tcggacacgt aaccctccca
      481 tgtcgatgca aatctttaac attgagtacg ggtaagctgg cacgcatagc caagctaggc
      541 ggccaccaaa caccactaaa aattaatagt ccctagacaa gacaaacccc cgtgcgagct
      601 accaactcat atgcacgggg gccacataac ccgaaggggt ttcaattgac aaccatagca
      661 ctagctaaga caacgggcac aacacccgca caaactcgca ctgcgcaacc ccgcacaaca
      721 tcgggtctag gtaacactga aatagaagtg aacacctcta aggaaccgca ggtcaatgag
      781 ggttctaagg tcactcgcgc tagggcgtgg cgtaggcaaa acgtcatgta caagatcacc
      841 aatagtaagg ctctggcggg gtgccatagg tggcgcaggg acgaagctgt tgcggtgtcc
      901 tggtcgtcta acggtgcttc gcagtttgag ggtctgcaaa actctcactc tcgctggggg
      961 tcatctctgg ctgaattgga agtcatgggc gaacgccgca ttgagctggc tattgctact
     1021 aagaatcact tggcggcggg tggcgcgctc atgatgtttg tgggcactgt tcgacacaac
     1081 cgctcacagt catttgcgca ggttgaagcg ggtattaaga ctgcgtactc ttcgatggtg
     1141 aaaacatctc agtggaagaa agaacgtgca cggtacgggg tggagcacac ctatagtgac
     1201 tatgaggtca cagactcttg ggcgaacggt tggcacttgc accgcaacat gctgttgttc
     1261 ttggatcgtc cactgtctga cgatgaactc aaggcgtttg aggattccat gttttcccgc
     1321 tggtctgctg gtgtggttaa ggccggtatg gacgcgccac tgcgtgagca cggggtcaaa
     1381 cttgatcagg tgtctacctg gggtggagac gctgcgaaaa tggcaaccta cctcgctaag
     1441 ggcatgtctc aggaactgac tggctccgct actaaaaccg cgtctaaggg gtcgtacacg
     1501 ccgtttcaga tgttggatat gttggccgat caaagcgacg ccggcgagga tatggacgct
     1561 gttttggtgg ctcggtggcg tgagtatgag gttggttcta aaaacctgcg ttcgtcctgg
     1621 tcacgtgggg ctaagcgtgc tttgggcatt gattacatag acgctgatgt acgtcgtgaa
     1681 atggaagaag aactgtacaa gctcgccggt ctggaagcac cggaacgggt cgaatcaacc
     1741 cgcgttgctg ttgctttggt gaagcccgat gattggaaac tgattcagtc tgatttcgcg
     1801 gttaggcagt acgttctcga ttgcgtggat aaggctaagg acgtggccgc tgcgcaacgt
     1861 gtcgctaatg aggtgctggc aagtctgggt gtggattcca ccccgtgcat gatcgttatg
     1921 gatgatgtgg acttggacgc ggttctgcct actcatgggg acgctactaa gcgtgatctg
     1981 aatgcggcgg tgttcgcggg taatgagcag actattcttc gcacccacta aaagcggcat
     2041 aaaccccgtt cgatattttg tgcgatgaat ttatggtcaa tgtcgcgggg gcaaactatg
     2101 atgggtcttg ttgttggcgt cccggagcgt aaaggatcta ggtgaagatc ctttttgata
     2161 atctcatgac caaaatccct taacgtgagt tttcgttcca ctgagcgtca gaccttgatg
     2221 ataccgctgc cttactgggt gcattagcca gtctgaatga cctgtcacgg gataatccga
     2281 agtggtcaga ctggaaaatc agagggcagg aactgctgaa cagcaaaaag tcagatagca
     2341 ccacatagca gacccgccat aaaacgccct gagaagcccg tgacgggctt ttcttgtatt
     2401 atgggtagtt tccttgcatg aatccataaa aggcgcctgt agtgccattt acccccattc
     2461 actgccagag ccgtgagcgc agcgaactga atgtcacgaa aaagacagcg actcaggtgc
     2521 ctgatggtcg gagacaaaag gaatattcag cgatttgccc gagcttgcga gggtgctact
     2581 taagccttta gggttttaag gtctgttttg tagaggagca aacagcgttt gcgacatcct
     2641 tttgtaatac tgcggaactg actaaagtag tgagttatac acagggctgg gatctattct
     2701 ttttatcttt ttttattctt tctttattct ataaattata accacttgaa tataaacaaa
     2761 aaaaacacac aaaggtctag cggaatttac agagggtcta gcagaattta caagttttcc
     2821 agcaaaggtc tagcagaatt tacagatacc cacaactcaa aggaaaagga ctagtaatta
     2881 tcattgacta gcccatctca attggtatag tgattaaaat cacctagacc aattgagatg
     2941 tatgtctgaa ttagttgttt tcaaagcaaa tgaactagcg attagtcgct atgacttaac
     3001 ggagcatgaa accaagctaa ttttatgctg tgtggcacta ctcaacccca cgattgaaaa
     3061 ccctacaagg aaagaacgga cggtatcgtt cacttataac caatacgctc agatgatgaa
     3121 catcagtagg gaaaatgctt atggtgtatt agctaaagca accagagagc tgatgacgag
     3181 aactgtggaa atcaggaatc ctttggttaa aggctttgag attttccagt ggacaaacta
     3241 tgccaagttc tcaagcgaaa aattagaatt agtttttagt gaagagatat tgccttatct
     3301 tttccagtta aaaaaattca taaaatataa tctggaacat gttaagtctt ttgaaaacaa
     3361 atactctatg aggatttatg agtggttatt aaaagaacta acacaaaaga aaactcacaa
     3421 ggcaaatata gagattagcc ttgatgaatt taagttcatg ttaatgcttg aaaataacta
     3481 ccatgagttt aaaaggctta accaatgggt tttgaaacca ataagtaaag atttaaacac
     3541 ttacagcaat atgaaattgg tggttgataa gcgaggccgc ccgactgata cgttgatttt
     3601 ccaagttgaa ctagatagac aaatggatct cgtaaccgaa cttgagaaca accagataaa
     3661 aatgaatggt gacaaaatac caacaaccat tacatcagat tcctacctac ataacggact
     3721 aagaaaaaca ctacacgatg ctttaactgc aaaaattcag ctcaccagtt ttgaggcaaa
     3781 atttttgagt gacatgcaaa gtaagcatga tctcaatggt tcgttctcat ggctcacgca
     3841 aaaacaacga accacactag agaacatact ggctaaatac ggaaggatct gaggttctta
     3901 tggctcttgt atctatcagt gaagcatcaa gactaacaaa caaaagtaga acaactgttc
     3961 accgggcccg tgggtggcta ggcaagttac agaactgatc ggataaaagc agagttatat
     4021 ctgatgaatt gctattagca gtatcgttat cacagcacca acaaagtagt tcagccacag
     4081 gaaaactttc caactgcgat tagcctgttc acaactggca tctgtaatgt tccaaaatcg
     4141 tgcggcatta aatacgtaag ttagaatcgc aatcccgatg atccacgccg gattaggcaa
     4201 agtagtgact aacacagcag ctagtaaata aagtactact gaaagccgaa tggctccacg
     4261 cgccccaatt acagtggcaa ttgagctcag attagcttcc cggtctgcat taacatcctg
     4321 tactgctcca aggatctgac tggccatgcc ccacaagaaa aaggatccca gtgctatcca
     4381 catcgctgct gaaggagatg ttccagtgat cgttgcaccg attaatgcag gtgaagtgaa
     4441 gtgagtagaa gatgttagag catcgataaa ggggcgttct ttaaaacgca atttcggtgc
     4501 tgaataagca atcactgcta gcactgagag tgtcagccat aaagacgaca tccaggtgcc
     4561 aaatatgaaa agaataacta ggaaaggaat tgttgagata gccgaggccc ataacagtgt
     4621 gctgtgggaa cttttcggta gcacggcccc ctcgacgccg cctttgcggg gattacgcat
     4681 atcagattcg taatcaaaaa catcgttgat accatacatg gcgatgttat acgggataag
     4741 aaaaaatacg atgcctagcc aaaacagcca gtcaatctct cctgcattta ataggtaggc
     4801 cagaccaaag gggtaggcgg tattgatcca gctaatgggg cgagatgaca atagaattag
     4861 tcttattttt tccatcatga ctacggcttt tctggctcag attgcgtggt ggtggatcgc
     4921 acccaatgag aactaggaga gtacctagat aaataaaggc cataaaaata tcgctatctt
     4981 gctcattttg tgaaatatcg atgataggga tcaaaattta atgatcgtat gaggtctttt
     5041 gagatggtgt cgttttaggc ggcaatggtt cgggcagtgg tcctgcactg gtatcggcat
     5101 gtaaacgctt aataatattc tcggcagaaa ttaaacacat gggtattcct acacccggga
     5161 cggtggtggc accggaatag aagaggttat tgaccttgcg ggagctattg cgccctctta
     5221 agaaagcgga ctgtctgagg gtatgtgctg gacccagcgc actgcctacc catgaatggt
     5281 agcggtgctc aaaatccgca gggccaatgg tgcgtttgac cacaattcgg tcagtgaggt
     5341 cagggatgcc ggcttgcgta gcaatttgat tgattgcatg tgacgcgatt gtttccacgg
     5401 atgctgaagc cgactgcata tacgcatcac cgtggccgat gctgctagag gccttggtcg
     5461 gaattaaaac aaaaaggttt tcgtatccag caggtgcaac gccgtcttcg gacgttgaag
     5521 gcttggagac ataaatggaa tttgatgcat tgtgggggcg ggtaagttga ggcccgtcga
     5581 aaactacagc aaaatcatct gtccaatctt cactgaagaa aaggttgtga tggtcgagct
     5641 ggggtaactc tccttttacg cccaggagga ttaataccgc tccaattcca ggattgcgat
     5701 tggaccaata tcgttcggga taggttcgaa gttcccgggg aagcagatta ttttctgtat
     5761 ggtgtaggtc gcctgctgaa accacaagat ccgcatctag attttgcact tttctgttgt
     5821 gaagcaagct cacacctgtg gcgcttgtgt tgcccctcga tgaagcagtg ttgatggaaa
     5881 tgacctcaga atcgagttga aactcaaccc cgttttccag cgctaactga tgcagagcgt
     5941 taaccactgc agtaaaacca cctatagggt atttcactcc ctgcaccaaa tcggtatgac
     6001 tcatcaagtg gtacatcgat ggggtagtag tgggtcggga agacaggaag actgctggat
     6061 aggctagatt gacagctagc tcagtcctag gtataatgga tccgaatttc tactgttgta
     6121 gatcaggcaa ccatagggca ggaaatttaa ataaaacgaa aggctcagtc gaaagactgg
     6181 gcctttcgtt ttatctgttg tttgtcggtg aacgctctcc tgagtaggac aaatccgccg
     6241 ggagcggatt tgaacgttgc gaagcaacgg cccggagggt ggcgggcagg acgcccgcca
     6301 taaactgcca ggcatcaaat taagcagaag gccatcctga cggatggcct ttttgcgttt
     6361 ctacaaactc ttaagcttgc atgcctgcag gtcgacttag ttattgcggt tctggacaaa
     6421 ttcaaagtat tcttcgttct taatgacgag attcagcttc ttgccttcct ggttgttctt
     6481 gatgcgaccc aggagcatga gacccttcag accgatgtgg taggcgccgt ttgcatcagc
     6541 gtcctgtggc atgttctttg gagcctggcg ggaatcgaag aagttgccgt tgacgtcggc
     6601 cactggggag atgaggtaat ccagctcggt gccggtcttg gagttgcgca tctgcaggat
     6661 ggtgttgagc acagaggtca gctttgcgaa gaacttcttg tcggattcgc cgcagattgc
     6721 agccttgatg cactcgccgt ggccgtattc gatggagtaa tccttcagga gcttctccag
     6781 ttccttggtt gggtacactt cgcgggtatc ccagttgtgg ttcttgtcgg agttgcggaa
     6841 gttgatgagg cgggagccga aggatgcgat ggtccacttg cccttggctg ccttatcgcc
     6901 gaagttcttg tagtcgaagg agaattcgaa gtagccctta tccaggttgt agcagatctt
     6961 gtcgaacttg gagaagaact cctgggactt ggagacggat tcgtactttg ggtagagctg
     7021 gttgacgaag ccggtcactg ggcagatctt agaggtgaag ccagctggca cgtagtagat
     7081 gatgccggtc tgcttgccca tcttcttgaa ggtctcgaat ggggcggtca gctggtatgc
     7141 acggaggacg ccgccggtct tatcgaattc gttgtccttg aacacgaggt agttcagctt
     7201 ctcgatgagc atcttttcca gcttctggta gacctgcttc tccaccttga agcggccgcg
     7261 cttgaagccg aagttcaggt cttcgaagac cacgattgcg ttgtactcga tcaccagctt
     7321 agcgatttcg tggaccacct gggagaggta gccttccttc atttccttga tgttgttgat
     7381 cttcttccaa tccttgcgag cggaatcgcg gtccttctcg atagcggcca gcttgtcgtg
     7441 gtagttggtc ttcatgcgat cgttgccgat gatgttgaag gtgtcctgct tgatgatgtt
     7501 gcccttgccg tcgaccaggg tgtagtaggc gaggtggcgt tcgccgcgat cgatggacag
     7561 gatgtgcacg tcgttagcct tctccttcag gagcaggttg atttcatcgt tgaacttgtt
     7621 ggcgccggag gacttgaagt tgatggtgat tgggcagtgg aagaagaact tgtcctcggt
     7681 gaagcgctta tccttgatca ggtcgtactc gaacacggat tccttctttg ggttatcctt
     7741 gttcttgttg gcgattgctt ccttggctgg gtgggtgatc ttctttggga tggactgctt
     7801 gcggtagaac agctctgctt cgccgttgag cttgtagacc acatcctgca ggttgcgttc
     7861 gtcgaagagt gccttccagt agagggtgtg caggtttggg cggcccttgg agtaagcgga
     7921 gaagtccttg ttgtagatct ggaagaggta cagcttgccc tggttgacca cggaatcgat
     7981 gtaggactcg gagatgtttt cgaaggtcag cttgtagccc tggttctcca cttcgcggta
     8041 gaattcatcg atggagttgt agcgctgggt atcggagaag cggaagccga agtccttcca
     8101 ctctgggtgc ttggagatgg actgcttgta gaaatcgatg aacttgcggc agtcttcgat
     8161 gttgaactcg aacttttcgt agcccttctg tggggagccg ttcttggtgt gggtggagtg
     8221 gttgcggatg cgcaggatat cttcggatgg gttgtagaac ttgatggact ttgcggagaa
     8281 gaagaccttt gggagcatct tgttagcgcc tgggagcagc ttgtacacga tcttcttgta
     8341 gccctcgccc ttgttttcct tgatggcctt atcgtcgaag atcttgttgt tcttcttgtt
     8401 catcacgccc aggtagtact tatcgtcctt gatgaagagg atggcggtgt tatctggttc
     8461 cttgttcttg tcccagccgt ttgccagggt ggagttctcg aagttgagct tgaacttttc
     8521 atcggagtat ggcttctggg tgatgtagtt gcggatcttg ttgtacagtg ggacgatgtt
     8581 agcgagttcg aagtagcact cttcgaacac caggtagaag tgctcatcct tgtcgaggat
     8641 gttggccttg tcttcggact gggagatgtg gaagatcttc agcttgtgga gcaggttgtt
     8701 ggtctgatcg agcaggtcct tgattgcctt cacatcgtcc tcagcggagg cctggagcag
     8761 atccttcttg ccctggttct ggtacttgat ggagatctgg gccaggttat ccttgttctg
     8821 tgcgatttcg tcgaagatca ttgggattgc agcgaagttt gcgaggatct cttcgaagcg
     8881 gcactgctta tcgatgtcgc ggtgcttgtt gaactcttcg agagccagct tgatggtctc
     8941 gagggacagg tacttagcct tttcggtctt cttggcgatc agctcctgtt ccttcttgga
     9001 tgggttatcg aggttctttg gggcgatctg ctgggtgatg tattccagga ctgcggtgcc
     9061 gatcacggag taatcgtcga agacctgctg ggagagatcg gtcagggact tgtcgttctt
     9121 gaagtagatc ttggagagat ccagcttctg agccttcaga tcgtcgaaga gcagggagag
     9181 ggtctccttg atggacttct cttccacggt cttgaaggct gcgatctgtt cgtagaagga
     9241 ctgcatggtg gtgaccacat cggaatcgtc ctccagcttg tcgatgacga aggacttgga
     9301 ttcggtgtcg gacaggatct gcttgaagag cacggacatc ttgtacttct tcagggtctt
     9361 atcgttgatc tgctgggagt agaggttgat gtactcgttg atgcccttgc gcttggtgtt
     9421 ttcgccgttg acgaacttgc cgccgatgat ggtgttgaac ttggtgatgc cggactggtt
     9481 caggtagttg ttgaagttgg cgatctcgaa cacttcatcg agggagaaga cgcgctggtt
     9541 cacttcagag gtcttgtaat cgatgtcgaa ggtgagctct tcggccaggt ccttcttgat
     9601 ctgctcgtag ttgatagctt ctggggcctt atccttcagg gactcgtact ttgccttgtt
     9661 ttcgaggaac tttggcaggt tatcgtcgac gatgcggtag atgatagagg ttgggatatc
     9721 gttggaggag tacacgttct tgcggttttc gtggaagccc ttgaagtagg tggtccagcc
     9781 cttgaaggac ttgatgatct ccagagcttc atcgatgtcg gtgatgtcgg agttggcctt
     9841 gaagagctcg atgccgttat ccttggactg cttgagccac aggatgagat cggattcctg
     9901 gcccttcttt gcgtcgatca ggttctggtt gaagaggttc ttgaacttct cggaatcctt
     9961 gatgtattcg gagatctgct tcttgatggt atccttagcg gacttgaagt ccttctgcag
    10021 gttatcgtca tcggacttct tgagcttgaa gtagacatcg gagtagttct ggagcaggtc
    10081 ctcggagatg cacacggagg acaggatctc ttcgatgaag aactggtggt acttgtcgat
    10141 gatctgcttt gccttcttgt aatccttagc gcgcttttcg tcatccagga tgaggccgcg
    10201 tgccttgatg ttttcgaggg tcttgccttg ggggatcagc tcaaaacgga gggtcttgga
    10261 cagggagtat ttattcacaa actcttggta gatggacatc gttcaagtcc tttccaattc
    10321 cacacatggt accacacgat gattaattgt aaacagctca ggtcatgatt ccgcgaaccc
    10381 cagagtcccg ctcagaagaa ctcgtcaaga aggcgataga aggcgatgcg ctgcgaatcg
    10441 ggagcggcga taccgtaaag cacgaggaag cggtcagccc attcgccgcc aagctcttca
    10501 gcaatatcac gggtagccaa cgctatgtcc tgatagcggt ccgccacacc cagccggcca
    10561 cagtcgatga atccagaaaa gcggccattt tccaccatga tattcggcaa gcaggcatcg
    10621 ccatgggtca cgacgagatc ctcgccgtcg ggcatccgcg ccttgagcct ggcgaacagt
    10681 tcggctggcg cgagcccctg atgctcttcg tccagatcat cctgatcgac aagaccggct
    10741 tccatccgag tacgtgctcg ctcgatgcga tgtttcgctt ggtggtcgaa tgggcaggta
    10801 gccggatcaa gcgtatgcag ccgccgcatt gcatcagcca tgatggatac tttctcggca
    10861 ggagcaaggt gagatgacag gagatcctgc cccggcactt cgcccaatag cagccagtcc
    10921 cttcccgctt cagtgacaac gtcgagcaca gctgcgcaag gaacgcccgt cgtggccagc
    10981 cacgatagcc gcgctgcctc gtcttggagt tcattcaggg caccggacag gtcggtcttg
    11041 acaaaaagaa ccgggcgccc ctgcgctgac agccggaaca cggcggcatc agagcagccg
    11101 attgtctgtt gtgcccagtc atagccgaat agcctctcca cccaagcggc cggagaacct
    11161 gcgtgcaatc catcttgttc aatcatgcga aacgatcctc atcctgtctc ttgatcagat
    11221 cttgatcccc tgcgccatca gatccttggc ggcaagaaag ccatccagtt tactttgcag
    11281 ggcttcccaa ccttaccaga gggcgcccca gctggcaatt ccggttcgct tgctgtccat
    11341 aaaaccgccc agtctagcta tcgccatgta agcccactgc aagctacctg ctttctcttt
    11401 gcgcttgcgt tttcccttgt ccagatagcc cagtagctga cattcatccg gggtcagcac
    11461 cgtttctgcg gactggcttt ctacgtgttc cgcttccggt gaccgcctcg atgatcgccg
    11521 ggtgggcgtg gcccaaggag gatcatccag ccattcgggg tcgttcactg gttccccttt
    11581 ctgatttctg gcatagaaga acccccgtga actgtgtggt tccgggggtt gctgattttt
    11641 gcgagacttc tcgcgcaatt ccctagctta ggtgaaaaca ccatgaaaca ctagggaaac
    11701 acccatgaaa cacccattag ggcagtaggg cggcttcttc gtctagggct tgcatttggg
    11761 cggtgatctg gtctttagcg tgtgaaagtg tgtcgtaggt ggcgtgctca atgcactcga
    11821 acgtcacgtc atttaccggg tcacggtggg caaagagaac tagtgggtta gacattgttt
    11881 tcctcgttgt cggtggtggt gagcttttct agccgctcgg taaacgcggc gatcatgaac
    11941 tcttggaggt tttcaccgtt ctgcatgcct gcgcgcttca tg
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P1648/lentiMPH v2哺乳编辑质粒

P1650/pLV-dCas9-p300-P2A-PuroR哺乳编辑质粒

P1651/MSP680哺乳编辑质粒

P1804/pCAG Cas9-2A-Citrine哺乳编辑质粒

P1012/lenti MS2-P65-HSF1_Hygro哺乳编辑质粒

P2017/pCMV-ABE6.3哺乳编辑质粒

P2018/pCMV-ABE7.8哺乳编辑质粒

P1874/pCMV-ABE7.9哺乳编辑质粒

P2019/pCMV-ABE7.10哺乳编辑质粒

P1914/pU6-Decoy哺乳编辑质粒

P1915/MSP2135哺乳编辑质粒