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- 详细信息
- 文献和实验
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-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pEF-GFP
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pEF-GFP哺乳表达质粒
别称: pEF-GFP
质粒属性
质粒简介
pEF-GFP是一个哺乳动物细胞中高水平表达质粒，EF1α启动子驱动目的基因和绿色荧光蛋白EGFP融合表达，MCS区域中有EcoRI、KpnI、XmaI和SmaI酶切位点，可以很方便的克隆进目的基因。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5051 bp ds-DNA circular SYN 19-九月-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS Untitled 2
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5051)
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2016年9月19日 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5051
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/note="strong constitutive promoter for human elongation
factor EF-1-alpha"
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/note="EF-1-alpha intron A"
/note="intron upstream of the start codon of human
EF-1-alpha"
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/product="enhanced GFP"
/note="EGFP"
/note="mammalian codon-optimized"
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KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
EFVTAAGITLGMDELYK"
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/note="rabbit beta-globin polyadenylation signal"
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/note="M13 rev"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
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/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(2602..2632)
/note="lac promoter"
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 2647..2668
/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP binding site"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
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/note="SV40 promoter"
/note="SV40 early promoter"
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/note="SV40 origin of replication"
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/note="SV40 poly(A) signal"
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/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
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/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
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EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
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LIKHW"
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/gene="bla"
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ORIGIN
1 gtcgacattg attattgact agatcatcgc gtgaggctcc ggtgcccgtc agtgggcaga
61 gcgcacatcg cccacagtcc ccgagaagtt ggggggaggg gtcggcaatt gaaccggtgc
121 ctagagaagg tggcgcgggg taaactggga aagtgatgtc gtgtactggc tccgcctttt
181 tcccgagggt gggggagaac cgtatataag tgcagtagtc gccgtgaacg ttctttttcg
241 caacgggttt gccgccagaa cacaggtaag tgccgtgtgt ggttcccgcg ggcctggcct
301 ctttacgggt tatggccctt gcgtgccttg aattacttcc acgcccctgg ctgcagtacg
361 tgattcttga tcccgagctt cgggttggaa gtgggtggga gagttcgagg ccttgcgctt
421 aaggagcccc ttcgcctcgt gcttgagttg aggcctggcc tgggcgctgg ggccgccgcg
481 tgcgaatctg gtggcacctt cgcgcctgtc tcgctgcttt cgataagtct ctagccattt
541 aaaatttttg atgacctgct gcgacgcttt ttttctggca agatagtctt gtaaatgcgg
601 gccaagatct gcacactggt atttcggttt ttggggccgc gggcggcgac ggggcccgtg
661 cgtcccagcg cacatgttcg gcgaggcggg gcctgcgagc gcggccaccg agaatcggac
721 gggggtagtc tcaagctggc cggcctgctc tggtgcctgg cctcgcgccg ccgtgtatcg
781 ccccgccctg ggcggcaagg ctggcccggt cggcaccagt tgcgtgagcg gaaagatggc
841 cgcttcccgg ccctgctgca gggagctcaa aatggaggac gcggcgctcg ggagagcggg
901 cgggtgagtc acccacacaa aggaaaaggg cctttccgtc ctcagccgtc gcttcatgtg
961 actccacgga gtaccgggcg ccgtccaggc acctcgatta gttctcgagc ttttggagta
1021 cgtcgtcttt aggttggggg gaggggtttt atgcgatgga gtttccccac actgagtggg
1081 tggagactga agttaggcca gcttggcact tgatgtaatt ctccttggaa tttgcccttt
1141 ttgagtttgg atcttggttc attctcaagc ctcagacagt ggttcaaagt ttttttcttc
1201 catttcaggt gtcgtgagga attctgcagt cgacggtacc gcgggcccgg gatccaccgg
1261 tcgccaccat ggtgagcaag ggcgaggagc tgttcaccgg ggtggtgccc atcctggtcg
1321 agctggacgg cgacgtaaac ggccacaagt tcagcgtgtc cggcgagggc gagggcgatg
1381 ccacctacgg caagctgacc ctgaagttca tctgcaccac cggcaagctg cccgtgccct
1441 ggcccaccct cgtgaccacc ctgacctacg gcgtgcagtg cttcagccgc taccccgacc
1501 acatgaagca gcacgacttc ttcaagtccg ccatgcccga aggctacgtc caggagcgca
1561 ccatcttctt caaggacgac ggcaactaca agacccgcgc cgaggtgaag ttcgagggcg
1621 acaccctggt gaaccgcatc gagctgaagg gcatcgactt caaggaggac ggcaacatcc
1681 tggggcacaa gctggagtac aactacaaca gccacaacgt ctatatcatg gccgacaagc
1741 agaagaacgg catcaaggtg aacttcaaga tccgccacaa catcgaggac ggcagcgtgc
1801 agctcgccga ccactaccag cagaacaccc ccatcggcga cggccccgtg ctgctgcccg
1861 acaaccacta cctgagcacc cagtccgccc tgagcaaaga ccccaacgag aagcgcgatc
1921 acatggtcct gctggagttc gtgaccgccg ccgggatcac tctcggcatg gacgagctgt
1981 acaagtaaag cggccgcact cctcaggtgc aggctgccta tcagaaggtg gtggctggtg
2041 tggccaatgc cctggctcac aaataccact gagatctttt tccctctgcc aaaaattatg
2101 gggacatcat gaagcccctt gagcatctga cttctggcta ataaaggaaa tttattttca
2161 ttgcaatagt gtgttggaat tttttgtgtc tctcactcgg aaggacatat gggagggcaa
2221 atcatttaaa acatcagaat gagtatttgg tttagagttt ggcaacatat gccatatgct
2281 ggctgccatg aacaaaggtg gctataaaga ggtcatcagt atatgaaaca gccccctgct
2341 gtccattcct tattccatag aaaagccttg acttgaggtt agattttttt tatattttgt
2401 tttgtgttat ttttttcttt aacatcccta aaattttcct tacatgtttt actagccaga
2461 tttttcctcc tctcctgact actcccagtc atagctgtcc ctcttctctt atgaagatcc
2521 ctcgacctgc agcccaagct tggcgtaatc atggtcatag ctgtttcctg tgtgaaattg
2581 ttatccgctc acaattccac acaacatacg agccggaagc ataaagtgta aagcctgggg
2641 tgcctaatga gtgagctaac tcacattaat tgcgttgcgc tcactgcccg ctttccagtc
2701 gggaaacctg tcgtgccagc ggatccgcat ctcaattagt cagcaaccat agtcccgccc
2761 ctaactccgc ccatcccgcc cctaactccg cccagttccg cccattctcc gccccatggc
2821 tgactaattt tttttattta tgcagaggcc gaggccgcct cggcctctga gctattccag
2881 aagtagtgag gaggcttttt tggaggccta ggcttttgca aaaagctaac ttgtttattg
2941 cagcttataa tggttacaaa taaagcaata gcatcacaaa tttcacaaat aaagcatttt
3001 tttcactgca ttctagttgt ggtttgtcca aactcatcaa tgtatcttat catgtctgga
3061 tccgctgcat taatgaatcg gccaacgcgc ggggagaggc ggtttgcgta ttgggcgctc
3121 ttccgcttcc tcgctcactg actcgctgcg ctcggtcgtt cggctgcggc gagcggtatc
3181 agctcactca aaggcggtaa tacggttatc cacagaatca ggggataacg caggaaagaa
3241 catgtgagca aaaggccagc aaaaggccag gaaccgtaaa aaggccgcgt tgctggcgtt
3301 tttccatagg ctccgccccc ctgacgagca tcacaaaaat cgacgctcaa gtcagaggtg
3361 gcgaaacccg acaggactat aaagatacca ggcgtttccc cctggaagct ccctcgtgcg
3421 ctctcctgtt ccgaccctgc cgcttaccgg atacctgtcc gcctttctcc cttcgggaag
3481 cgtggcgctt tctcaatgct cacgctgtag gtatctcagt tcggtgtagg tcgttcgctc
3541 caagctgggc tgtgtgcacg aaccccccgt tcagcccgac cgctgcgcct tatccggtaa
3601 ctatcgtctt gagtccaacc cggtaagaca cgacttatcg ccactggcag cagccactgg
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4921 actcttcctt tttcaatatt attgaagcat ttatcagggt tattgtctca tgagcggata
4981 catatttgaa tgtatttaga aaaataaaca aataggggtt ccgcgcacat ttccccgaaa
5041 agtgccacct g
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pEF-GFP哺乳表达质粒
别称: pEF-GFP
| 启动子: | EF1a |
|---|---|
| 复制子: | pBR322 |
| 终止子: | SV40 poly（A） signal |
| 质粒分类: | 哺乳系列质粒；哺乳表达质粒；pEF系列质粒 |
| 质粒大小: | 5051bp |
| 质粒标签: | C-EGFP |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 293T等哺乳细胞 |
| 培养条件: | 37℃，5%CO2 |
| 诱导方式: | 无需诱导，瞬时表达 |
| 5'测序引物: | EF-1α-F（GAATTACTTCCACGCCCCTG） |
| 3'测序引物: | β-globin-R（ATGTCCTTCCGAGTGAGAGAC） |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： | 绿色 |
质粒简介
pEF-GFP是一个哺乳动物细胞中高水平表达质粒，EF1α启动子驱动目的基因和绿色荧光蛋白EGFP融合表达，MCS区域中有EcoRI、KpnI、XmaI和SmaI酶切位点，可以很方便的克隆进目的基因。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5051 bp ds-DNA circular SYN 19-九月-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS Untitled 2
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5051)
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2016年9月19日 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
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/mol_type="other DNA"
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/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
promoter 2727..2922
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 early promoter"
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/note="SV40 ori"
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EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(4921..5025)
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ORIGIN
1 gtcgacattg attattgact agatcatcgc gtgaggctcc ggtgcccgtc agtgggcaga
61 gcgcacatcg cccacagtcc ccgagaagtt ggggggaggg gtcggcaatt gaaccggtgc
121 ctagagaagg tggcgcgggg taaactggga aagtgatgtc gtgtactggc tccgcctttt
181 tcccgagggt gggggagaac cgtatataag tgcagtagtc gccgtgaacg ttctttttcg
241 caacgggttt gccgccagaa cacaggtaag tgccgtgtgt ggttcccgcg ggcctggcct
301 ctttacgggt tatggccctt gcgtgccttg aattacttcc acgcccctgg ctgcagtacg
361 tgattcttga tcccgagctt cgggttggaa gtgggtggga gagttcgagg ccttgcgctt
421 aaggagcccc ttcgcctcgt gcttgagttg aggcctggcc tgggcgctgg ggccgccgcg
481 tgcgaatctg gtggcacctt cgcgcctgtc tcgctgcttt cgataagtct ctagccattt
541 aaaatttttg atgacctgct gcgacgcttt ttttctggca agatagtctt gtaaatgcgg
601 gccaagatct gcacactggt atttcggttt ttggggccgc gggcggcgac ggggcccgtg
661 cgtcccagcg cacatgttcg gcgaggcggg gcctgcgagc gcggccaccg agaatcggac
721 gggggtagtc tcaagctggc cggcctgctc tggtgcctgg cctcgcgccg ccgtgtatcg
781 ccccgccctg ggcggcaagg ctggcccggt cggcaccagt tgcgtgagcg gaaagatggc
841 cgcttcccgg ccctgctgca gggagctcaa aatggaggac gcggcgctcg ggagagcggg
901 cgggtgagtc acccacacaa aggaaaaggg cctttccgtc ctcagccgtc gcttcatgtg
961 actccacgga gtaccgggcg ccgtccaggc acctcgatta gttctcgagc ttttggagta
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1081 tggagactga agttaggcca gcttggcact tgatgtaatt ctccttggaa tttgcccttt
1141 ttgagtttgg atcttggttc attctcaagc ctcagacagt ggttcaaagt ttttttcttc
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1381 ccacctacgg caagctgacc ctgaagttca tctgcaccac cggcaagctg cccgtgccct
1441 ggcccaccct cgtgaccacc ctgacctacg gcgtgcagtg cttcagccgc taccccgacc
1501 acatgaagca gcacgacttc ttcaagtccg ccatgcccga aggctacgtc caggagcgca
1561 ccatcttctt caaggacgac ggcaactaca agacccgcgc cgaggtgaag ttcgagggcg
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1741 agaagaacgg catcaaggtg aacttcaaga tccgccacaa catcgaggac ggcagcgtgc
1801 agctcgccga ccactaccag cagaacaccc ccatcggcga cggccccgtg ctgctgcccg
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1921 acatggtcct gctggagttc gtgaccgccg ccgggatcac tctcggcatg gacgagctgt
1981 acaagtaaag cggccgcact cctcaggtgc aggctgccta tcagaaggtg gtggctggtg
2041 tggccaatgc cctggctcac aaataccact gagatctttt tccctctgcc aaaaattatg
2101 gggacatcat gaagcccctt gagcatctga cttctggcta ataaaggaaa tttattttca
2161 ttgcaatagt gtgttggaat tttttgtgtc tctcactcgg aaggacatat gggagggcaa
2221 atcatttaaa acatcagaat gagtatttgg tttagagttt ggcaacatat gccatatgct
2281 ggctgccatg aacaaaggtg gctataaaga ggtcatcagt atatgaaaca gccccctgct
2341 gtccattcct tattccatag aaaagccttg acttgaggtt agattttttt tatattttgt
2401 tttgtgttat ttttttcttt aacatcccta aaattttcct tacatgtttt actagccaga
2461 tttttcctcc tctcctgact actcccagtc atagctgtcc ctcttctctt atgaagatcc
2521 ctcgacctgc agcccaagct tggcgtaatc atggtcatag ctgtttcctg tgtgaaattg
2581 ttatccgctc acaattccac acaacatacg agccggaagc ataaagtgta aagcctgggg
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3163/pCMV-SPORT6-JTB人源基因质粒 |
| P3164/pCMV-SPORT6-THEM6人源基因质粒 |
| P3165/pCMV-SPORT6-TOMM20人源基因质粒 |
| P3166/pCMV-SPORT6-TXN人源基因质粒 |
| P3167/pCMV-SPORT6-SRSF7人源基因质粒 |
| P3168/pCMV-SPORT6-MYL6（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3169/pCMV-SPORT6-TMEM109人源基因质粒 |
| P3170/pCMV-SPORT6-AHNAK人源基因质粒 |
| P3171/pCMV-SPORT6-CIRBP（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3172/pCMV-SPORT6-YEATS4（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3173/pCMV-SPORT6-RAB13人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
蛋白转位至自噬体膜，在荧光显微镜下形成多个明亮的绿色荧光斑点，一个斑点相当于一个自噬体，可以通过计数来评价自噬活性的高低。 mRFP-GFP-LC3 双荧光自噬指示体系： mRFP-GFP-LC3 融合蛋白的病毒产品 mRFP 用于标记及追踪 LC3，GFP 的减弱可指示溶酶体与自噬小体的融合形成自噬溶酶体。由于 GFP 荧光蛋白对酸性敏感(pH 敏感)，当自噬体与溶酶体融合后 GFP 荧光发生淬灭,而 mRFP 相对稳定，因此只能检测到红色荧光。 1. 哺乳动物 LC3 表达质粒
lf2003128245 本人手上有个慢病毒的质粒，目的基因是通过SalI酶切位点插入的，我想将这个基因切下来重新构建，希望有经验的大侠能够指点，可以选择些什么样的质粒呀，最好是带有GFP标记的非病毒质粒，还有个问题请教就是，病毒载体是不是不需要类似于G418筛选的标记呀？如果我找到个质粒，将这个基因连上去之后，怎么才能鉴别/筛选目的基因正反向的问题？谢谢了！ fjxie 目的基因是通过SalI酶切位点插入的，我想将这个基因
作为细胞生物学专业的博士生，在基因功能研究上已经有五年的经验了，今天我给大家讲讲其中经常用到并且非常重要的一种技术--慢病毒包装的过表达体系。下面我就从引物设计，慢病毒表达质粒构建等方面详细讲述。下面以 plex-MCS 载体为例。1. 选择酶切位点，为了避免移码突变，上游的酶切位点选择起始密码子 ATG 前面的 spel，下游选择 xho1。2. 构建方法的选择。连接法对于连接法，首先设计引物将目的基因 PCR 出来，即酶切位点加基因引物，此时应注意，为了防止酶切将基因破坏，通常习惯在两端
pEF-GFP哺乳表达质粒
￥100 - 1000
